本发明专利技术提供了一种抑制补体因子C3表达的干扰RNA及其应用。特别是，上述干扰RNA为siRNA，其包含GGACAAAGCCUUCUCCGAU(SEQ ID NO：1)和/或AUCGGAGAAGGCUUUGUCC(SEQ ID NO：2)，或者，GGGUGGAACUACUCCACAA(SEQ ID NO：3)和/或UUGUGGAGUAGUUCCACCC(SEQ ID NO：4)的核苷酸序列，将其递送到目的细胞中，其可有效抑制补体因子C3的表达，可以用于研究补体活化途径的调控，对制备治疗以补体因子C3表达增加为特征性致病因素的疾病的药物具有重要价值。特征性致病因素的疾病的药物具有重要价值。特征性致病因素的疾病的药物具有重要价值。
【技术实现步骤摘要】
一种抑制补体因子C3表达的干扰RNA及其应用
[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体地说，涉及一种抑制补体因子C3表达的干扰RNA及其应用。
技术介绍
[0002]补体系统是一组存在于人或脊椎动物血清及体液中的可溶性蛋白及一组存在于血细胞与其他组织细胞表面的膜结合蛋白和补体受体。生理条件下，绝大多数补体固有成分均以酶原或非活化形式存在，只有被某些物质激活后，补体各固有成分才能被触发，按一定顺序发生酶促级联反应，产生多种具有生物学活性的物质，辅助对抗感染的防御机制和介导多种炎症过程，引起组织损伤、炎症反应和过敏反应等许多免疫生物学效应。补体系统对于维护机体内环境的平衡具有重要作用，是机体先天免疫的重要组成成分。当补体过度激活时，可诱导炎症反应并影响凝血和纤维蛋白溶血系统，从而引起病理性损伤。
[0003]补体活化途径大致可分为三种，经典途径(第一途径)、旁路途径(第二途径)和凝集素途径。如非专利文献Kleczko,E.K.,et al.,Targeting the Complement Pathway as a Therapeutic Strategy in Lung Cancer.Front Immunol,2019.10:p.954.中的图2所示的补体途径，三种活化途径都需经由补体因子C3参与才能最终形成膜攻击复合物并发挥作用，因此补体因子C3的激活在补体系统中是最关键的一环。
[0004]补体因子C3是血液中含量最多的补体成分。正常情况下，补体因子C3可自然缓慢地裂解，产生的少量C3b可迅速被I因子灭活；而当补体因子C3被激活时，其裂解产物C3b又可在B因子和D因子的参与作用下合成新的C3bBb，后者进一步使补体因子C3裂解，这种正反馈效应使得激活显著放大，严重时形成炎症因子风暴。
[0005]通常，补体因子C3升高见于某些急性炎症或者传染病早期。近些年，研究发现补体因子C3水平在老年性黄斑变性和一些肿瘤发生时也有升高，与发病率有显著关联。
[0006]1、补体因子C3与老年性黄斑变性
[0007]老年性黄斑变性是一种进展性视网膜失调性疾病，其特征性表现为玻璃膜疣形成、黄斑区色素改变、地图状萎缩，以及脉络膜新生血管形成并伴有渗出，全世界范围内有超过3300万患者。在老年性黄斑变性患者的脉络膜组织中，有炎性细胞浸润，玻璃体疣中出现了各种免疫活性物质，补体活化分子明显升高。在发生老年性黄斑变性的视网膜色素上皮亚结构、玻璃体疣和脉络膜中，出现了补体因子C3的裂解成分。研究显示，C3a可加速血管内皮生长因子处理的新生血管性老年性黄斑变性模型的形成；当采用遗传技术抑制C3a的受体表达时，降低了激光损伤后的血管内皮生长因子表达、淋巴细胞招募和新生血管生成；利用抗体中和C3a或者用药物阻断其受体，也可减少新生血管的生成。因此补体因子C3是一个可能合理的候选靶标。
[0008]进一步研究显示，补体因子C3基因的变异与老年性黄斑变性显著相关，提示在老年性黄斑变性病因学上补体途径可能发挥了重要的作用。如已鉴定出的Lys155Gln、Lys65Gln、Arg735Trp、Ser1619Arg、Arg80Gly等变异，可能导致遗传力缺失，引起个体对老
年性黄斑变性易感性增加。
[0009]尽管补体因子C3基因型在Arg102Gly和Leu314Pro之间存在强烈的连锁不平衡，使得很难区分其对疾病发生是否都发挥了作用，但数据显示Arg102Gly多态性在老年性黄斑变性患者与对照组中分布截然不同(p＝0.001)，与CC基因型相比，GC基因型的OR是1.69(1.15
‑
2.49)，GG基因型的OR是6.48(1.87
‑
22.43)。与C等位基因相比，G等位基因的OR是2.31(0.48
‑
11)。GG和GC基因型和G等位基因与两种进展型老年性黄斑变性都显著相关，携带GG基因型的个体比携带CC基因型的个体发展成老年性黄斑变性的风险要高6倍，对于进展性老年性黄斑变性(渗出性和地图样萎缩)补体因子C3是一个相对强烈的易感基因。
