用于检测细菌中CYP4F2同源酶及检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，本发明专利技术提供用于检测细菌中CYP4F2同源酶及检测试剂盒。基于筛选到的来自肠道细菌 Dorea formicigenerans ATCC 27755的药物代谢酶CYP4F2的同源酶基因：CYP4F2同源酶cyp4f2_df基因。其基因序列如 SEQ ID NO.1 所示，找到了具有特异性且定量效果理想的引物对组合，有效针对了CYP4F2同源酶cyp4f2_df基因进行特异性扩增，并设计了检测试剂盒。发明专利技术的试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型基因扩增仪，灵敏度高，鉴定快速准确、稳定性好，具有良好的应用前景，且具有高度产业化利用价值。业化利用价值。业化利用价值。

【技术实现步骤摘要】
用于检测细菌中CYP4F2同源酶及检测试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于检测细菌中CYP4F2同源酶及检测试剂盒。

技术介绍

[0002]随着人类微生物组计划的实施，药物微生物组学成为当前生命科学和医学的研究热点。药物微生物组学是药物基因组学的重要扩展和补充，致力于研究药物与微生物之间的相互作用及其与药物效应之间的关系。随着高通量测序和宏基因组学等新研究方法的不断发展和应用，药物微生物组学取得了新的突破，基于种属和基因水平上展开研究，发现肠道微生物的组成因人而异，但其基因所编码的酶代谢等功能却相对稳定。
[0003]肠道菌群是近年来生命科学研究领域的热点，而在肠道菌群的研究中，肠道菌群与药物相互作用的研究方向也越来越受到关注。
[0004]在临床治疗中药物的安全性与有效性是关键问题，研究表明，人体微生物与药物的疗效、不良反应等显著相关。肠道微生物在药物代谢中发挥重要作用，口服药物可以通过上消化道、小肠和大肠，从而不可避免地与肠道微生物发生交互作用，故了解肠道微生物与药物之间复杂的相互作用具有重要意义。许多研究揭示了药物和肠道菌群之间复杂且广泛的相互作用，如图1所示：药物会对肠道菌群结构产生影响，肠道菌群又能够代谢药物，通过改变药物的化学结构来影响药物的生物利用度和活性，可以将药物代谢为不同活性、毒性和生物利用度的代谢产物，进而影响药物的疗效和安全性。
[0005]肠道细菌对药物的影响与肝药酶有所不同，人体内代谢药物的主要酶是细胞色素P450超家族(Cytochrome P450 proteins,CYP)，它们是一类主要存在于肝脏、肠道中的单加氧酶，多位于细胞内质网上，催化多种内、外源物质的(包括大多数临床药物)代谢。肝脏中的酶通常会发生氧化和结合反应，而肠道微生物则主要通过水解和还原反应来改变药物结构。肠道微生物主要影响药物转运至目标组织，通过胆道系统排入肠腔，或经肾脏排泄到尿液中。
[0006]当前，已有较多的研究证实细胞色素P450超家族是人体内代谢药物的主要酶，但利用肠道细菌中CYP4F2同源酶对药物代谢发挥作用目前还未见文献报道。本专利技术中肠道菌Dorea formicigenerans ATCC 27755经证明含有药物代谢酶CYP4F2同源酶的产生基因。该细菌能够参与CYP4F2底物药物的代谢，并且可能在人体内发挥作用。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种用于肠道细菌Dorea formicigenerans ATCC 27755的CYP4F2同源酶的基因引物对及试剂盒。本专利技术系统性地在人类微生物组计划中发现了一系列药物代谢酶CYP产生基因后，特异性筛选到来自肠道细菌Dorea formicigenerans ATCC 27755的CYP4F2同源酶的基因cyp4f2_df，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]一种用于CYP4F2同源酶基因的检测方法，其特征在于采用PCR技术检测，其中所述
的包括如下至少一组引物对：
[0009]第一组：如SEQ ID NO.2所示的上游引物，如SEQ ID NO.3所示的下游引物；
[0010]第二组：如SEQ ID NO.4所示的上游引物，如SEQ ID NO.5所示的下游引物；
[0011]第三组：如SEQ ID NO.6所示的上游引物，如SEQ ID NO.7所示的下游引物；
[0012]第四组：如SEQ ID NO.8所示的上游引物，如SEQ ID NO.9所示的下游引物；
