本发明专利技术属于生物制药技术领域，公开了一种季节性甲型流感通用病毒样颗粒及其制备方法与应用，具体公开了一种重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:4所示。本发明专利技术提供的重组蛋白是通过对人源H1N1和H3N2亚型流感病毒HA、NA蛋白的氨基酸序列进行筛选和分析，利用mosaic疫苗设计工具并通过遗传算法设计一种多价疫苗抗原集，具有较好的免疫原性，其CTL抗原表位较丰富，能够在昆虫细胞中高效表达。能够在昆虫细胞中高效表达。
【技术实现步骤摘要】
一种季节性甲型流感通用病毒样颗粒及其制备方法与应用
[0001]本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种季节性甲型流感通用病毒样颗粒及其制备方法与应用。
技术介绍
[0002]流感是严重危害人民生命健康的重要传染病，每年流感季节性流行在全球可导致300万～500万重症病例，29万～65万例呼吸道疾病相关死亡。接种疫苗是预防流感最经济有效的手段。近年来，国外已有一些新型流感疫苗陆续上市，多项临床研究证实其能进一步提高保护效果。目前国内上市的流感疫苗均为传统鸡胚流感疫苗，其针对特殊人群和特定病毒株等的有效性尚待改善，开发新一代多价疫苗设计平台或者对流感病毒有广谱作用且提供持续免疫力的新型疫苗成为了迫切需求。
[0003]Mosaic蛋白疫苗是利用一个同源蛋白质库经过多轮重组比对获得的重组蛋白，其与天然蛋白非常相似，但对9～12个氨基酸的短肽有最大的覆盖率，因此排除了非天然和稀有“k
‑
mers”，是目的蛋白最有代表性的变异体，以其制备的疫苗对异源毒株具有更好的交叉保护效果。该方法首先应用于HIV，但也可以应用于其他可变病原体，例如流感病毒。
[0004]病毒样颗粒(VLPs)是通过将编码病毒结构蛋白的基因插入到表达载体中，再转入原核或真核细胞中进行表达和自行组装而获得的高度结构化的空心蛋白颗粒，在形态上类似于病毒的蛋白颗粒，属于基因工程疫苗中的一种。VLPs不存在任何病毒遗传物质，不能复制，也不具备感染能力。
[0005]目前，我国上市的疫苗均以鸡胚为生产基质，由于依赖于鸡胚供应，因此在流感大流行或缺乏培育流感病毒所需的鸡胚的情况下，流感疫苗产能受到极大限制，同时部分疫苗病毒并不适合在鸡胚中生长或在鸡胚培养过程中可能会发生适应性突变引起疫苗病毒和循环病毒之间的不匹配，从而影响成品疫苗的效果,具有广谱性小、有效性低、持久性差等问题。而当前的一些流感病毒样颗粒中包含的流感结构蛋白成份均为完整的天然蛋白结构，例如天然HA蛋白和M1蛋白等共表达或共感染形成病毒样颗粒，这样的病毒样颗粒免疫原性高，但产生的免疫谱狭窄，对不同的同源毒株甚至异源毒株不能起到交叉保护作用。
技术实现思路
[0006]本专利技术第一方面的目的，在于提供一种重组蛋白。
[0007]本专利技术第二方面的目的，在于提供一种编码本专利技术第一方面的重组蛋白的核酸分子。
[0008]本专利技术第三方面的目的，在于提供与本专利技术第二方面的核酸分子相关的生物材料。
[0009]本专利技术第四方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的的重组蛋白在制备病毒样颗粒中的应用。
[0010]本专利技术第五方面的目的，在于提供一种病毒样颗粒。
[0011]本专利技术第六方面的目的，在于提供本专利技术第五方面的病毒样颗粒的制备方法。
[0012]本专利技术第七方面的目的，在于提供本专利技术第五方面的病毒样颗粒或第六方面的制备方法在制备甲型流感病毒疫苗中的疫苗。
[0013]本专利技术第八方面的目的，在于提供一种甲型流感病毒样颗粒疫苗。
[0014]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0015]本专利技术的第一个方面，提供一种重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。
[0016]本专利技术第二个方面，在于提供一种编码本专利技术第一方面的重组蛋白的核酸分子。
[0017]优选地，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所示。
[0018]本专利技术第三个方面，在于提供与本专利技术第二方面的核酸分子相关的生物材料，所述生物材料为(1)～(3)中任一种；
[0019](1)表达盒，含有本专利技术第二方面的核酸分子；
[0020](2)重组载体，含有本专利技术第二方面的核酸分子或(1)中的表达盒；
[0021](3)重组细胞，含有本专利技术第二方面的核酸分子、(1)中的表达盒或(2)中的重组载体。
[0022]优选地，所述重组载体为质粒载体、病毒载体或细胞载体。
[0023]优选地，所述质粒载体可以是任选的质粒，所述病毒载体可以任选的病毒，所述细胞载体不包括繁殖材料。
[0024]优选地，所述细胞为昆虫细胞。
[0025]进一步优选地，所述昆虫细胞为Sf9昆虫细胞。
[0026]本专利技术第四个方面，在于提供本专利技术第一方面的重组蛋白在制备病毒样颗粒中的应用。
[0027]提供本专利技术第二方面的核酸分子在制备病毒样颗粒中的应用。