[0010]鉴于以上研究，专门靶向针对补体因子C3的小分子药物Pegcetacoplan被开发用于地图样萎缩。
[0011]2、补体因子C3与肿瘤
[0012]补体因子C3基因与肺癌、胃癌、卵巢癌、皮肤癌等多种肿瘤疾病的发生、转归密切相关。
[0013]肿瘤微环境在肿瘤发生、进展、转移和复发中发挥了至关重要的作用。研究证实在肿瘤微环境中补体激活具有免疫调控作用。补体对肿瘤细胞可以发挥截然不同的两种作用：抗肿瘤效应，表现为膜结合补体调控蛋白、溶细胞膜攻击复合物低表达和中等的C5a浓度；促肿瘤效应，表现为膜结合补体调控蛋白、亚溶解型溶细胞膜攻击复合物高表达和高浓度的C5a。
[0014]多种类型的肿瘤中都发现了补体激活的失衡和补体蛋白的沉积。肺癌、胃癌个体中，C3a的mRNA水平和蛋白水平均都显著升高。当阻断或沉默补体因子C3、C5a或其受体或膜结合补体调控蛋白后，肿瘤的迁移、增殖受抑，疾病进展和患者的生存率都有所改善。在补体因子C3缺陷小鼠，原发肺癌和转移癌都受到了强烈的抑制，甚至在许多个体中检测不到肿瘤存在。这种生长抑制与IFNγ
+
/TNFα
+
/IL10
+
CD4
+
和CD8
+
T细胞数量增加相关。在多种原位接种肿瘤细胞系的模型，发现补体因子C3/C3受体自分泌信号传导环路参与了肿瘤生长的调控。这些证据都表明在肺癌进展过程中，补体激活是一个重要的调控因素，通过补体因子C3依赖的方式驱动免疫逃逸。这些结果证明了补体因子C3在肿瘤中发挥了作用，可以作为生物标志物和这类转移性皮肤癌的潜在的治疗靶标。
[0015]专利US20080090997A1公开了一种补体因子C3 siRNA，但是并没有具体公开本申请中补体因子C3的siRNA序列。
技术实现思路
[0016]本专利技术的第一方面，提供了一种干扰RNA。
[0017]所述的干扰RNA或其靶位点的序列包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4具有80％以上的同源性的核苷酸序列中的任一个或两个以上的组合或者包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列中的任一个或两个以上的组合。
[0018]所述的干扰RNA或其靶位点的序列包含SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，或者，所述的干扰RNA或其靶位点的序列包含SEQ ID NO：3和/或SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。
[0019]SEQ ID NO：1的具体序列为5
′‑
GGACAAAGCCUUCUCCGAU
‑3′
。
[0020]SEQ ID NO：2的具本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种干扰RNA，其特征在于，所述的干扰RNA或其靶位点的序列包含SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，或者，所述的干扰RNA或其靶位点的序列包含SEQ ID NO：3和/或SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的干扰RNA，其特征在于，所述干扰RNA选自：siRNA、dsRNA、shRNA、aiRNA、miRNA及其组合。3.根据权利要求1或2所述的干扰RNA，其特征在于，所述干扰RNA为siRNA，其正义链包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3所示核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4所示核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的干扰RNA，其特征在于，所述干扰RNA还包含悬挂碱基；优选的，所述悬挂碱基数目为1
‑
10，更优选为2
‑
4；优选的，所述悬挂碱基为脱氧核苷；优选的，所述悬挂碱基位于所述RNA的正义链和/或反义链的3
′
末端。5.根据权利要求4所述的干扰RNA，其特征在于，所述悬挂碱基为dTdT、dTdC或d...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾宏丽，林美娜，陈晓萌，孙宇，赵宣，
申请(专利权)人：北京键凯科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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