一种抑制B7-H3基因表达的干扰RNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制B7

【技术实现步骤摘要】
一种抑制B7
‑
H3基因表达的干扰RNA及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学与生物医药
，特别涉及一种抑制B7
‑
H3表达的干扰RNA，特别是siRNA，及其应用。

技术介绍

[0002]T细胞介导的细胞免疫在抗癌过程中发挥着重要作用。T细胞的活化需要依赖两部分信号，第一个信号来自于T细胞受体TCR对抗原呈递细胞(Antigen
‑
presenting cells，APC)表面的主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex，MHC)的特异性识别，第二个信号来自于APC表面的共刺激分子(如B7家族成员)或其他分子。除了共刺激分子之外，APC表面还有起协同抑制作用的共抑制分子，可以抑制T细胞，防止其过度活化。共刺激分子和共抑制分子之间的平衡决定着T细胞的功能和耐受(Nurieva R，EMBO J，2006；Ni L,Immunol Rev,2017)，这些分子也称为免疫检查点(Immune checkpionts)。免疫检查点不仅表达在APC的表面，同样也存在于肿瘤细胞表面。肿瘤细胞通过其表面的共抑制分子与T细胞表面相应的受体互作，抑制T细胞的免疫反应，从而实现免疫逃逸。
[0003]B7
‑
H3(CD276，Gene ID:80381)是B7家族中的一员，位于人15号染色体，具有4个转录本。B7
‑
H3是I型跨膜蛋白，定位于细胞膜上，存在4IgB7
‑r/>H3和2IgB7
‑
H3两个亚型。早期的研究发现，B7
‑
H3是一种共刺激分子，可以诱导T细胞的免疫反应(Chapoval AI,Nat Immunol,2001)；而随后越来越多的研究表明，B7
‑
H3更多的是作为共抑制分子发挥作用，帮助肿瘤细胞实现免疫逃逸。最近的研究表明，B7
‑
H3可以促进肿瘤细胞(包括头颈部鳞状细胞癌、前列腺癌等)的增殖、侵袭、转移等。此外，研究还表明B7
‑
H3能够增强肿瘤细胞对放射性药物和化疗药物的耐药性(Zhang W,Int J Oncol,2015；Wang C,Cell Stem Cell,2021)。B7
‑
H3蛋白在多种肿瘤中均有表达，如胃癌、肺癌、前列腺癌、肾癌、卵巢癌、子宫内膜癌、结直肠癌、胰腺癌、肝癌、口腔癌、膀胱癌、乳腺癌等(Ni L,Immunol Rev.2017；Kontos F,Clin Cancer Res,2021)，而在正常组织中限制性表达(Yuan H,J Urol,2011)，这使得通过抑制B7
‑
H3的表达来治疗癌症成为可能。
[0004]专利CN100574803公开了一种用于治疗肿瘤性疾病的抗体疗法，使用免疫调节抗体，优选为抗B7抗体和抗CD20抗体，以引发人抗体效应机制，导致靶细胞的凋亡或死亡。专利CN113402619B公开了一种靶向B7
‑
H3共表达IL
‑
21的全人源嵌合抗原受体、iNKT细胞及其用途，所述嵌合抗原受体包含B7
‑
H3抗原结合结构域、跨膜结构域、细胞内信号结构域以及IL
‑
21，经实验验证制备得到的靶向B7
‑
H3的B7
‑
H3.CAR/IL
‑
21
‑
iNKT细胞具有较强的细胞因子释放能力和肿瘤细胞杀伤能力，能够有效清除肿瘤细胞。
[0005]目前抑制免疫检查点的药物以抗体药为主，但抗体药的研发受限于蛋白分子的空间结构，这使得一些靶点“难以成药”。干扰RNA(如siRNA)是一段约20nt的短RNA，也是RISC沉默复合体(RNA
‑
induced silencing complex)的组成部分之一，干扰RNA利用碱基互补配对原则帮助沉默复合体特异地靶向mRNA，并诱导后者沉默或降解。相比抗体药的局限性，干扰RNA理论上可以沉默任何基因。因此，本申请采用干扰RNA沉默B7
‑
H3。

