用于诊断SARS-CoV-2的组合物、试剂盒以及通过使用所述试剂盒诊断SARS-CoV-2的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于诊断某人是否已经感染新型冠状病毒(SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于诊断SARS
‑
CoV
‑
2的组合物、试剂盒以及通过使用所述试剂盒诊断SARS
‑
CoV
‑
2的方法


[0001]本专利技术涉及一种用于诊断新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2：严重急性呼吸综合征冠状病毒2)感染的组合物、包括所述组合物的试剂盒以及使用所述试剂盒诊断新型冠状病毒感染的方法。更具体地，本专利技术涉及一种用于诊断新型冠状病毒感染的组合物，所述组合物包括能够特异性扩增作为靶标以最大丰度存在于被新型冠状病毒感染的细胞中的前导序列的核酸寡聚体；包括所述组合物的试剂盒；以及使用所述试剂盒诊断新型冠状病毒感染的方法。

技术介绍

[0002]冠状病毒是一种具有长约27
‑
32kb的正义单链RNA基因组的病毒，并且会影响人和其他哺乳动物。已知冠状病毒通过复制和转录产生基因组RNA和6
‑
8个在3'端具有共同mRNA的亚基因组RNA(Imbert I.等人；A second,non
‑
canonical RNA
‑
dependent RNA polymerase in SARS Coronavirus.The EMBO Journal.2006,25:4933
‑
4942)。
[0003]冠状病毒感染在大多数人中表现出轻微的症状，但是具有高度传染性，并且在过去的20年中，已有10,000人或更多人感染SARS冠状病毒(严重急性呼吸综合征，病死率为10％)和MERS冠状病毒(中东呼吸综合征，病死率为37％)。
[0004]然而，最近发现的新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)感染是一种急性呼吸综合征，表现出诸如发热、咳嗽、呼吸短促、非典型肺炎等症状。
[0005]一般来说，使用诸如SSP
‑
PCR(单特异性引物聚合酶链式反应)、实时PCR、PCR
‑
RFLP(PCR
‑
限制性片段长度多态性分析)和测序的方法来分析病毒基因组。对于SARS
‑
CoV
‑
2感染的诊断，首先通过泛冠状病毒测试来检测冠状病毒，然后使用实时PCR和测序相结合的方法，这种方法的问题在于诊断感染需要24小时或更长时间。
[0006]最近，美国疾病控制和预防中心(CDC)和WHO开发并提供了RT实时PCR(逆转录实时PCR)测试以缩短测试时间(检测2019
‑
新型冠状病毒的实时RT
‑
PCR组套(Real
‑
time RT
‑
PCR Panel for detection 2019
‑
Novel Coronavirus).疾病控制和预防中心,呼吸道病毒分支，病毒疾病部门)。美国疾病控制和预防中心开发的测试方法是一种扩增N基因的三个区域的方法，所述N基因编码SARS
‑
CoV
‑
2的核衣壳蛋白。WHO开发的方法是能够同时筛选和确认的一步实时PCR，用于筛选与现有SARS相关病毒具有高度序列同源性的E基因区域，并且可以扩增能够特异性检测SARS
‑
CoV
‑
2以便确认SARS
‑
CoV
‑
2感染的RdRP(RNA依赖性RNA聚合酶)基因(图1)。
[0007]然而，由于E基因和RdRP基因在病毒感染细胞中的丰度较低，因此可能存在由于实验误差或取决于样品的RNA稳定性而无法检测的情况。
[0008]另外，美国疾病控制和预防中心和WHO使用人RNase P基因作为内部对照基因来确定RNA样品适用性，并且公开了用于扩增RNase P cDNA的引物和探针序列。然而，本申请的专利技术人查明了所公开的引物和探针序列是靶向第一外显子内部的引物而未考虑RNA剪接，
因此当应用于基因组DNA时可能发生假阳性扩增。当在测试点从样品中提取RNA时，基因组DNA通常不会被完全去除，因此在确定样品适用性时可能会出现错误。
[0009]针对这种技术背景，本申请的专利技术人开发了一种新的检测方法，所述方法靶向最初感染的细胞中最丰富的前导序列，以诊断SARS
‑
CoV
‑
2感染。另外，考虑到RNA剪接，构建了内部对照RNase P基因的引物，以防止发生基因组DNA的假阳性扩增。
[0010]本背景部分中所述的信息仅用于提高对本专利技术的背景的理解，并且它不应被解释为包括形成本专利技术所属领域的普通技术人员已经知晓的相关技术的信息。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的是解决在相关技术中遇到的问题，并且提供能够准确地诊断SARS
‑
CoV
‑
2感染而不产生假阳性的组合物、试剂盒以及使用所述试剂盒的诊断方法。
[0012]为了实现上述目的，本专利技术提供了一种用于诊断冠状病毒的组合物，所述组合物包括能够特异性扩增包括SEQ ID NO:10的序列的冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2：严重急性呼吸综合征冠状病毒2)前导子的核酸寡聚体。
[0013]另外，本专利技术提供了一种包括所述组合物的用于诊断冠状病毒的试剂盒。
[0014]另外，本专利技术提供了一种提供关于冠状病毒诊断的信息的方法，所述方法包括用能够特异性扩增包括SEQ ID NO:10的序列的冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2：严重急性呼吸综合征冠状病毒2)前导子的核酸寡聚体处理样品。
附图说明
[0015]图1示出了根据WHO建议用于诊断新型冠状病毒的基因；
[0016]图2示出了表达冠状病毒亚基因组RNA的机制；
[0017]图3示出了根据本专利技术的实施方案通过RT
‑
qPCR检测SARS
‑
CoV
‑
2前导RNA序列的结果；
[0018]图4示出了根据本专利技术的实施方案通过RT
‑
qPCR从SARS
‑
CoV
‑
2 RNA扩增前导序列的结果；
[0019]图5a示出了RNase P基因的结构和被本专利技术的核酸寡聚体扩增的区域；以及
[0020]图5b示出了通过RT
‑
qPCR扩增RNase P基因的结果。
具体实施方式
[0021]除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有与本专利技术所属领域的技术人员通常所理解的含义相同的含义。一般来说，本文所用的命名法是本领域熟知的，并且是典型的。
[0022]本申请的专利技术人确认了可以通过一种新的检测方法快速且准确地诊断新型冠状病毒感染，所述方法靶向以最大丰度存在于最初感染的细胞中的前导本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于诊断冠状病毒的组合物，所述组合物包含能够特异性扩增包含SEQ ID NO:10的序列的冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2：严重急性呼吸综合征冠状病毒2)前导子的核酸寡聚体。2.根据权利要求1所述的组合物，其中能够特异性扩增所述冠状病毒前导子的所述核酸寡聚体包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的序列。3.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物进一步包含能够与被所述核酸寡聚体特异性扩增的所述冠状病毒前导序列的产物互补杂交的探针。4.根据权利要求3所述的组合物，其中能够与所扩增的冠状病毒前导子互补杂交的所述探针包含SEQ ID NO:3的序列。5.一种用于诊断冠状病毒的试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1至4中任一项所述的组合物。6.一种提供关于冠状病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：安城皖，金明顺，
申请(专利权)人：基因特力株式会社，
类型：发明
国别省市：