一种鸽肉抗氧化肽与抗疲劳肽及其制备方法技术

本发明专利技术属于功能性肽领域，具体公开了一种鸽肉抗氧化肽与抗疲劳肽及其制备方法，包括如下步骤：(1)取鸽肉绞碎，加入水和中性蛋白酶与碱性蛋白酶的复配酶恒温酶解，经离心得到上清液，经冻干得到鸽肉抗氧化肽；(2)步骤(1)的上清液采用超滤膜分离法截留得到1

【技术实现步骤摘要】
一种鸽肉抗氧化肽与抗疲劳肽及其制备方法


[0001]本专利技术属于功能性肽领域，具体涉及一种抗氧化肽和抗疲劳肽及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]生物活性肽(bioactive peptides)通常是一种由2
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20个氨基酸残基组成的活性小肽，能够调节生物机体的生命活动以及生理活性，可受到多种方式的特异性切割而被从前体蛋白中释放出来，其功能包括且不限于抗氧化、抗衰老、降血压、抗疲劳。活性肽不仅能够供给人体必需氨基酸，还具备维持人体内环境稳定，提高机体酶活性与抗氧化能力等功能，拥有较大的研究价值与前景。
[0003]目前，抗氧化肽与抗疲劳肽有多种制定方法，包括化学/物理提取、微生物发酵、酸碱水解与蛋白酶水解等。其中提取与酸碱水解法存在成本高、副产物多的问题。因此在制备某类目标肽时，通常采用高性价比的蛋白酶酶解或微生物发酵法作为制备方法。而蛋白酶酶解由于影响因素较多，且产物复杂，具体工艺条件包括料液比、酶解时间、加酶量、温度等，根据产物需求确定一种较优的酶解工艺是蛋白酶解法的重中之重。
[0004]近年来，我国的种鸽养殖业发展迅猛、前景光明，其市场需求量极大。鸽肉富含氨基酸，蛋白质含量高而脂质含量低，且其脂肪酸与氨基酸构成非常符合人类的营养需求，是符合现代人健康营养需求的理想食品原料。目前，对于鸽肉制备活性肽的研究较少见诸报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种具有抗氧化与抗疲劳活性的肽，以新鲜鸽胸肉为原料，采用酶解法得到鸽肉抗氧化肽，进一步超滤分离纯化得到鸽肉抗疲劳肽，该鸽肉肽经试验具有抗氧化活性与抗疲劳活性。
[0006]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0007]一种鸽肉抗氧化肽与抗疲劳肽的制备方法，包括如下步骤：
[0008](1)取鸽肉绞碎，加入水和中性蛋白酶与碱性蛋白酶的复配酶恒温酶解，经离心得到上清液，经冻干得到鸽肉抗氧化肽；
[0009](2)步骤(1)的上清液采用超滤膜分离法截留得到1
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5kDa的组分，经冻干得到鸽肉抗疲劳肽。
[0010]优选地，步骤(1)中所述的恒温酶解条件为：鸽肉与水的料液比为1:0.5
‑
1:2.5g/mL，中性蛋白酶:碱性蛋白酶的质量比为0.1:1
‑
1:0.1，温度为40
‑
60℃，加酶量为400
‑
1200U/g，pH值为7
‑
9，酶解时间为2
‑
4h。
[0011]优选地，所述的恒温酶解条件为：料液比为1:1.5g/mL，中性蛋白酶与碱性蛋白酶的质量比为3：1，温度为50℃，加酶量800U/g，pH7.5，酶解时间为3h。
[0012]优选地，步骤(1)中鸽肉绞碎前需先取出明显脂肪与筋膜部分，并在摇床中恒温酶
解。
[0013]优选地，步骤(1)中所述的离心的条件为：4℃，10000
±
2000r/min，15
±
5min，取上清液。
[0014]优选地，步骤(2)中所述的上清液先用0.45μm水系滤膜预过滤。所述的鸽肉抗疲劳肽为经过分子量为1kDa、5kDa、10kDa的超滤膜分离后截留得到1
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5kDa分子量的组分。经小鼠力竭游泳试验后优选得到分子量为1
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5kDa的组分，作为鸽肉抗疲劳肽。
[0015]上述方法得到的鸽肉抗氧化肽与抗疲劳肽作为功能类食品添加剂的应用。
[0016]本专利技术以鸽胸肉为原料，采用蛋白酶酶解法复配酶解制备一种具有抗氧化与抗疲劳活性的肽。首先从四种蛋白酶中筛选出表现较好者作为复配用酶，在筛选完成后，通过单因素实验与响应面优化法对鸽肉复配酶解制备抗氧化肽的工艺进行优化，再对最佳条件下制备的鸽肉肽进行氨基酸测定，最后对鸽肉肽进行超滤，对不同分子量的鸽肉肽进行小鼠游泳试验后，通过分析各组小鼠的力竭游泳时间、血尿素氮含量、血SOD酶含量，得到一种具有抗疲劳功效的的组分，其分子量为1
