腺苷蛋氨酸含量检测样品的预处理方法、检测方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种腺苷蛋氨酸含量检测样品的预处理方法、检测方法和试剂盒，包括如下步骤：将待测样品与弱酸水溶液按体积比为100：(0.5～5)进行混合涡旋振荡。经过预处理后的待测样本中的腺苷蛋氨酸能够长期保持稳定。在用于检测腺苷蛋氨酸时可以实现较高效率的样本处理速度，提高样本中腺苷蛋氨酸的稳定性。使得后续的检测方法的检测限低、线性区间宽、灵敏度高且检测方法准确可靠、稳定性强以及具有抗干扰能力。抗干扰能力。抗干扰能力。

【技术实现步骤摘要】
腺苷蛋氨酸含量检测样品的预处理方法、检测方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及药物分析检测
，尤其是涉及一种腺苷蛋氨酸含量检测样品的预处理方法、检测方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]腺苷蛋氨酸是存在于人体所有组织和体液中的一种生理活性分子。它作为甲基供体(转甲基作用)和生理性巯基化合物(如半胱氨酸、牛磺酸、谷胱甘肽和辅酶A等)的前体(转硫基作用)参与体内重要的生化反应。在肝内，通过使质膜磷脂甲基化而调节肝脏细胞膜的流动性，而且通过转硫基反应可以促进解毒过程中硫化产物的合成。只要肝内腺苷蛋氨酸的生物利用度在正常范围内，这些反应就有助于防止肝内胆汁淤积。
[0003]现已发现，肝硬化时肝腺苷蛋氨酸的合成明显下降，这是因为腺苷蛋氨酸合成酶(催化必需氨基酸蛋氨酸向腺苷蛋氨酸转化)的活性显著下降(
‑
50％)所致。这种代谢障碍使蛋氨酸向腺苷蛋氨酸转化减少，因而削弱了防止胆汁郁积的正常生理过程。结果使肝硬化患者饮食中的蛋氨酸血浆清除率降低，并造成其代谢产物，特别是半胱氨酸、谷胱甘肽和牛磺酸利用度下降。而且这种代谢障碍还造成高蛋氨酸血症，使发生肝性脑病的危险性增加。有研究证明体内蛋氨酸累积可导致其降解产物(如硫醇，甲硫醇)在血中的浓度升高，而这些降解产物在肝性脑病的发病机理中起重要作用。由于腺苷蛋氨酸以使巯基化合物合成增加，但不增加血循环中蛋氨酸的浓度，给肝硬化患者补充腺苷蛋氨酸可以使一种在肝病时生物利用度降低的必需化合物恢复其内源性水平。
[0004]当前相关技术中研究有大鼠体内药代动力学研究，样本处理主要以高氯酸进行沉淀或固相萃取或高氯酸沉淀蛋白后经固相萃取，检测时间10min，定量范围为0.05～5μg/mL，而人体的稳态基线水平为20～30ng/mL，该方法检测时间长，效率较低，且无法对人体基线准确定量。
[0005]因此，有必要开发一种可快速、定量限更低的腺苷蛋氨酸含量检测方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术第一方面提出一种腺苷蛋氨酸含量检测样品的预处理方法，待测样品经过预处理后，能够有效提高检测效率以及定量限更低。
[0007]本专利技术第二方面还提供一种腺苷蛋氨酸含量检测方法。
[0008]本专利技术第三方面还提供一种试剂盒。
[0009]根据本专利技术的第一方面实施例提供的一种腺苷蛋氨酸含量检测样品的预处理方法，包括如下步骤：
[0010]将待测样品与弱酸水溶液按体积比为100：(0.5～5)进行混合涡旋振荡。
[0011]根据本专利技术实施例的腺苷蛋氨酸含量检测样品的预处理方法，至少具有如下有益效果：
[0012]本专利技术通过将待测样品和弱酸水溶液按体积比为100：(0.5～5)进行混合涡旋振荡，能够使得待测样本中的腺苷蛋氨酸长期保持稳定。经过预处理后的待测样本在用于检测腺苷蛋氨酸时可以实现较高效率的样本处理速度，提高样本中腺苷蛋氨酸的稳定性。使得后续的检测方法的检测限低(为10ng/mL)、线性区间宽、灵敏度高且检测方法准确可靠、稳定性强以及具有抗干扰能力。
[0013]根据本专利技术的一些实施例，所述待测样品与弱酸水溶液按体积比为100：(1～3)进行混合。由此，既能保证待测样品中的腺苷蛋氨酸长期保持稳定的状态，又能避免因为弱酸添加量过多导致待测样品发生变化。
[0014]根据本专利技术的一些实施例，所述弱酸选自乙酸、甲酸或磷酸中的至少一种。
[0015]根据本专利技术的一些实施例，所述待测样品包括血浆、血清中的至少一种。
[0016]根据本专利技术的一些实施例，所述弱酸是指pKa值大于4的酸。
[0017]本专利技术第二方面提供一种腺苷蛋氨酸含量检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
[0018]通过如权利要求1至4任一项所述的方法对待测样品进行预处理，并加入内标工作液，得待测溶液；所述内标工作液中的内标为腺苷蛋氨酸
‑
d3；
[0019]通过LC