技术实现思路

[0006]本专利技术克服了现有技术中存在的缺陷，提供了一种干扰RNA，其能够特异性靶向B7
‑
H3的mRNA并使其沉默，降低B7
‑
H3的表达进而削减肿瘤细胞对T细胞的抑制作用，增强免疫反应，从而用于治疗实体瘤(例如头颈部鳞状细胞癌、前列腺癌)。
[0007]本专利技术第一方面，提供了一种靶向B7
‑
H3的干扰RNA。
[0008]具体地，所述的干扰RNA抑制B7
‑
H3 mRNA的表达。
[0009]具体地，上述干扰RNA包含正义链和与其反向互补配对的反义链。
[0010]具体地，上述的正义链包含SEQ ID NO：26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72和74中的任一个或两个以上所示的核苷酸序列；
[0011]具体地，上述的反义链包含SEQ ID NO：27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、57、59、61、63、65、67、69、71、73和75中的任一个或两个以上所示的核苷酸序列。
[0012]具体地，上述干扰RNA选自：siRNA、dsRNA、shRNA、aiRNA、miRNA及其组合。
[0013]在本专利技术的一个实施方式中，上述干扰RNA为siRNA。具体为一段长度在19
‑
23nt的双链RNA，进入细胞后经过一系列酶的加工，与其他蛋白组成RISC复合体，通过碱基互补配对的方式，特异性的靶向目的基因并使其沉默。
[0014]在本专利技术的一个实施方式中，上述干扰RNA是化学合成的。
[0015]具体地，上述干扰RNA的靶序列包含如SEQ ID NO：1
‑
25任一个或两个以上(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个)所示的核苷酸序列。
[0016]具体地，上述干扰RNA的靶序列由如SEQ ID NO：1
‑
25任一个或两个以上(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个)所示的核苷酸序列组成。
[0017]具体地，所述干扰RNA还包括悬挂碱基；优选的，所述的干扰RNA包含1
‑
10个悬挂碱基。
[0018]具体地，所述的悬挂碱基位于所述的干扰RNA的正义链和/或反义链的3
’
末端。
[0019]在本专利技术的一个实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向B7
‑
H3的干扰RNA，其靶序列包含如SEQ ID NO：1
‑
25任一个或两个以上所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的干扰RNA，其特征在于，所述干扰RNA选自：siRNA、dsRNA、shRNA、aiRNA、miRNA及其组合。3.根据权利要求1或2所述的干扰RNA，其特征在于，所述干扰RNA还包括悬挂碱基；优选的，所述的干扰RNA包含1
‑
10个悬挂碱基。4.根据权利要求3所述的干扰RNA，其特征在于，所述的悬挂碱基位于所述的干扰RNA的正义链和/或反义链的3
’
末端。5.根据权利要求3或4所述的干扰RNA，其特征在于，所述的悬挂碱基为脱氧核苷；优选的，所述的悬挂碱基为dTdT、dTdC或dUdU。6.根据权利要求1
‑
5任一所述的干扰RNA，所述的干扰RNA包含正义链和/或反义链；优选的，所述的正义链包含SEQ ID NO：26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72和74中的任一个或两个以上所示的核苷酸序列；优选的，所述的反义链包含SEQ ID NO：27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、57、59、61、63、65、67、69、71、73和75中的任一个或两个以上所示的核苷酸序列。7.根据权利要求1
