一种对CRISPR/Cas12a酶进行绝对测活的方法技术

本发明专利技术涉及生物制品技术领域，且公开了一种对CRISPR/Cas12a酶进行绝对测活的方法，包括以下步骤：S1：准备仪器、试剂、样本；仪器包括罗氏480荧光定量PCR仪；试剂包括ssDNA探针、Cry1C

【技术实现步骤摘要】
一种对CRISPR/Cas12a酶进行绝对测活的方法


[0001]本专利技术涉及生物制品
，具体为一种对CRISPR/Cas12a酶进行绝对测活的方法。

技术介绍

[0002]CRISPR/Cas系统(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat and CRISPR
‑
Associated Protein)是细菌和古细菌的一种适应性免疫系统，可以保护它们免受噬菌体、病毒和质粒的入侵。随着对CRISPR/Cas系统的研究深入，人们发现了CRISPR/Cas12a(Cpf1)。
[0003]CRISPR/Cas12a(Cpf1)是一种RNA指导的核酸切割酶。Cas12a蛋白可以特异性识别双链DNA中的PAM序列(富含T碱基的序列)，使PAM序列的下游靶双链DNA序列出现局部熔化解链，从而与特异性的crRNA互补结合形成R环结构，Cas12a蛋白的RuvC核酸酶结构域即可对双链DNA进行特异性切割。完成双链DNA的切割后，Cas12a PAM远端仍具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对CRISPRCas12a酶进行绝对测活的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：准备仪器、试剂、样本；仪器包括罗氏480荧光定量PCR仪；试剂包括ssDNA探针、Cry1C
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crRNA、RNase抑制剂、Cas12a酶；样本包括δ
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内毒素Cry1C基因dsDNA；S2：将δ
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内毒素Cry1C基因dsDNA提前制备好，稀释到5ng/μL，并分装后
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20℃放置备用；S3：Cry1C
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crRNA制备Cry1C
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crRNA制备通过合成Cry1C
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crRNA后，再HPLC纯化，合成的crRNA为干粉状态，10000rpm离心5min后，根据每OD的nmol数(或者COA)加入相应体积的无RNase水，室温静置2min，涡旋混匀离心后制备成10μM的工作液，分装到0.2mLPCR管中，每管20μL，
‑
80℃放置备用；S4：ssDNA探针制备ssDNA探针制备通过合成ssDNA后，再HPLC纯化，合成的ssDNA为干粉状态，10000rpm离心5min后，根据每OD的nmol数(或者COA)加入相应体积的1
×
TEbuffer，室温静置2min，涡旋混匀离心后制备成100μM的母液，
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20℃放置。取探针母液5μL，加入45μL的1
×
TEbuffer，混匀离心后为10μM的工作液备用；S5：CRISPR/Cas12a荧光反应体系配制在其余组分过量的情况下，Cas12a酶荧光反应体系中加入不同终浓度(2倍浓度梯度)的Cas12a酶，每个浓度梯度进行3复孔检测，以不加Cas12a酶的反应孔为空白对照；S6：配制好的反应体系，涡旋混匀离心后，加入96孔PCR板中，光学贴膜密封后，在罗氏48...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨林，王笑影，任黎明，张惠丹，
申请(专利权)人：苏州乾康基因有限公司，
类型：发明
国别省市：