‑
MS/MS方法对所述待测溶液进行检测。
[0020]根据本专利技术实施例的腺苷蛋氨酸含量检测方法，至少具有如下有益效果：
[0021]本专利技术的方法可以实现较高效率的样本处理速度，提高样本中腺苷蛋氨酸的稳定性。其检测限低(为10ng/mL)、线性区间宽、灵敏度高且检测方法准确可靠、稳定性强以及具有抗干扰能力。
[0022]根据本专利技术的一些实施例，所述腺苷蛋氨酸标准曲线工作液的浓度为200、400、1000、2000、8000、20000、32000、40000ng
·
mL
‑1。
[0023]根据本专利技术的一些实施例，所述标准曲线样品通过如下方法制备：
[0024]S101、将空白血浆与乙酸水溶液按体积比为100：(0.5～5)进行混合涡旋振荡得到混合液；将混合液和0.1％的甲酸水溶液按体积比1：(18～22)混合，得到替代基质；
[0025]S102、将标准曲线工作液和替代基质按体积比1：(18～22)混合即得标准曲线样品。
[0026]根据本专利技术的一些实施例，所述标准曲线样品的样品浓度为10、20、50、100、400、1000、1600、2000ng
·
mL
‑1。
[0027]根据本专利技术的一些实施例，所述内标工作液的浓度为300～600ng
·
mL
‑1。
[0028]根据本专利技术的一些实施例，所述检测方法还包括质控样品的制备：
[0029]S103、将质控样品工作液和空白血浆按1：(18～22)体积比混合，即得质控样品。
[0030]根据本专利技术的一些实施例，所述腺苷蛋氨酸质控工作液的浓度为600、1200、3000、15000、30000ng
·
mL
‑1。
[0031]根据本专利技术的一些实施例，所述质控样品的浓度为30、60、150、750、1500ng
·
mL
‑1。
[0032]根据本专利技术的一些实施例，所述LC
‑
MS/MS方法的液相色谱的参数为：
[0033]色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 1.8μm(2.1
×
100mm)；自动进样器温度：5～10℃；柱温：35～45℃；流速：0.3mL
·
min
‑1；进样量：5～10μL；流动相A相：5～10mM乙酸铵，含有0.04～0.06％甲酸；流动相B相：含有0.15～0.25％甲酸的乙腈。
[0034]根据本专利技术的一些实施例，洗脱程序如下：
[0035][0036]根据本专利技术的一些实施例，所述LC
‑
MS/MS方法的质谱的参数为：
[0037]电喷雾正离子模式；离子源温度140～160℃；毛细管电压：1.8～2.2KV；锥孔电压：35～45V；脱溶剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种腺苷蛋氨酸含量检测样品的预处理方法，其特征在于，包括如下步骤：将待测样品与弱酸水溶液按体积比为100：(0.5～5)进行混合涡旋振荡。2.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述待测样品与弱酸水溶液按体积比为100：(1～3)进行混合。3.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述弱酸选自乙酸、甲酸或磷酸中的至少一种。4.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述待测样品包括血浆、血清中的至少一种。5.一种腺苷蛋氨酸含量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：通过如权利要求1至4任一项所述的方法对待测样品进行预处理，并加入内标工作液，得待测溶液；所述内标工作液中的内标为腺苷蛋氨酸
‑
d3；通过LC
‑
MS/MS方法对所述待测溶液进行检测。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述方法还包括绘制标准曲线的步骤，所述标准曲线样品通过如下方法制备：S101、将空白血浆与乙酸水溶液按体积比为100：(0.5～5)进行混合涡旋振荡得到混合液；将混合液和0.1％的甲酸水溶液按体积比1：(18～22)混合，得到替代基质；S102、将标准曲线工作液和替代基质按体积比1：(18～22)混合即得标准曲线样品。7.根据权利要求5所述的腺苷蛋氨酸含量检测方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑天东，唐智，黎明，张鹏，张素玲，周玲，欧阳冬生，
申请(专利权)人：长沙都正生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：