IRF7在皮肤纤维瘤中的应用制造技术

本发明专利技术涉及IRF7的医药用途，具体涉及IRF7皮肤纤维瘤中的应用。本发明专利技术提供IRF7的表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤纤维瘤疾病，本发明专利技术还提供IRF7抑制剂在制备用于治疗皮肤纤维瘤药物中的应用。提供了一种更加简单、有效地表明皮肤纤维瘤临床指标，为皮肤纤维瘤的发生提供早期依据。表明IRF7在皮肤纤维瘤发病过程中发挥重要作用，可以作为诊疗皮肤纤维瘤的新的分子标记和药物靶点。新的分子标记和药物靶点。新的分子标记和药物靶点。

【技术实现步骤摘要】
IRF7在皮肤纤维瘤中的应用


[0001]本专利技术涉及IRF7的医药用途，具体涉及IRF7在皮肤纤维瘤中的应用。

技术介绍

[0002]皮肤纤维瘤（dermatofibroma，DF），又名良性纤维组织细胞瘤（benign fibrous histiocytoma ，BFH），皮肤纤维瘤是成纤维细胞或组织细胞灶性增生引致的一种真皮内的良性肿瘤，是一种常见的皮肤病变，约占一个皮肤病理学实验室收到的皮肤病变标本的 3%。 它的发生机制尚不明确，多认为是微小皮肤损伤所引起的一种反应性纤维增生。本病好发于中青年，女性多见，可见于身体任何部位，但以四肢较为多见，常表现为单发褐色皮肤结节，组织病理学上主要由成纤维细胞和组织细胞构成。典型皮肤纤维瘤易于诊断，但由于其在组织学上谱系广泛，且表现各异，这就给诊断带来了一定困难。该病的治疗方法以手术治疗和保守治疗为主。
[0003]IRF7（interferon regulatory factor 7）是干扰素调节因子家族的成员，在免疫系统疾病中发挥重要作用。IRF7与Smad3相互作用以介导胶原蛋白生成中的TGF
‑
β信号传导。IRF7基因敲除小鼠相较野生型不容易被博来霉素诱导产生纤维化皮肤。但IRF7在皮肤创伤愈合与皮肤纤维瘤形成方面的研究还未知。
[0004]本领域迫切需要寻求皮肤纤维瘤诊断标志物，以及将标志物抑制剂应用到皮肤纤维瘤医药中，这是亟需要解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在提供干预IRF7表达或抑制其活性片段用于预防或治疗皮肤纤维瘤的医药用途。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案。
[0007]IRF7的表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤纤维瘤产品中的应用。
[0008]进一步的，所述的皮肤纤维瘤产品以IRF7基因或IRF7蛋白作为诊断标记物。
[0009]进一步的，所述的IRF7表达水平在皮肤纤维瘤中表达上调。
[0010]进一步的，所述产品为芯片、制剂或试剂盒。
[0011]IRF7抑制剂在制备用于治疗皮肤纤维瘤药物中的应用。
[0012]进一步的，所述IRF7抑制剂抑制人成纤维细胞分化，所述IRF7抑制剂通过抑制IRF7基因表达达到抑制皮肤纤维瘤的发生和发展。
[0013]进一步的，所述IRF7抑制剂的包括shRNA干扰靶序列，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0014]进一步地，所述药物为任何药物治疗学上可接受的剂型。
[0015]进一步地，所述药物为任何药物治疗学上可接受的剂量。
[0016]与现有技术相比本专利技术的有益效果。
[0017]专利技术人通过大量实验发现，在人体皮肤纤维瘤皮肤组织中，IRF7表达明显上调。
[0018]细胞学水平发现，抑制IRF7表达后可以抑制成纤维细胞分化，进而抑制皮肤纤维瘤发生和发展。
[0019]以上结果表明，IRF7在皮肤纤维瘤过程中起重要调控作用。
附图说明
[0020]图1是人正常皮肤和皮肤纤维瘤组织中的 IRF7 mRNA表达水平。
[0021]图2是人正常皮肤和皮肤纤维瘤组织中的IRF7的蛋白表达水平。
[0022]图3是IRF7过表达，I型胶原蛋白（collagenI，Col1）、III型胶原蛋白（collagenIII，Col3）和纤连蛋白（fibronectin，Fn）的mRNA表达图。