[0013]第五组：如SEQ ID NO.10所示的上游引物，如SEQ ID NO.11所示的下游引物；
[0014]第六组：如SEQ ID NO.12所示的上游引物，如SEQ ID NO.13所示的下游引物；
[0015]第七组：如SEQ ID NO.14所示的上游引物，如SEQ ID NO.15所示的下游引物；
[0016]第八组：如SEQ ID NO.16所示的上游引物，如SEQ ID NO.17所示的下游引物；
[0017]第九组：如SEQ ID NO.18所示的上游引物，如SEQ ID NO.19所示的下游引物；
[0018]第十组：如SEQ ID NO.20所示的上游引物，如SEQ ID NO.21所示的下游引物。
[0019]进一步地，所述来自于肠道细菌Dorea formicigenerans ATCC 27755的CYP4F2同源酶基因，其序列如SEQ ID NO.1所示。
[0020]一种用于检测CYP4F2同源酶基因的试剂盒，包括至少一组上述引物对。
[0021]进一步地，所述试剂盒还包括DNA模板和PCR扩增反应试剂，即还包括PCR扩增所需的PCR缓冲液，dNTP，Taq酶等。
[0022]一种用于检测细菌中CYP4F2同源酶基因的方法，包括以下步骤：
[0023]步骤1，获取肠道细菌Dorea formicigenerans ATCC 27755培养液；
[0024]步骤2，以步骤1的菌液DNA为模板，以上述引物对为引物进行PCR扩增；
[0025]步骤3，将PCR扩增的产物进行核酸电泳检测cyp4f2_df基因条带。
[0026]人体中的药物代谢酶可以分为Ⅰ相代谢酶和Ⅱ相代谢酶。Ⅰ相代谢阶段是极性官能团的安装和暴露阶段，I相代谢酶进行氧化、还原或水解反应，生成羟基、环氧化物、硫醇和胺，最大的一类I相代谢酶是细胞色素P450单加氧酶是人体内代谢药物的主要酶，它们是一类主要存在于肝脏、肠道中的单加氧酶，多位于细胞内质网上，催化多种内、外源物质的(包括大多数临床药物)代谢。Ⅱ相代谢阶段是结合阶段，Ⅱ相代谢酶将葡萄糖醛酸基，甲基，乙酰基，磺酰基和谷氨酸基团附加到药物或药物代谢物上。大多数肠道菌群产生的代谢酶中和人具有相似功能的是属于Ⅰ相代谢酶的氧化还原酶中的细胞色素P450酶。
[0027]当前，已有较多的研究证实细胞色素P450超家族是人体内代谢药物的主要酶，但利用肠道细菌中CYP4F2同源酶对药物代谢发挥作用目前还未见文献报道。本专利技术中肠道菌Dorea formicigenerans ATCC 27755经证明含有药物代谢酶CYP4F2同源酶的产生基因。该细菌能够参与CYP4F2底物药物的代谢，并且可能在人体内发挥作用
[0028]本专利技术的有益效果是：本专利技术基于CYP4F2药物代谢酶，首次筛选到了Dorea formicigenerans ATCC 27755具有CYP4F2同源酶基因，该酶是全新的蛋白，本专利技术验证了该细菌中CYP4F2同源蛋白对其底物依巴斯汀的代谢作用，设计并获得此同源蛋白的检测引物和试剂盒，本专利技术有效针对了肠道细菌Dorea formicigenerans ATCC 27755的CYP4F2同源酶基因进行特异性扩增。本专利技术的试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪，灵敏度高，定量快速准确、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CYP4F2同源酶基因cyp4f2_df，其核苷酸序列如 SEQ ID NO.1 所示。2.根据权利要求1所述的CYP4F2同源酶基因cyp4f2_df，其特征在于所述的cyp4f2_df来自于肠道细菌 Dorea formicigenerans ATCC 27755。3.一种用于细菌中权利要求1所述的CYP4F2同源酶基因cyp4f2_df的检测方法，其特征在于采用 PCR 技术检测，其中所述的PCR方法包括如下至少一组引物对：第一组：如 SEQ ID NO.2 所示的上游引物，如 SEQ ID NO.3 所示的下游引物；第二组：如 SEQ ID NO.4 所示的上游引物，如 SEQ ID NO.5 所示的下游引物；第三组：如 SEQ ID NO.6 所示的上游引物，如 SEQ ID NO.7 所示的下游引物；第四组：如 SEQ ID NO.8 所示的上游引物，如 SEQ ID NO.9 所示的下游引物；...

【专利技术属性】
技术研发人员：李菁，薛凤，封硕，
申请(专利权)人：长沙都正生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：