宫颈癌相关的环状RNA标志物、检测试剂盒及方法在宫颈癌诊断中的应用技术

本发明专利技术公开了一种与宫颈癌相关的环状RNA标志物，其特征在于，所述的环状RNA标志物为环状RNA hsa_circ_0005571，所述环状RNA hsa_circ_0005571的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明专利技术还公开了基于该环状RNA hsa_circ_0005571的检测试剂盒及方法在宫颈癌诊断中的应用。本发明专利技术的环状RNA hsa_circ_0005571可作为宫颈癌检测的有效标志物。本发明专利技术的试剂盒及检测方法具有操作简单、灵敏性高、特异性强、周期短等特点，有利于宫颈癌的早期诊断和治疗，为后续研发对宫颈癌具有潜在治疗价值的新型药物提供帮助。药物提供帮助。药物提供帮助。

【技术实现步骤摘要】
宫颈癌相关的环状RNA标志物、检测试剂盒及方法在宫颈癌诊断中的应用


[0001]本专利技术属于基因工程生物
，特别是涉及一种宫颈癌相关的环状RNA标志物、检测试剂盒及方法在宫颈癌诊断中的应用。

技术介绍

[0002]宫颈癌(Cervical Cancer，CC)是严重威胁女性健康的生殖系统恶性肿瘤，全球范围内其发病率和死亡率在女性恶性肿瘤中均居第四位。据估计，2018年全球有57万例宫颈癌新发病例，死亡病例超31万例。在发展中国家，宫颈癌是女性第二大常见恶性肿瘤；我国与印度的宫颈癌病例数约占全球总病例数的1/3。随着现代女性生活习惯的改变，生殖道病毒性疾病不断增加，性传播疾病普遍流行，使得宫颈癌发病年龄趋向于年轻化。
[0003]早期检测是防治宫颈癌的一种有效方法，通过早期检测与诊断，可及早采取有效手段干预处理，提高宫颈癌的生存率，极大改善患者预后。目前主要检测手段包括细胞学与HPV检测。细胞学包含传统巴氏涂片法及液基细胞学检查。传统巴氏涂片法检测费用较低，但是此技术准确性与灵敏度有限，医生阅片量大、主观性较强，由于取材和涂片过程中存在的问题造成漏诊或误诊情况较多。液基细胞学检查在制片方法上较传统涂片法更进步，但仍依赖于医生对细胞形态学的主观判断，缺少客观标准，易受主观因素影响及受制于取材质量而造成诊断结果不明确【HPV E6E7、宫颈液基细胞学、阴道镜活检在宫颈癌的筛查价值研究进展；中国妇产科临床杂志2022年5月第23卷第3期】。HPV分型检测，是基于对宫颈分泌物的HPV DNA进行鉴别。尽管具有较高的灵敏度，HPV检测却无法区分是否阳性的结果与临床病变相关联；较高的HPV感染率伴随着相对较低的宫颈癌发病率，仅有持续性HPV感染才和癌前病变密切联系。这可能带来异常过度诊断，造成女性不必要的焦虑。同时也提示在宫颈癌发生发展过程中存在个体间遗传差异等其他重要因素。因此，深入探究宫颈癌的确切发病机制，并寻找新型诊断标志物与潜在治疗靶点至关重要。
[0004]环状RNA(circularRNAs，circRNAs)是一类闭合环状的RNA分子，主要由mRNA前体(pre
‑
mRNA)通过可变剪接方式加工产生。由于其结构中不具5
’
末端帽子和3
’
末端poly(A)尾巴、缺乏外切酶降解所需游离末端，因此circRNA比线性mRNA(linear RNA)更加稳定。现有研究表明，circRNA可通过充当微小RNA(miRNA)海绵或诱饵，与RNA结合蛋白相互作用，甚至翻译功能肽等方式，广泛参与肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、侵袭转移等多种病理生理的调控。同时circRNAs具有内源性、丰富、保守、稳定等特点，且既可在癌症组织中特异表达，也存在于血液、血浆、细胞外囊泡、唾液、尿液中。CircRNAs的以上特性，表明了circRNAs作为诊断生物标志物和应用治疗的潜力。
[0005]近年研究证实，宫颈癌中也存在circRNAs的异常表达，提示其可能在宫颈癌的发生发展中起着重要作用，并有望作为新型肿瘤标志物或分子治疗靶点应用于临床。但总体而言，当前对circRNAs在宫颈癌中的研究仍不够全面与深入，circRNAs在宫颈癌中的分子机制仍处于基础研究阶段，对circRNAs是否可作为宫颈癌肿瘤诊断标志物等方面存在较大
研究空间，仍需进一步证实。

