【技术实现步骤摘要】
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羟基香豆素的检测方法及试剂盒
[0001]本申请属于检测
,尤其涉及一种7
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羟基香豆素的检测方法及试剂盒。
技术介绍
[0002]香豆素的主要活性代谢产物为7
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羟基香豆素,它们均为脂溶性,在肠道内能被迅速吸收。但是7
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羟基香豆素很易被葡糖醛化,因此,在大多数物种中,香豆素在首过效应中迅速而广泛地被代谢。因此香豆素的在某一物种内的生物利用度取决于7
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羟基香豆素在该物种体内的活化途径。比如在人体或其它灵长类动物的肝脏中,这种代谢途径很活跃,因此很少有未代谢的香豆素进入体循环中,甚至是没有。基于此,在香豆素的治疗中,7
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羟基香豆素被认为是主要的发挥活性作用的物质。
[0003]当前主要以单一检测7
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羟基香豆素为主,检测技术涉及HPLC,LC
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MS/MS。同时检测2种物质则多应用于法医或毒理学家研究,极少用于药代动力学研究。这是因为目前的方法同时检测2种物质的检测灵敏度远远不够,尤其是定量下限的灵敏度,一般在0.25~100ng/ml,如Ursula Geister同步检测7
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羟基香豆素和去甲7
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羟基香豆素,各自的定量范围10~20ng/ml,3
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10ng/ml。此外,这些分析方法在检测7
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羟基香豆素的同时,还检测另外的抗抑郁和抗精神病药物,若分子量接近或有旋光异构体的话 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种7
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羟基香豆素的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:提供黄光试验条件;配制不同浓度的7
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羟基香豆素标准品的标准溶液,将所述不同浓度的7
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羟基香豆素标准品的标准溶液和空白血浆混合,配制不同浓度的标准曲线血浆样品,进行LC
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MS/MS色谱检测得到标准图谱,进行线性回归,得到血浆中7
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羟基香豆素的线性回归方程及相关系数,提供样品,将所述样品进行固相萃取得到待测样品;将所述待测样品在与所述标准曲线血浆样品相同的检测条件下进行LC
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MS/MS色谱检测,获得所述样品的质谱分析结果,确定所述待测样品中7
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羟基香豆素的含量。2.根据权利要求1所述的7
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羟基香豆素的检测方法,其特征在于,将所述样品进行固相萃取得到待测样品的步骤中,包括:将样品进行预处理得到预处理后样品;提供固相萃取柱,采用甲醇将所述固相萃取柱进行活化处理,再进行清洗,得到活化后固相萃取柱;将所述预处理后样品转移至所述活化后固相萃取柱,依次进行甲醇水溶液淋洗处理、乙腈溶剂洗脱处理,并收集洗脱液;将所述洗脱液进行氮吹处理,再加入乙腈水溶液进行复溶处理,得到所述待测样品。3.根据权利要求2所述的7
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羟基香豆素的检测方法,其特征在于,将样品进行预处理得到预处理后样品的步骤中,包括:将所述样品与内标工作液、磷酸水溶液进行混合处理,得到预处理后样品;和/或,采用甲醇将所述固相萃取柱进行活化处理,再进行清洗的步骤中,包括:采用500~550μL甲醇将所述固相萃取柱进行活化处理,再采用300~350μL超纯水进行清洗;和/或,依次进行甲醇水溶液淋洗处理、乙腈溶剂洗脱处理的步骤中,包括:添加300~350μL、质量百分浓度为2%~8%的甲醇水溶液进行淋洗处理2~3次;再加入200~300μL乙腈溶剂进行洗脱处理2~3次;和/或,将所述洗脱液进行氮吹处理的步骤中,包括:通入氮气,将所述洗脱液于30℃~35℃条件下进行吹干处理;和/或,加入乙腈水溶液进行复溶处理的步骤中,包括:加入300~350μL、质量百分浓度为10%~50%的乙腈水溶液进行复溶震荡处理2~5分钟。4.根据权利要求3所述的7
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羟基香豆素的检测方法,其特征在于,所述固相萃取柱选自96位固相萃取板,填料为Cleanert PEP,填料规格为2mg/孔;和/或,所述内标工作液的浓度为0.5~0.8ng
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mL
‑1;和/或,所述磷酸水溶液的质量百分浓度为1%~10%;和/或,所述内标工作液和所述磷酸工作液的体积比为1:2.5~3.0。5.根据权利要求1所述的7
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羟基香豆素的检测方法,其特征在于,所述LC
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MS/MS色谱检测中,所述液相色谱的检测条件如下:液相色谱仪为岛津ExionL CAD;色谱柱为:Waters ACQUITY UPLC HSS T3 1.8μm;自动进样器温度为10~15℃;柱温为40~45℃;<...
【专利技术属性】
技术研发人员:欧阳忠华,唐智,董峻,
申请(专利权)人:长沙都正生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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