‑
5kDa。以期为鸽肉的健康属性与潜在功能性价值提供研究基础与依据。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0018](1)本专利技术的抗疲劳肽是分子量低于5000Da的肽，较易被人体吸收，具有显著提高SOD酶酶活的效果，且抗疲劳功效显著。
[0019](2)本专利技术的抗氧化肽具有较高的必需氨基酸与抗氧化活性氨基酸含量，分别达47.97％与29.27％。
附图说明
[0020]图1为酶解复配酶对水解度和ABTS清除率的影响图。
[0021]图2为酶解pH值对水解度和ABTS清除率的影响图。
[0022]图3为酶解料液比对水解度和ABTS清除率的影响图。
[0023]图4为酶解加酶量对水解度和ABTS清除率的影响图。
[0024]图5为酶解时间对水解度和ABTS清除率的影响图。
[0025]图6为不同分子量的酶解液对小鼠力竭游泳时间的影响图。
[0026]图7为小鼠血清SOD酶活性检测结果图。
[0027]图8为小鼠血BUN水平检测结果图。
[0028]图9为不同蛋白酶酶解鸽肉的抗氧化活性图。
具体实施方式
[0029]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步具体详细描述，但本专利技术的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。
[0030]鸽肉购于梅州金绿现代农业发展有限公司。
[0031]鸡肉肽(CP)购于陕西哈拿生物科技有限公司。
[0032]牛磺酸、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶与碱性蛋白酶购于上海源叶生物科技有限公司。
[0033]实施例1
[0034]取鸽胸肉(21日鸽龄白羽王鸽)，除去明显脂肪与筋膜后绞碎，加入去离子水，加入中性蛋白酶与碱性蛋白酶的复配酶，调pH值，酶解一定时间后于95℃下高温灭酶15min，放冷后离心取上清液(4℃，10000r/min，15min)，进行抽滤进一步除去固形物，得到鸽肉肽(PP)，真空冷冻干燥后保存。
[0035]对酶解条件不同的产物进行OPA法水解度测定与ABTS自由基清除率测定。优化过程的具体结果见图1
‑
图5，综合图1
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图5可得出：料液比1:1.5(m：V)、复配酶配比3:1(中性蛋白酶:碱性蛋白酶)、加酶量800U/g、pH值为7.5，酶解时间3h为最优酶解条件。
[0036]实施例2
[0037]取鸽胸肉30g(21日鸽龄白羽王鸽)，除去明显脂肪与筋膜后绞碎，加入1:1.5g/mL(m:V)去离子水，加入中性蛋白酶与碱性蛋白酶的复配酶，质量比为3:1，按照温度50℃，加酶量800U/g，调pH值为7.5，酶解时间为3h的条件酶解，酶解完成后于95℃下高温灭酶15min，放冷后离心取上清液(4℃，10000r/min，15m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸽肉抗氧化肽与抗疲劳肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取鸽肉绞碎，加入水和中性蛋白酶与碱性蛋白酶的复配酶恒温酶解，经离心得到上清液，经冻干得到鸽肉抗氧化肽；(2)步骤(1)的上清液采用超滤膜分离法截留得到1
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5kDa的组分，经冻干得到鸽肉抗疲劳肽。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的恒温酶解条件为：鸽肉与水的料液比为1:0.5
‑
1:2.5g/mL，中性蛋白酶:碱性蛋白酶的质量比为0.1:1
‑
1:0.1，温度为40
‑
60℃，加酶量为400
‑
1200U/g，pH值为7
‑
9，酶解时间为2
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4h。3.根据权利要求2所述的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：张远红，杨娟，曾晓房，陈伟波，刘巧瑜，沈畅华，白卫东，肖更生，
申请(专利权)人：梅州市金绿现代农业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：