‑
6任一所述的干扰RNA，其特征在于，所述干扰RNA还包括至少一个修饰；所述的修饰包括在碱基、糖环和/或磷酸盐的化学结构上进行的修饰；优选的，碱基的修饰包括但不限于5位嘧啶修饰、8位嘌呤修饰和/或5
‑
溴尿嘧啶取代；优选的，所述的糖环的修饰包括但不限于2'
‑
OH被H、OZ、Z、halo、SH、SZ、NH2、NHZ、NZ2或CN等基团取代，其中Z为烷基基团。8.根据权利要求7所述的干扰RNA，其特征在于，所述的修饰还包括具有肌苷、辫苷、黄嘌呤、2'
‑
甲基核糖、非天然磷酸二酯键和/或肽的核苷酸。9.一种包含权利要求1
‑
8任一所述的干扰RNA的递送系统，其特征在于，所述的递送系统包含权利要求1
‑
8任一所述的干扰RNA和载体。10.根据权利要求9所述的递送系统，其特征在于，所述的载体为病毒载体或非病毒载体；优选的，所述病毒载体包括：慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、痘病毒载体或疱疹病毒载体中一种或两种及以上的组合；优选的，所述非病毒载体包括：脂质体、脂质纳米颗粒、聚合物、多肽、抗体、适配体中任一种或两种及以上的组合。11.根据权利要求10所述的递送系统，其特征在于，所述脂质纳米颗粒/脂质体包括：阳离子脂质、中性脂质、聚乙二醇脂质、磷脂、固醇、阴离子脂质中的一种或两种以上组合。12.根据权利要求11所述的递送系统，其特征在于，所述阳离子脂质包括：十八酰胺(SA)、溴化月桂基三甲基铵、溴化十六烷基三甲基铵、溴化肉豆蔻基三甲基铵、溴化二甲基二
‑
十八铵(DDAB)、((4
‑
羟基丁基)氮杂二烷基)双(己烷
‑
6，1
‑
二基)双(2
‑
己基癸酸酯)(ALC
‑
0315)、1,2
‑
二油酰基氧基
‑3‑
(三甲基铵基)丙烷(DOTAP)、1,2
‑
二
‑
(9Z
‑
十八烯酰基)
‑3‑
三甲基铵
‑
丙烷和1,2
‑
二
‑
十六酰基
‑3‑
三甲基铵
‑
丙烷、3β
‑
[N
‑
(N',N'
‑
二甲基氨基乙烷)
‑
氨基甲酰基]胆固醇(DC胆固醇)、二甲基二十八烷基铵(DDA)、1,2
‑
二肉豆蔻酰基
‑3‑
三甲基铵丙烷(DMTAP)、二棕榈酰(C16:0)三甲基铵丙烷(DPTAP)、二硬脂酰基三甲基铵丙烷
(DSTAP)、N
‑
[1
‑
(2,3
‑
二烯丙氧基)丙基]
‑
N,N,N
‑
三甲基氯化铵(DOTMA)、N,N
‑
二油酰基
‑
N,N
‑
二甲基氯化铵(DODAC)、1,2
‑
二油酰基
‑
sn
‑
丙三氧基
‑3‑
乙基磷酸胆碱(DOEPC)、1,2
‑
二油酰基
‑3‑
二甲基铵丙烷(DODAP)、1,2
‑
二亚油基氧基
‑3‑
二甲基氨基丙烷(DLinDMA)、1,2
‑
二
‑
十四酰基
‑3‑
二甲基铵
‑
丙烷、1,2
‑
二
‑
十六酰基
‑3‑
二甲基铵
‑
丙烷和1,2
‑
二
‑
十八酰基
‑3‑
二甲基铵
‑
丙烷、1,2
‑
二油酰基
‑
c
‑
(4'
‑
三甲基铵)
‑
丁酰基
‑
sn
‑
甘油(DOTB)、二
‑
十八酰胺
‑
丙氨酰基精胺、SAINT
‑
2、聚阳离子脂质2,3
‑
二油酰基氧基
‑
N
‑
[2(精胺
‑
羧酰氨基)乙基]
‑
N,N
‑
二甲基
‑1‑
丙铵三氟乙酸盐(DOSPA)、(SM
‑
102)、102)、等中的一种或两种以上的组合。13.根据权利要求11所述的递送系统，其特征在于，所述中性脂质包括：1,2
‑
二硬脂酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱(DSPC)、1,2
‑
二棕榈酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑

【专利技术属性】
技术研发人员：杨脉，林美娜，贾宏丽，王庆彬，陈晓萌，赵宣，
申请(专利权)人：北京键凯科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：