【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析检测相关，尤其是涉及一种地屈孕酮萃取、检测方法及试剂盒。
技术介绍
1、地屈孕酮可用于治疗内源性孕酮不足引起的疾病，如痛经、子宫内膜异位症、继发性闭经、月经周期不规则、功能失调性子宫出血、经前期综合征、孕激素缺乏所致先兆性流产或习惯性流产、黄体不足所致不孕症。
2、孕酮是由卵巢黄体分泌的一种天然孕激素，主要由黄体分泌。孕激素对于月经周期调节、妊娠的建立和延续、维持妊娠早期子宫内膜蜕膜化、调节免疫反应、抑制炎症反应、减少子宫收缩、改善子宫胎盘循环等均有重要作用。如果孕激素分泌不足，将难以维持子宫内膜的分泌能力，从而会影响胚胎着床和生长。而对于在有子宫的绝经后女性中，雌激素替代物导致子宫内膜增生和癌风险增加，加用孕激素可以预防这一额外风险。
3、地屈孕酮是一种口服的孕激素，自1960年上市以来，在妇产科疾病诊疗中具有广泛的应用，如异常子宫出血、痛经、子宫内膜异位症、经前期综合征、孕激素缺乏引起的先兆流产或习惯性流产等，其结构和功能与内源性孕激素十分相似，与孕激素受体具有很强的亲和力。相比于其他合成的孕激素，地屈孕酮没有雄激素、雌激素及肾上腺皮质激素作用的影响，且副作用较少，是一种安全有效的治疗方式。
4、为更好地研究地屈孕酮的应用效果，类固醇激素在人体内含量低，含量跨度范围大，从ng级到pg级均有分布，而且结构相似物多；再加之血清或血浆基质复杂，因此，很难同时将类固醇激素从血清或血浆中高效准确地提取出来，尤其是关于地屈孕酮当前相关检测类文献较少，可供参考的资料少，查阅的文献[
5、基于此，开发一种效果好的地屈孕酮萃取、检测方法及试剂盒具有重要意义。
6、参考文献：
7、[1]abdel-hamid m e,sharaf l h,kombian s b,et al.determination ofdydrogesterone in human plasma by tandem mass spectrometry:application totherapeutic drug monitoring of dydrogesterone in gynecological disorders[j].chromatographia,2006,64(5-6):287-292.doi:10.1365/s10337-006-0035-3.
8、[2]mihu d,imre s,vlase l,et al.new method for determination ofdydrogesterone in human plasma for therapeutic drug monitoring ingynecological disorders.[j].rev med chir soc med nat iasi,2008,112(3):837-842.
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种地屈孕酮萃取方法，该方法能有效地萃取出血浆中的地屈孕酮。
2、根据本专利技术的一个方面，提出了一种地屈孕酮萃取方法，包括如下步骤：
3、取经稀释的待测样本，转移至活化后的固相萃取柱上，经淋洗液淋洗、压干后，加入洗脱液洗脱，收集洗脱后的液相部分；其中，所述淋洗液为甲醇水混合溶液，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过45％。
4、根据本专利技术的一种优选的实施方式，至少具有以下有益效果：采用本专利技术方案的淋洗液可以较好地将分析物保留在固相萃取小柱中，不被淋洗下来，同时，也能将血浆中杂质部分淋洗下来，从而达到较好的萃取效果。
5、在本专利技术的一些实施方式中，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过40％。
6、在本专利技术的一些实施方式中，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过35％。
7、在本专利技术的一些实施方式中，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过30％。
8、在本专利技术的一些优选实施方式中，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比在20％以上。
9、在本专利技术的一些优选实施方式中，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比在20％～30％之间。如25％等。该体积占比的甲醇水混合溶液可使分析物保留在固相萃取小柱中，不被淋洗下来，同时，能较大程度的将血浆中的杂质淋洗下来，从而达到较好的萃取效果。
10、在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述洗脱液为乙腈。目标物在乙腈中溶解性好，洗脱效果好，且易吹干，此外，乙腈毒性低，更环保。
11、在本专利技术的一些实施方式中，所述经稀释的样本采用的是水作为稀释剂。
12、在本专利技术的一些实施方式中，所述经稀释的样本按待测样本体积的1～2倍添加稀释剂。
13、在本专利技术的一些实施方式中，所述压干采用正压压干；优选地，所述正压压干时，压力为6-12psi。
14、在本专利技术的一些实施方式中，所述萃取方法还包括在加入洗脱液洗脱后，通过再次压干，收集洗脱液；优选地，所述再次压干采用正压压干；更优选地，所述再次压干时，压力为1-6psi。
15、根据本专利技术的另一个方面，提出了一种地屈孕酮检测方法，包括如下步骤：
16、取待测样本制备成检测样本，通过高效液相色谱串联质谱(hplc-ms/ms)对检测样本中的地屈孕酮进行检测分析，其中，检测分析时采用的色谱条件包括：流动相a相：乙酸铵水溶液，流动相b相：甲醇-乙腈混合溶液；色谱柱为c4柱或c18柱。
17、根据本专利技术的一种优选的实施方式的检测方法，至少具有以下有益效果：通过本专利技术方案可以将地屈孕酮与其他杂质有效分离，检测准确度好、灵敏度高，可为地屈孕酮服用效果监测提供可靠的依据；通过该方法进行检测可实现低至0.1ng/ml的地屈孕酮检测，通过本专利技术方案进行定量检测时，线性范围可达0.100～10.000ng·ml-1，线性定量效果良好。采用甲醇和乙腈的混合液，既具有较高的洗脱能力，又可保持较低柱压，避免使用单一有机相时，引起柱压高，进而导致进样过程中容易超压，同时，采用混合溶液，分离效果也得到显著提升。
