检测甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断产品中的应用以及食管癌诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种检测甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断产品中的应用以及食管癌诊断试剂盒。相对于传统技术，本发明专利技术具备如下有益效果：本发明专利技术的发明专利技术人在研究中发现，同时检测区域1为Chr5:115816612

【技术实现步骤摘要】
检测甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断产品中的应用以及食管癌诊断试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体而言，涉及一种检测甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断产品中的应用以及食管癌诊断试剂盒。

技术介绍

[0002]食管癌是一种自下咽到食管胃交界部之间食管上皮来源的消化道恶性肿瘤。食管癌分为两种常见的组织学亚型：食管腺癌(ECA)和食管鳞状细胞癌(ESCC)。已知不良的饮食生活方式，如烫食、热茶、饮酒、吸烟、食用霉变、炭烤、烟熏食物等与食管癌的发病密切相关。据统计食管癌整体的5年生存率在15％
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25％左右，临床上90％的患者确诊时已是中晚期，其预后较差；而早期食管癌的治疗率远高于中晚期，早期食管癌患者其5年生存率可达到90％。可见，食管癌良好的预后与早期诊断有关，因此，针对高危人群开展早期筛查和诊断，提高食管癌的检出率，有助于提高食管癌患者的生活质量和生命周期，并降低其医疗负担。
[0003]目前食管癌的主要诊断手段包括影像学检查和内镜学检查。影像学检查方法包括CT、PET
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CT、消化道造影、MRI等；而食管内镜下的病理活检是食管癌诊断的金标准。但是，以上这些方法由于在设备成本、医师操作技术、侵入性等方面的限制，难以作为早期筛查或诊断技术而大范围推广。一些传统的肿瘤血清学标志物，如AFP、CEA、CA125等，对食管癌的检测灵敏度较低，无法满足临床诊断需求。鉴于此，急需一种无创的、高灵敏度的早期食管癌的诊断方法。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。<br/>
技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术的实施例的目的包括提供检测甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断产品中的应用以及食管癌诊断试剂盒。本专利技术实施例用特定目标区域的甲基化水平的检测试剂制备食管癌诊断试剂盒，采用该试剂盒能够实现无创、高灵敏度的早期食管癌的诊断，且检测特异性高。
[0006]在本专利技术的第一方面，提供检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断产品中的应用；
[0007]所述目标区域包括如下定义的区域1或其部分区域与区域2或其部分区域的组合：
[0008]以GRCh38.p14为参考，区域1为Chr5:115816612
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115816985，区域2为Chr17:5500784
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5501198。
[0009]可选地，在本专利技术的一些实施方式中，所述区域1的部分区域选自如下定义的区域1A、区域1B、区域1C、区域1D中的一个或者多个：区域1A：Chr5:115816700
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115816802正链、区域1B：Chr5:115816724
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115816868正链、区域1C：Chr5:115816918
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115816779负链、以及区域1D：Chr5:115816824
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115816704负链。
[0010]可选地，在本专利技术的一些实施方式中，所述区域2的部分区域选自如下定义的区域2A、区域2B和区域2C中的一个或者多个：区域2A：Chr17:5500903
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5501026正链、区域2B：Chr17:5500930
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5501073正链、以及区域2C：Chr17:5501126
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5500995负链。
[0011]需要说明的是，本文中，“可选地”表示举例。另外，如未特殊说明，染色体上的位置均是以GRCh38.p14为参考。此外，染色体上的DNA分子是由正链和负链组成的双链结构，对于用染色体位置表示的区域，如果未指明是DNA分子的正链还是负链，则表示既可以是该区域的DNA分子的正链，也可以是该区域DNA分子的负链，还可以是该区域的DNA分子的正负两条链。如“Chr5:115816612
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115816985”可以表示位于该染色体位置的DNA分子的正链或负链，也可以表示位于该染色体位置的DNA分子的正链和负链。若DNA分子片段被描述为“Chr5:115816700
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115816802正链”则表示位于该染色体位置的DNA分子的正链。若DNA分子片段被描述为“Chr5:115816918
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115816779负链”，则表示位于该染色体位置的DNA分子的负链。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区域的甲基化水平的检测：甲基化特异性PCR、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和荧光定量法。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂包括检测所述目标区域的甲基化水平的检测引物对，或者还包括检测所述目标区域的检测探针。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂包括检测目标区域的甲基化水平的引物对：所述引物对包括检测Chr5:115816612
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115816985甲基化水平的区域1甲基化引物对和区域1非甲基化引物对，和检测Chr17:5500784
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5501198甲基化水平的区域2甲基化引物对和区域2非甲基化引物对。
[0015]可选地，检测所述区域1的甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。
[0016]可选地，检测所述区域1的非甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。
[0017]可选地，检测所述区域2的甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示。
[0018]可选地，检测所述区域2的非甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂包括检测目标区域的检测引物对和所述检测引物对对应的检测探针。
[0020]可选地，所述检测引物对和对应的探针包括：
[0021]检测Chr5:115816700
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115816802正链甲基化水平的区域1A检测引物对和检测探针；或，
[0022]检测Chr5:115816724
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115816868正链甲基化水平的区域1B检测引物对和检测探针；或，
[0023]检测Chr5:115816918
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115816779负链甲基化水平的区域1C检测引物对和检测探针；或，
[0024]检测Chr5:115816824
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115816704负链甲基化水平的区域1D检测引物对和检测探针；和，
[0025]检测Chr17:5500903
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5501026正链甲基化水平的区域2A检测引物对和检测探针；或，
[0026]检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断产品中的应用；所述目标区域包括如下定义的区域1或其部分区域，以及区域2或其部分区域：以GRCh38.p14为参考，区域1为Chr5:115816612
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115816985，区域2为Chr17:5500784
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5501198。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述目标区域具备如下技术特征中的一个或者多个：所述区域1的部分区域选自如下定义的区域1A、区域1B、区域1C、区域1D中的一个或者多个：区域1A为Chr5:115816700
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115816802正链，区域1B为Chr5:115816724
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115816868正链，区域1C为Chr5:115816918
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115816779负链，以及区域1D为Chr5:115816824
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115816704负链；以及，所述区域2的部分区域选自如下定义的区域2A、区域2B和区域2C中的一个或者多个：区域2A为Chr17:5500903
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5501026正链，区域2B为Chr17:5500930
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5501073正链，以及区域2C为Chr17:5501126
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5500995负链。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区域的甲基化水平的检测：甲基化特异性PCR、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和荧光定量法。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测所述目标区域的甲基化水平的检测引物对，或者还包括检测所述目标区域的检测探针。5.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂包括具备如下技术特征中的一个或者多个的检测所述目标区域的甲基化水平的甲基化引物对和非甲基化引物对：检测所述区域1的甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，检测所述区域1的非甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示，检测所述区域2的甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：