[0023]图4是IRF7过表达，I型胶原蛋白（collagenI，Col1）、III型胶原蛋白（collagenIII，Col3）和纤连蛋白（fibronectin，Fn）的蛋白表达图。
[0024]图5是敲低IRF7，I型胶原蛋白（collagenI，Col1）、III型胶原蛋白（collagenIII，Col3）和纤连蛋白（fibronectin，Fn）的mRNA表达图。
[0025]图6是敲低IRF7，I型胶原蛋白（collagenI，Col1）、III型胶原蛋白（collagenIII，Col3）和纤连蛋白（fibronectin，Fn）的蛋白表达图。
具体实施方式
[0026]实施例1。
[0027]1、皮肤组织或细胞中总RNA提取及qRT
‑
PCR。
[0028]1.1、组织中总RNA提取。
[0029]向装有组织的Ep管中加入1mlTrizol裂解液，使用低温组织匀浆仪充分裂解组织至均一状态。冰上静置组织10min等待进一步裂解充分。向EP管中加入200μL氯仿，使用涡旋机充分震荡15s将液体混匀，静置于冰上10min。之后使用低温离心机按12000g离心10min，取上层透明液体于新的EP管中，并加等体积异丙醇，上下颠倒混匀，静置于冰上10min。之后使用低温离心机按12000g离心10min。弃上清，加入1ml 75%乙醇清洗沉淀，使用低温离心机按7000g离心5min，弃上清。使用滤纸吸干乙醇并置于通风橱将残留液体挥发。使用去RNA酶水溶沉淀，进行后续实验。
[0030]1.2、RNA定量、逆转录，实时荧光定量PCR。
[0031]RNA定量：用 NanoDrop 2000分光光度计检测 RNA 在260mm 和 280mm 处的吸光度，获得比值，若A260/A 280位于1.8
‑
2.0，表示RNA的纯度较好，测得的RNA浓度可以用于后续实验。
[0032]RNA逆转录：将RNA反转录成为cDNA，按照以下步骤进行。
[0033]表1 去基因组DNA反应体系。
[0034]。
[0035]反应条件：42℃加热 2 min；降温至4℃。反应体积：10μL。
[0036]表2 cDNA合成反应体系。
[0037]。
[0038]反应条件： 37℃ 15min；85℃ 5 s；降温至4℃。反应体积：20μL反转录结束后进行实时荧光定量PCR，以下是反应体系。
[0039]表3 PCR反应体系。
[0040]。
[0041]反应条件：第一阶段，预变性：95℃，5min；第二阶段，循环反应：95℃，15s；60℃，45s（40循环）；第三阶段，溶解曲线：95℃，15s；60℃，60s，95℃，15s。
[0042]表4 PCR引物序列。
[0043]。
[0044]试验结论：如图1所示，IRF7 mRNA在皮肤纤维瘤患者的皮肤组织中均显著增加。
[0045]2、Western blot方法检测细胞纤维瘤中irf7表达情况。
[0046]Western
‑
Blot实验：实验组为皮肤纤维瘤组织，对照组为正常皮肤。
[0047]蛋白提取和定量：将待检测样本置于冰上，以1：100配置PMSF与RIPA混合溶液，根据细胞和组织的量和大小酌情加入混合液。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.IRF7的表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤纤维瘤产品中的应用。2.根据权利要求1所述的IRF7的表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤纤维瘤产品中的应用，其特征在于，所述的皮肤纤维瘤产品以IRF7基因或IRF7蛋白作为诊断标记物。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的IRF7表达水平在皮肤纤维瘤中表达上调。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为芯片、制剂或试剂盒。5.IRF7抑制剂在制备用于治疗皮肤纤维瘤药物中的应用。6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：高兴华，袁正伟，吴严，尹佳俐，齐瑞群，陈洪铎，孙艳，贾杉杉，何一雯，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：