通过原位杂交检测靶核酸的方法及其试剂盒技术

一种检测细胞中包括小非编码RNA(sncRNA)、微RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、PIWI相互作用RNA(piRNA)或反义寡核苷酸(ASO)分子在内的靶核酸的方法，所述方法包括在所述初始固定步骤之后在原位杂交之前的使用含醛固定剂的后固定步骤。固定剂的后固定步骤。固定剂的后固定步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过原位杂交检测靶核酸的方法及其试剂盒
1.

[0001]在一些实施方案中，本文提供了用于制备用于原位杂交的生物样本的方法，其包括但不限于检测小非编码RNA(sncRNA)、微RNA(miRNA)、PIWI相互作用RNA(piRNA)、小干扰RNA(siRNA)或反义寡核苷酸(ASO)分子。还提供了一种用于检测细胞中的靶核酸的方法。在某些实施方案中，本文还提供了用于实施所述方法的试剂盒和通过所述方法制备的生物样本。
2.
技术介绍

[0002]原位杂交(ISH)是允许精确检测组织学切片内的核酸的特定区段的技术。ISH的根本基础是，如果核酸在组织学标本中得到适当保存，则可以通过施加与报告分子附接的互补核酸链来检测。靶核酸可以是脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。
[0003]细胞中存在不同类型的RNA，包括(i)信使RNA(mRNA)，其编码多肽的氨基酸序列；(ii)转移RNA(tRNA)，其在翻译过程中将氨基酸带入核糖体；(iii)核糖体RNA(rRNA)，其构成核糖体，即翻译mRNA的细胞器；和(iv)sncRNA，其参与各种RN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于制备用于原位杂交的生物样本的方法，所述方法包括：i.第一固定步骤，其包括用剂固定所述生物样本；以及ii.在所述第一固定步骤之后并且在所述原位杂交之前的后固定步骤，其包括用含醛固定剂固定所述生物样本。2.如权利要求1所述的方法，其中所述原位杂交是RNA原位杂交或DNA原位杂交。3.如权利要求2所述的方法，其中所述原位杂交检测所述生物样本中包含100个或更少核苷酸的核酸。4.如权利要求2所述的方法，其中所述RNA原位杂交检测包含小于50个核苷酸的RNA。5.如权利要求2所述的方法，其中所述RNA原位杂交检测包含介于15个至40个之间的核苷酸的RNA。6.如权利要求2所述的方法，其中所述RNA原位杂交检测小非编码RNA(sncRNA)。7.如权利要求2所述的方法，其中所述RNA原位杂交或所述DNA原位杂交检测微RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、PIWI相互作用RNA(piRNA)或反义寡核苷酸(ASO)分子，并且其中所述RNA原位杂交或所述DNA原位杂交检测内源性或外源性核酸。8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述生物样本是组织标本或者来源于组织标本。9.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述生物样本是血液样本或来源于血液样本。10.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述生物样本是细胞学样本或来源于细胞学样本。11.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述生物样本包括培养的细胞或外泌体。12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述第一固定步骤中的所述剂选自由甲醛、戊二醛、甲醇、乙醇和丙酮组成的组。13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述后固定步骤中的所述含醛固定剂包含甲醛或戊二醛。14.如权利要求13所述的方法，其中所述含醛固定剂包含约5％至约50％的甲醛。15.如权利要求13所述的方法，其中所述含醛固定剂包含小于约12％的甲醛，并且其中所述后固定步骤包括用所述含醛固定剂将所述生物样本固定超过约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18小时。16.如权利要求13所述的方法，其中所述含醛固定剂包含至少约12％的甲醛，并且其中所述后固定步骤包括用所述含醛固定剂将所述生物样本固定约2小时。17.如权利要求13所述的方法，其中所述含醛固定剂包含约12％至约37％的甲醛，并且其中所述后固定步骤包括用所述含醛固定剂将所述生物样本固定约2小时。18.如权利要求13至17中任一项所述的方法，其中所述后固定步骤中的所述含醛固定剂除包含甲醛或戊二醛外还包含另外的剂。19.一种用于检测细胞中靶核酸的方法，其包括：(i)根据权利要求1至18中任一项所述的方法制备生物样本；(ii)提供至少一组一种或多种能够与所述靶核酸杂交的靶探针；
(iii)提供能够与所述组的一种或多种靶探针杂交的产生信号的复合物，其中所述产生信号的复合物包含能够与所述组的一种或多种靶探针和标记探针杂交的核酸组分；(iv)使所述靶核酸与所述组的一种或多种靶探针杂交；以及(v)将所述产生信号的复合物捕获到所述组的一种或多种靶探针，并且从而将所述产生信号的复合物捕获到所述靶核酸。20.如权利要求19所述的方法，其中所述一种或多种靶探针中的每一种靶探针均包含靶(T)区段和标记(L)区段，其中所述T区段是与所述靶核酸上的区段互补的核酸序列，并且所述L区段是与所述产生信号的复合物的所述核酸组分上的区段互补的核酸序列，并且其中所述一种或多种靶探针的所述T区段与所述靶核酸的非重叠区互补，并且所述一种或多种靶探针的所述L区段与所述产生信号的复合物的所述核酸组分的非重叠区互补。21.如权利要求19至20中任一项所述的方法，其中所述靶核酸包含小于100个核苷酸。22.如权利要求19至20中任一项所述的方法，其中所述靶核酸是包含小于50个核苷酸的RNA。23.如权利要求19至20中任一项所述的方法，其中所述靶核酸是包含介于15个至40个之间的核苷酸的RNA。24.如权利要求19至20中任一项所述的方法，其中所述靶核酸是小非编码RNA(sncRNA)。25.如权利要求19至20中任一项所述的方法，其中所述靶核酸是微RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、PIWI相互作用RNA(piRNA)或反义寡核苷酸(ASO)分子，并且其中任选地所述RNA原位杂交或DNA原位杂交用于检测内源性或外源性核酸。26.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述方法被用于鉴定组织或细胞类型。27.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述方法被用于确定发育阶段。28.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述方法被用于表征成人组织。29.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述方法被用于基于一种或多种改变的小RNA的表达或病原体衍生的小RNA的存在诊断疾病或病症。30.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述方法被用于监测或确定基于小RNA的疗法的有效性。31.一种使靶核酸保存在预先固定的样本中以对所述靶核酸进行原位检测的方法，所述方法包括将含醛固定剂施加至所述样本，然后使用一组一种或多种与所述靶核酸杂交的探针进行原位杂交检测测定，其中所述靶核酸包含小于100个核苷酸。32.一种原位检测预先固定的样本中的靶核酸的方法，所述方法包括：(i)将含醛固定剂施加至所述样本；以及(ii)使用一组一种或多种与所述靶核酸杂交的探针进行原位杂交检测测定；其中所述靶核酸包含小于100个核苷酸。33.如权利要求31或权利要求32所述的方法，其中所述样本是组织标本或来源于组织标本。34.如权利要求31或权利要求32所述的方法，其中所述样本是血液样本或来源于血液样本。
35.如权利要求31或权利要求32所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：MA马塔，A萨哈扬，XJ马，B张，L王，LC王，
申请(专利权)人：领先细胞医疗诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：