[0028]提供本专利技术第三方面的生物材料在制备病毒样颗粒中的应用。
[0029]提供本专利技术第五个方面，在于提供一种病毒样颗粒，所述病毒样颗粒包括：
[0030](a1)H1亚型流感病毒H1N1血凝素蛋白HA、H1亚型流感病毒H1N1神经氨酸酶蛋白NA和甲型流感病毒基质蛋白M1；和/或
[0031](b1)H3亚型流感病毒H3N2血凝素蛋白HA、H3亚型流感病毒H3N2神经氨酸酶蛋白NA和甲型流感病毒基质蛋白M1。
[0032]优选地，(a1)的病毒样颗粒命名为H1N1病毒样颗粒。
[0033]优选地，(b1)的病毒样颗粒命名为H3N2病毒样颗粒。
[0034]优选地，所述H1亚型流感病毒H1N1血凝素蛋白HA的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0035]优选地，所述H1亚型流感病毒H1N1神经氨酸酶蛋白NA的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0036]优选地，所述H3亚型流感病毒H3N2血凝素蛋白HA的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
[0037]优选地，所述H3亚型流感病毒H3N2神经氨酸酶蛋白NA的氨基酸序列如SEQ ID NO:
4所示。
[0038]优选地，所述甲型流感病毒基质蛋白M1为甲型流感病毒亚型株的基质蛋白M1中的一种。
[0039]进一步优选地，所述甲型流感病毒基质蛋白M1的核苷酸序列为SEQ ID NO:9所示。
[0040]本专利技术第六个方面，在于提供本专利技术第五方面的病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0041]S1、分别合成H1亚型流感病毒H1N1血凝素蛋白HA、H1亚型流感病毒H1N1神经氨酸酶蛋白NA、H3亚型流感病毒H3N2血凝素蛋白HA、H3亚型流感病毒H3N2神经氨酸酶蛋白NA和甲型流感病毒基质蛋白M1的基因；
[0042]S2、将步骤S1合成的基因分别插入到昆虫表达载体中，转化含有重组杆状病毒基因组的大肠杆菌10Bac感受态细胞，提取阳性质粒，得到整合了步骤S1所述基因的重组杆状病毒Bacmid质粒；
[0043]S3、将步骤S2制得的重组杆状病毒Bacmid质粒分别转染昆虫细胞，得到重组杆状病毒；
[0044]S4、将步骤S3制得的整合了H1亚型流感病毒H1N1血凝素蛋白HA本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。2.编码权利要求1所述重组蛋白的核酸分子，所述核酸分子的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所示。3.与权利要求2所述的核酸分子相关的生物材料，所述生物材料为(1)～(3)中任一种；(1)表达盒，含有权利要求2所述的核酸分子；(2)重组载体，含有权利要求2所述的核酸分子或(1)中表达盒；(3)重组细胞，含有权利要求2所述的核酸分子、(1)中表达盒或(2)中重组载体。4.(4)～(6)中任一项在制备病毒样颗粒中的应用；(4)权利要求1所述的重组蛋白；(5)权利要求2所述的核酸分子；(6)权利要求3所述的生物材料。5.一种病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒包括：(a1)H1亚型流感病毒H1N1血凝素蛋白HA、H1亚型流感病毒H1N1神经氨酸酶蛋白NA和甲型流感病毒基质蛋白M1；和/或(b1)H3亚型流感病毒H3N2血凝素蛋白HA、H3亚型流感病毒H3N2神经氨酸酶蛋白NA和甲型流感病毒基质蛋白M1。6.权利要求5所述的病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：S1、分别合成H1亚型流感病毒H1N1血凝素蛋白HA、H1亚型流感病毒H1N1神经氨酸酶蛋白NA、H3亚型流感病毒H3N2血凝素蛋白HA、H3亚型流感病毒H3N2神经氨酸酶蛋白NA和甲型流感病毒基质蛋白M1的基因；S2、将步骤S1合成的基因分别插入到昆虫表达载体中，转化含有重组杆状病毒基因组的大肠杆菌10Bac感受态细胞，提取阳性质粒，得到整合了步骤S1所述基因的重组杆状病毒Bacmid质粒；S3、将步骤S2制得的重组杆状病毒Bacmid质粒分别转染昆虫细胞，得到重组杆状病毒；S4、将步骤S3制得的整合了H1亚型流感病毒H1N1血凝素蛋白HA基因的重组杆状病毒、整合了H1亚型流感病毒H1N1神经氨酸酶蛋白NA基因的重组杆状病毒和整合了甲型流感病毒基质蛋白M1基因的重组杆状病毒按照一定比例转染至昆虫细胞，培养得到病毒样颗粒，命名为H1N1病毒样颗粒；和/或将步骤S3制得的整合了H3亚型流感病毒H3N2血凝素蛋白HA基因的重组杆状病毒、整合了H3亚型流感病毒H3N2神经氨酸酶蛋白NA基因的重组杆状病毒和整合了甲型...
【专利技术属性】
技术研发人员：舒跃龙，刘雪洁，赵天旖，汪亮亮，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。