一种基于制造技术

本实用新型专利技术属于分子生物技术和分子诊断医学检测领域，提供了一种基于

【技术实现步骤摘要】
一种基于RPA结合CRISPR/Cas 12恒温扩增技术核酸检测装置


[0001]本技术属于分子生物技术和分子诊断医学检测领域，尤其涉及一种即时检验
POCT(Point
‑
Of
‑
Care Testing)
装置，具体涉及一种基于
RPA
结合
CRISPR/Cas 12
恒温扩增技术核酸检测装置
。

技术介绍

[0002]POCT
指在病人旁边进行的临床检测及床边检测
(Bedside Testing)
，通常不一定是临床检验师来进行
。
是在采样现场即刻进行分析，省去标本在实验室检验时的复杂处理程序，快速得到检验结果的一类新方法
。
[0003]现场快速检验由中国医学装备协会
POCT
装备技术专业委员会在多次专家论证基础上统一命名，并将其定义为：在采样现场进行的
、
利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的一种检测方式
。
[0004]POCT
含义可从两方面进行理解：空间上，在患者身边进行的检验，即“床旁检验”；时间上，可进行“即时检验”。POCT
的主要标准是不需要固定的检测场所，试剂和仪器都是便携式的，并且可及时操作
。POCT
不需要专门临床检测服务和专门的专业技术人员
。
[0005]一种好的分子
POCT
产品首先得满足能脱离
PCR
分区实验室使用
。
这就意味分子
POCT
产品的检测耗材上要能集成核酸提取
、
核酸扩增的功能
。
更重要的是，整个实现过程要全密闭，以最大程度地在没有
PCR
分区实验室的情况下避免
PCR
产物气溶胶污染
。
[0006]分子诊断技术今日不同以往，着实借力突飞猛进，恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目
。RPA(Recombinase Polymerase Amplification)
重组酶聚合酶扩增技术，关键技术是3种关键酶或蛋白
(
重组酶
、
单链结合蛋白和
DNA
聚合酶，其中重组酶来源于
T4
噬菌体
)
，在
37℃
恒温下进行核酸快速扩增，工作原理要点是：
[0007](1)
在三磷酸腺苷
ATP
存在条件下，重组酶与引物结合
,
形成蛋白
‑
核酸聚合体，并搜索配对目标；
[0008](2)
当引物寻找到配对
DNA
模板，
ATP
水解供应能量，重组酶离开引物，并在
DNA
聚合酶的作用下合成新
DNA
链；
[0009](3)
同时，单链
DNA
结合蛋白
(Single Stranded DNA Binding
，
SSB)
同被置换出来的
DNA
单链进行结合，防止
DNA
模板再次形成双链
。
[0010]CRISPR
系统作为新兴的基因编辑和调控工具，具有高度的特异性
、
灵敏度和灵活性，除在基因编辑和改造方面有重要作用外，在传染病诊断
、
环境监测
、
食品安全检测等方面也有着良好的前景
。
随着
CRISPR/Cas
系统的深入研究，通过其高特异性识别目标序列和反式切割能力，已经建立了多种简便
、
灵敏的生物传感平台，解决了传统方法在操作
、
灵敏度
、
特异性及检测周期方面存在的不足
。
[0011]CRISPR/Cas
系统由于优异的生物传感性能逐渐成为下一代诊断技术的焦点，有望成为开发理想诊断产品的方法，基于
CRISPR/Cas
系统的特异性结合活性和高效反式切割能力，将其与电化学
、
荧光传感技术相结合，已经成功实现了各种靶标分子的检测，检测对象
也已经从最初的核酸扩展到金属离子
、
蛋白质
、
细菌
、
小分子等，说明了
CRISPR/Cas
系统在检测领域具有通用性
。
[0012]微流控技术的概念被提出已有
30
余年，以“微型全分析系统”(
μ
‑
TAS)
和“芯片实验室”(LOC)
为主要形式
。
随着微流控技术的日臻成熟，逐步从前期技术攻关进入到产品商业化研发阶段，具有消耗试剂少
、
检测速度快
、
易于集成等优势，为其在临床检验领域提供了巨大的发展机遇
。
[0013]微流控技术指的是在微米尺度下对微小量级的流体进行精准操控的一种技术，可以实现多个实验流程在一块芯片上自动完成，具有低消耗
、
高效率
、
自动化
、
集成化
、
便携化等优势
。
微流控平台将基于
CRISPR
的技术提升到生物分析和临床诊断领域的新水平
。
[0014]微流体系统有几个优点：
[0015](1)
由于严格的模块分离和密封，交叉污染的风险最小；
[0016](2)
试剂消耗少，降低了成本；
[0017](3)
无需任何额外的手动操作即可实现进样和出样；
[0018](4)
一种通用检测平台，受样品特性
(
如密度
、pH、
电导率等
)
影响较小；
[0019](5)
通过合理设计微通道可以实现多重检测；
[0020](6)
在一次芯片测定中，可以依次进行多个级联反应，而不会相互影响
。
[0021]为了解决上述分子
POCT
产品的多功能一体化全密闭的难题，本技术设计了一种基于
RPA
结合
CRISPR/Cas 12
恒温扩增技术核酸检测装置，该装置集样本采集灭活
、
核酸免提取
、RPA+CRISPR/Cas 12
扩增
、
可视化检测的多功能全密闭的一体机
。

技术实现思路

[0022]本申请的目的在于提供一种基于
RPA
结合
CRISPR/Cas 12
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于
RPA
结合
CRISPR/Cas 12
恒温扩增技术核酸检测装置，包括整体外观和立体结构
、
样本收集灭活装置
、
样本采集流程示意图
、
离心微流控芯片盘操控加样装置
、RPA
扩增装置
、CRISPR/Cas12
信号放大装置
、
可视化层析试纸条检测装置，其特征在于：所述整体外观和立体结构包括，旋钮
、
上盖子
、
检测窗口
、
固定底座
、
减震垫
、
电机
、
转盘
、
控制板
、
电源开关
、
加热膜，其中仪器的组成：电机固定在固定底座上，固定底座下方贴有减震垫，固定底座上设有透明检测窗口；所述样本收集灭活装置结构包括，一次性医用采样拭子
、
样本采集管和免核酸提取的灭活型样本保存液；所述离心微流控芯片盘操控加样装置结构包括，微流控芯片盘；所述
RPA
扩增装置和
CRISPR/Cas12
扩增装置结构包括，免提取的核酸样品注入...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴宁，孙振丰，赵春艳，张惠丹，
申请(专利权)人：苏州乾康基因有限公司，
类型：新型
国别省市：