18、在本专利技术的一些实施方式中，所述乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为5～15mm；优选地，所述乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为10mm。
19、在本专利技术的一些实施方式中，所述甲醇-乙腈混合溶液中甲醇的体积占比为40～60％。
20、在本专利技术的一些实施方式中，所述甲醇-乙腈混合溶液中甲醇的体积占比为50％。
21、在本专利技术的一些实施方式中，所述流动相a相和/或b相中添加有0.05～0.15％本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种地屈孕酮萃取方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的地屈孕酮萃取方法，其特征在于：所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过40％；优选地，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过35％；优选地，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过30％；优选地，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比在20％以上；优选地，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比在20％～30％之间。
3.根据权利要求1所述的地屈孕酮萃取方法，其特征在于：所述洗脱液为乙腈；和/或，所述经稀释的样本采用的是水作为稀释剂；和/或，所述压干采用正压压干；优选地，所述正压压干时，压力为6-12psi。
4.一种地屈孕酮检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的地屈孕酮检测方法，其特征在于：所述乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为5～15mM；和/或，所述甲醇-乙腈混合溶液中甲醇的体积占比为40～60％；和/或，所述流动相A相和/或B相中添加有0.05～0.15％甲酸；优选地，所述乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为10mM；和/或，所述甲醇-乙腈混合溶
6.根据权利要求4或5所述的地屈孕酮检测方法，其特征在于：所述色谱条件还包括如下条件中的至少一项：
7.根据权利要求4或5所述的地屈孕酮检测方法，其特征在于：检测分析时采用的质谱条件包括如下条件中的至少一项：
8.根据权利要求4所述的地屈孕酮检测方法，其特征在于：所述检测样本通过如权利要求1至3任一项所述的萃取方法萃取得到。
9.一种地屈孕酮检测试剂盒，其特征在于：包括以下试剂：地屈孕酮标准品和质控品；地屈孕酮-d6内标品；固相萃取柱；淋洗液；洗脱液；其中，所述淋洗液为甲醇水混合溶液，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不低于45％。
10.根据权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中地屈孕酮标准品包括如下浓度的地屈孕酮标准工作液：2.000、4.000、10.000、20.000、40.000、80.000、160.000、200.000ng·mL-1；和/或，所述试剂盒中地屈孕酮质控品包括如下浓度的地屈孕酮质控工作液：5.000、12.000、70.000、150.000ng·mL-1；和/或，通过所述试剂盒进行定量分析时，定量结果判断标准：相关系数r2≥0.9801或r≥0.9900；校正标样的回算浓度应该在标示值的85％～115％范围内，定量下限应该在标示值的80％～120％范围内；至少75％的校正标样且最少6个浓度水平应符合上述标准；和/或，所述试剂盒中地屈孕酮-d6内标品包括浓度为150.000ng·mL-1的地屈孕酮质控工作液；和/或，所述试剂盒中还包括体积占比为40～60％的甲醇水溶液；和/或，所述试剂盒中还包括空白血浆。
...【技术特征摘要】
1.一种地屈孕酮萃取方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的地屈孕酮萃取方法，其特征在于：所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过40％；优选地，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过35％；优选地，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比不超过30％；优选地，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比在20％以上；优选地，所述甲醇水混合溶液中甲醇的体积占比在20％～30％之间。
3.根据权利要求1所述的地屈孕酮萃取方法，其特征在于：所述洗脱液为乙腈；和/或，所述经稀释的样本采用的是水作为稀释剂；和/或，所述压干采用正压压干；优选地，所述正压压干时，压力为6-12psi。
4.一种地屈孕酮检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的地屈孕酮检测方法，其特征在于：所述乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为5～15mm；和/或，所述甲醇-乙腈混合溶液中甲醇的体积占比为40～60％；和/或，所述流动相a相和/或b相中添加有0.05～0.15％甲酸；优选地，所述乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为10mm；和/或，所述甲醇-乙腈混合溶液中甲醇的体积占比为50％；和/或，所述流动相a相和/或b相中添加有0.1％甲酸。
6.根据权利要求4或5所述的地屈孕酮检测方法，其特征在于：所述色谱条件还包括如下条件中的至少一项：
7.根据权利要求4或5所述的地屈孕酮检测方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾姣，唐智，周舟，何玲，肖永芳，周玲，欧阳冬生，
申请(专利权)人：长沙都正生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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