技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的在于，针对现有技术中对circRNAs研究不够全面与深入、缺少宫颈癌诊断标志物的缺陷，本专利技术提供了一种宫颈癌相关的环状RNA标志物、检测试剂盒及方法在宫颈癌诊断中的应用。环状RNA hsa_circ_0005571经验证，可作为宫颈癌检测的有效标志物。
[0007]本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
[0008]本专利技术一个方面提供了一种与宫颈癌相关的环状RNA标志物，所述的环状RNA标志物为环状RNA hsa_circ_0005571，所述环状RNA hsa_circ_0005571的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0009]进一步地，对所述环状RNA hsa_circ_0005571具有检测特异性的引物序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。
[0010]本专利技术另一个方面提供了一种环状RNA标志物的应用，所述的环状RNA标志物在制备宫颈癌诊断试剂盒中的应用。
[0011]本专利技术又一个方面提供了一种宫颈癌诊断试剂盒，所述试剂盒用于检测待测样本中标志物环状RNA hsa_circ_0005571的相对表达量，所述试剂盒包括引物对，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
[0012]进一步地，所述待测样本包括以下组中的至少一种，所述组包括：子宫组织、淋巴结、尿液、精液、血液、血清、血浆、血液或者淋巴中的循环肿瘤细胞，包含转移瘤的组织，以及包含宫颈癌细胞或者其部分的来源，以及来自宫颈癌细胞的游离的或与蛋白质结合的RNA分子。
[0013]进一步地，所述试剂盒还包括qPCR扩增Mix和ddH2O。
[0014]进一步地，所述qPCR扩增Mix包含SYBGREEN染料。
[0015]进一步地，所述试剂盒还包扩内标系统，所示内标系统是根据内参基因GAPDH序列设计的内标引物，所述内标引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述下游引物的核酸序列如SEQ ID NO.5所示。
[0016]本专利技术再一个方面提供了一种宫颈癌诊断试剂盒检测宫颈癌标志物环状RNA hsa_circ_0005571的方法，该方法包括以下步骤：
[0017]S1、RNA的提取：采用Trizol法进行总RNA提取；
[0018]S2、RNA的逆转录：配置逆转录体系并按照TonkBioTM First Chain cDNA Synthesis Kit试剂盒说明书指示操作，进行反转录合成cDNA；
[0019]所述逆转录体系组成及含量为：
[0020][0021][0022]反应条件为：42℃下反应60min，70℃下反应5min；
[0023]S3、荧光定量PCR扩增：采用本专利技术所述的试剂盒，以步骤S2中获取的cDNA为模板，进行PCR扩增，并收集荧光信号；
[0024]荧光PCR扩增的体系组成及含量为：
[0025][0026]荧光PCR的反应条件为：95℃预变性10min，然后以95℃变性15s、52℃退火30s、72℃延伸30s，共进行38个循环。
[0027]本专利技术与现有技术相比具有明显的优点和有益效果：本专利技术首次公开了可用于检测与宫颈癌相关的环状RNA hsa_circ_0005571的试剂盒及其在制备检测宫颈癌试剂或者辅助诊断宫颈癌试剂中的应用，所述的hsa_circ_0005571定量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与宫颈癌相关的环状RNA标志物，其特征在于，所述的环状RNA标志物为环状RNA hsa_circ_0005571，所述环状RNA hsa_circ_0005571的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.根据权利要求1所述的与宫颈癌相关的环状RNA标志物，其特征在于，对所述环状RNA hsa_circ_0005571具有检测特异性的引物序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。3.权利要求1所述的环状RNA标志物的应用，其特征在于，所述的环状RNA标志物在制备宫颈癌诊断试剂盒中的应用。4.一种宫颈癌诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测待测样本中标志物环状RNA hsa_circ_0005571的相对表达量，所述试剂盒包括引物对，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。5.根据权利要求4所述的宫颈癌诊断试剂盒，其特征在于，所述待测样本包括以下组中的至少一种，所述组包括：子宫组织、淋巴结、尿液、精液、血液、血清、血浆、血液或者淋巴中的循环肿瘤细胞，包含转移瘤的组织，以及包含宫颈癌细胞或者其部分的来源，以及来自宫颈癌细胞的游离的或与蛋白质结合的RNA分子。6.根据权利要求4所述的宫颈癌诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括qPCR扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁奕，范许云，高凡雅，何胜祥，
申请(专利权)人：安徽同科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：