一种一步法RT-qPCR检测肺癌ROS1、RET、ALK融合基因的方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种一步法RT

【技术实现步骤摘要】
一种一步法RT
‑
qPCR检测肺癌ROS1、RET、ALK融合基因的方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及海洋监测
，具体为一种一步法RT
‑
qPCR检测肺癌ROS1、RET、ALK融合基因的方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]肺癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤之一，近年来肺癌的发病率和致死率均迅速上升，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85％左右。近几年，在肺癌分子靶向治疗研究领域，研究热点主要集中在EGFR、ALK、ROS1、RET、KRAS等位点上，这些基因的突变或者融合与靶向药治疗相关，其中ALK、ROS1、RET基因融合患者可以从酪氨酸激酶抑制剂治疗中获益。《非小细胞肺癌NCCN指南》明确指出，在进行靶向治疗前需对基因突变状态进行检测。因此对NSCLC患者多基因突变位点联合检测可为患者提供更精准的治疗，
[0003]目前现有的二代测序也能检测上述融合基因，但NGS价格昂贵，实验操作复杂，数据分析处理繁琐，检测周期较长。同时肺癌患者取样较难，样本量少，一般不能满足逐一筛查；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种一步法RT
‑
qPCR检测肺癌ROS1、RET、ALK融合基因的试剂盒，其特征在于：包括试剂盒组成成分：5
×
RT
‑
qPCR MasterMix、酶混合液、8联PCR管反应条；5
×
RT
‑
qPCRMasterMix包含：dNTP、镁离子、反应所需要的盐以及缓冲离子；酶混合液包含：逆转录酶、FastTaq酶、UDG酶；8联PCR管反应条内包含引物探针混合液，具体由6组融合基因引物探针混合液以及人内参基因(GAPDH基因)引物探针混合液组成。2.根据权利要求1所述的一种一步法RT
‑
qPCR检测肺癌ROS1、RET、ALK融合基因的试剂盒，其特征在于：所述ROS1融合基因、RET融合基因、ALK融合基因具体融合位点，优化后分组以及引物探针序列如下：ROS1融合基因组合1上游外基因为CD74显子为E6下游外基因为ROS1显子为E32ROS1融合基因组合1上游外基因为SLC34A2显子为E4下游外基因为ROS1显子为E32ROS1融合基因组合1上游外基因为SLC34A2显子为E13下游外基因为ROS1显子为E32ROS1融合基因组合2上游外基因为CD74显子为E6下游外基因为ROS1显子为E34ROS1融合基因组合2上游外基因为EZR显子为E10下游外基因为ROS1显子为E34RET3融合基因组合3上游外基因为CCDC6显子为E1下游外基因为RET显子为E12RET3融合基因组合3上游外基因为CCDC6显子为E2下游外基因为RET显子为E12RET3融合基因组合3上游外基因为NCOA4显子为E8下游外基因为RET显子为E12RET4融合基因组合1上游外基因为CCDC6显子为E8下游外基因为RET显子为E11；ALK融合基因组合5上游外基因为NPM1显子为E5下游外基因为ALK显子为E20；ALK融合基因组合5上游外基因为NPM4显子为E6下游外基因为ALK显子为E20；ALK融合基因组合6上游外基因为NPM4显子为E13下游外基因为ALK显子为E20；ALK融合基因组合6上游外基因为EML4显子为E20下游外基因为ALK显子为E20。3.根据权利要求2所述的一种一步法RT
‑
qPCR检测肺癌ROS1、RET、ALK融合基因的试剂盒，其特征在于：1)GAPDH内参基因：CY5荧光上游引物：5
’‑
CAGGTCAACTGGTATCGTGAC
‑3’
下游引物：5
’‑
CCACTAGAGGGGGATTGTGA
‑3’
荧光探针：5
’‑
CY5
‑
CTACGCAGTAGCACTGCCATCG
‑‑
BHQ1
‑3’
2)ROS1融合基因组合1：FAM荧光上游引物：5
’‑
GTTTCAACTGTGCAGGCACTC
‑3’
上游引物：5
’‑
TCTAGTTTTTCTTGTGCTGCC
‑3’
上游引物：5
’‑
GGCTCCTGATACCTCTGTTAAC
‑3’
下游引物：5
’‑
TCAGCTTTCACCACTGTATTG
‑3’
荧光探针：5
’‑
FAM
‑
AGTCCCAAAACCAGGCATTCCCA
‑
BHQ1
‑3’
3)ROS1融合基因组合2：FAM荧光上游引物：5
’‑
GTTTGCATGCGCCCGCACTC
‑3’<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王笑影，杨林，张惠丹，
申请(专利权)人：苏州乾康基因有限公司，
类型：发明
国别省市：