脱氧核酶及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种脱氧核酶，还涉及含有该脱氧核酶的试剂盒，还涉及含有该脱氧核酶的组合物。该脱氧核酶可作为基因治疗的候选药物，也可以用于制备检测金属离子或核酸的生物传感器或芯片。器或芯片。

【技术实现步骤摘要】
脱氧核酶及其用途


[0001]本专利技术涉及脱氧核酶，及其在制备基因治疗药物和生物传感器方面的应用，还涉及含有该脱氧核酶的试剂盒，还涉及含有该脱氧核酶的药物组合物。

技术介绍

[0002]脱氧核酶是一类具有催化活性的DNA分子，其催化反应的底物一般为核糖核酸(RNA)。已有的脱氧核酶都是金属离子依赖的酶。脱氧核酶与底物核酸之间以互补碱基配对结合，在金属离子的辅助下，形成特定的高级结构，发生催化反应，在底物核酸的特定位点发生裂解，将底物核酸裂解为两部分，使其失去原有的功能，因此，脱氧核酶可以作为基因治疗的一种选择。同时，由于金属离子是脱氧核酶的催化反应所必需的，通过这个反应可以检测金属离子，因而脱氧核酶还可作为检测金属离子的生物传感器。
[0003]作为基因治疗药物，脱氧核酶可以催化裂解致病性RNA(来自疾病的过表达RNA，病毒RNA，细菌RNA等)，从而抑制这些致病性RNA的翻译，达到治疗目的。
[0004]这些脱氧核酶所需的辅助金属离子，与生命活动是息息相关的。Mg
2+
，Ca
2+
，Zn<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.式17NE所示的脱氧核酶或其衍生物，5
’‑
d(N)
m
‑
dT
2.1
‑
d(CTCAGCGAGACGXA)
‑
d(N)
m
’
‑3’
17NE其中：d(N)
m
和d(N)
m
’
分别代表脱氧核酶5
’
端和3
’
端的底物核酸识别臂，其碱基序列与底物核酸序列互补配对，其碱基序列的组成和长度根据底物核酸序列确定，其中每个N各自独立地为核苷酸残基，m和m
’
代表N的数量，各自独立地为大于或等于6的自然数；dT
2.1
代表脱氧胸苷酸残基，与底物核酸序列的剪切位点rG或dG配对；X为式I或I
’
所示的核苷酸残基，其中R为(CH2)
n
R
’
，R
’
选自氨基、巯基、羟基、咪唑基、苯基或芘基，n为大于或等于1且小于或等于8的自然数(例如1、2、3、4、5、6、7、8)，所述衍生物与所述脱氧核酶的区别仅在于5
’
端或3
’
端被标记物标记，并且保留了所述脱氧核酶的功能，优选地，所述标记物为能够产生检测信号的物质，例如能够产生荧光的物质(例如6
‑
羧基荧光素)、能够猝灭荧光信号的物质(例如荧光猝灭分子(BHQ1))、能够产生放射性信号的物质(例如放射性同位素，例如放射性
32
P)或能够产生电信号的物质。2.权利要求1所述的脱氧核酶或其衍生物，其中R为(CH2)
n
R
’
，其中R
’
和n的定义如权利要求1所述；优选地，R
’
为氨基、巯基、羟基或咪唑基；优选地，R
’
为氨基；优选地，n为大于或等于2且小于或等于6的自然数，例如2、3、4、5或6；优选地，n为2、3或4；优选地，n为3。3.权利要求1所述的脱氧核酶或其衍生物，其中所述脱氧核酶的催化结构域为5
’‑
d(CTCAGCGAGACGXA)
‑3’
，其序列中的碱基位置标记为5
’‑
d(C3T4C5A6G7C8G9A
10
G
11
A
12
C
13
G
14
X
15
A
15.0
)
‑3’
，该催化结构域内分为三个部分：1)由三对互补碱基，即C3T4C5与G
11
A
10
G9之间形成的茎；2)末端环结构A6G7C8；3)大环结构域A
12
C
13
G
14
X
15
A
15.0
；优选地，m和m
’
各自独立地为大于或等于6且小于或等于12的自然数，例如6，7，8，9，10，11，12；优选地，m和m
’
各自独立地为大于或等于6且小于或等于9的自然数，例如6，7，8，9。4.权利要求3所述的脱氧核酶或其衍生物，所述底物核酸为3
’‑
(N
’
)
x
‑
G
‑
rA
‑
(N
’
)
y
‑5’
所示的RNA或者包含至少一个RNA单元rA的DNA
‑
RNA
‑
DNA嵌合结构，其中G代表rG或dG，3
’‑
G
‑
rA
‑5’
为脱氧核酶的裂解位点，rA 未参与碱基配对，rG或dG与所述脱氧核酶中的dT
2.1
配对，(N
’
)
x
是能与所述脱氧核酶5
’
端的底物核酸识别臂(N)
m
形成碱基互补配对的DNA序列或RNA序列，(N
’
)
y
是能与所述脱氧核酶3
’
端的底物核酸识别臂(N)
m
’
形成碱基互补配对的DNA序列或RNA序列，每个N
’
各自独立地为核苷酸残基，x和y代表N
’
的数量，并且x和y各自独立地为大于或等于6的自然数。5.权利要求4所述的脱氧核酶或其衍生物，其中所述底物核酸为合成的RNA或DNA
‑
RNA
‑
DNA，或者所述底物核酸为来自质粒表达的RNA或来自生命体的RNA。6.权利要求4所述的脱氧核酶或其衍生物，其中x和y各自独立地为大于或等于6且小于或等于12的自然数，例如6，7，8，9，10，11，12；优选地，x和y各自独立地为大于或等于6且小于或等于9的自然数，例如6，7，8，9；优选地，x&gt;m，y&gt;m
’
，(N
’
)
x
中邻接G
‑
rA的部分碱基序列与(N)
m
互补，(N
’
)
y
中邻接G
‑
rA的部分碱基序列与(N)
m
’
互补；或者x和m相等，y和m
’
相等，(N
’
)
x
与d(N)
m
的碱基完全互补，(N
’
)
y
与d(N)
m
’
的碱基完全互补。7.权利要求1所述的脱氧核酶或其衍生物，其中所述脱氧核酶的序列为：d(AGG ATC TAT CTC AGC GAG ACG XA GGC TCC AT)，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：何军林，杜闪闪，李阳，史卫国，肖军海，张文洁，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：