双链核酸的原位检测及其相关方法技术

本发明专利技术提供了用于检测靶双链核酸的方法，包括用于原位杂交测定的方法。本发明专利技术还提供了具有检测到的靶双链核酸的固定和透化细胞的样品以及含有此类样品的载玻片。本发明专利技术另外提供了用于检测靶双链核酸的试剂盒。供了用于检测靶双链核酸的试剂盒。供了用于检测靶双链核酸的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双链核酸的原位检测及其相关方法
[0001]本申请要求2019年3月12日提交的美国临时申请号62/817,449的权益，所述临时申请的全部内容以引用的方式并入本文。
[0002]专利技术背景
[0003]本专利技术总体上涉及核酸的检测，并且更具体地涉及双链核酸的原位检测。
[0004]DNA原位杂交(ISH)是广泛用于检测染色体、细胞或组织中的特定序列、同时保留染色体、细胞和组织背景的分子生物学技术(Ratan等人,Cureus 9(6):e1325.doi:10.7759/cureus.1325(2017))。它在研究和诊断方面具有许多应用(Hu等人,Biomark.Res.2(1):3.doi:10.1186/2050
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3(2014)；Ratan等人,同上,2017；Weier等人,Expert Rev.Mol.Diagn.2(2):109
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119(2002))。然而，当前的DNA ISH方法只能检测大染色体区域(>100kb)，因为它们使用大探针并且对较短序列本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种检测双链核酸的方法，所述方法包括：(A)使包含含有一种或多种双链核酸的细胞的样品与靶探针组接触，其中所述靶探针组包含一对靶探针，所述一对靶探针包含与靶双链核酸的第一链特异性地杂交的第一探针和与所述双链核酸的第二链特异性地杂交的第二探针；(B)使所述样品与前置扩增子接触，所述前置扩增子包含用于所述第一靶探针的结合位点、用于所述第二靶探针的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(C)使所述样品与多个扩增子接触，其中所述扩增子包含用于所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(D)使所述样品与多个标记探针接触，其中所述标记探针包含标记和用于所述扩增子的结合位点；以及(E)检测与所述靶双链核酸结合的所述标记探针，从而检测所述靶双链核酸。2.如权利要求1所述的方法，其中所述靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述双链核酸是DNA、RNA或DNA/RNA杂合体。4.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。5.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。6.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。7.一种固定和透化细胞的样品，所述样品包含：(A)至少一个含有靶双链核酸的固定和透化细胞；(B)靶探针组，其中所述靶探针组包含一对靶探针，所述一对靶探针包含与靶双链核酸的第一链特异性地杂交的第一探针和与所述双链核酸的第二链特异性地杂交的第二探针；(C)前置扩增子，所述前置扩增子包含用于所述第一靶探针的结合位点、用于所述第二靶探针的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与所述第一靶探针和所述第二靶探针杂交；(D)多个扩增子，其中所述扩增子包含用于所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，并且其中所述扩增子与所述前置扩增子杂交；以及(E)多个标记探针，其中所述标记探针包含标记和用于所述扩增子的结合位点，其中所述标记探针与所述扩增子杂交；其中所述杂交在所述靶双链核酸上提供可检测的标记。8.如权利要求7所述的样品，其中所述靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。9.如权利要求7或8所述的样品，其中所述双链核酸是DNA、RNA或DNA/RNA杂合体。10.如权利要求7
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9中任一项所述的样品，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。11.如权利要求7
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9中任一项所述的样品，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。12.如权利要求7
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9中任一项所述的样品，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。13.一种载玻片，所述载玻片包含：
(A)其上固定有包含至少一个含有靶双链核酸的固定和透化细胞的多个固定和透化细胞的载玻片；(B)靶探针组，其中所述靶探针组包含一对靶探针，所述一对靶探针包含与靶双链核酸的第一链特异性地杂交的第一探针和与所述双链核酸的第二链特异性地杂交的第二探针；(C)前置扩增子，所述前置扩增子包含用于所述第一靶探针的结合位点、用于所述第二靶探针的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与所述第一靶探针和所述第二靶探针杂交；(D)多个扩增子，其中所述扩增子包含用于所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，并且其中所述扩增子与所述前置扩增子杂交；以及(E)多个标记探针，其中所述标记探针包含标记和用于所述扩增子的结合位点，其中所述标记探针与所述扩增子杂交；其中所述杂交在所述靶双链核酸上提供可检测的标记。14.如权利要求13所述的载玻片，其中所述靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。15.如权利要求13或14所述的载玻片，其中所述双链核酸是DNA、RNA或DNA/RNA杂合体。16.如权利要求13
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15中任一项所述的载玻片，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。17.如权利要求13
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15中任一项所述的载玻片，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。18.如权利要求13
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15中任一项所述的载玻片，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。19.一种用于检测靶双链核酸的试剂盒，所述试剂盒包含：(A)前置扩增子，所述前置扩增子包含用于所述第一靶探针的结合位点、用于所述第二靶探针的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(B)多个扩增子，其中所述扩增子包含用于所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；以及(C)多个标记探针，其中所述标记探针包含标记和用于所述扩增子的结合位点。20.如权利要求19所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含靶探针组，其中所述靶探针组包含一对靶探针，所述一对靶探针包含与靶双链核酸的第一链特异性地杂交的第一探针和与所述靶双链核酸的第二链特异性地杂交的第二探针。21.如权利要求20所述的试剂盒，其中所述靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。22.如权利要求19
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21中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含用于透化细胞的至少一种试剂。23.一种检测双链核酸的方法，所述方法包括：(A)使包含含有一种或多种双链核酸的细胞的样品与靶探针组接触，其中所述靶探针组包含一对靶探针，所述一对靶探针包含与靶双链核酸的第一链特异性地杂交的第一探针和与所述双链核酸的第二链特异性地杂交的第二探针；(B)使所述样品与前置前置扩增子组接触，所述前置前置扩增子组包含第一前置前置
扩增子和第二前置前置扩增子，其中所述第一前置前置扩增子包含用于所述第一靶探针的结合位点，其中所述第二前置前置扩增子包含用于所述第二靶探针的结合位点，并且其中所述第一前置前置扩增子和所述第二前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点；(C)使所述样品与多个前置扩增子接触，其中所述前置扩增子包含用于所述第一前置前置扩增子和所述第二前置前置扩增子的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(D)使所述样品与多个扩增子接触，其中所述扩增子包含用于所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(E)使所述样品与多个标记探针接触，其中所述标记探针包含标记和用于所述扩增子的结合位点；以及(F)检测与所述靶双链核酸结合的所述标记探针，从而检测所述靶双链核酸。24.如权利要求23所述的方法，其中所述前置扩增子包含用于所述第一前置前置扩增子和所述第二前置前置扩增子的结合位点，其中与两个前置前置扩增子的结合之间的解链温度高于仅一个前置前置扩增子的结合之间的解链温度。25.如权利要求23或24所述的方法，其中所述靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。26.如权利要求23
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25中任一项所述的方法，其中所述双链核酸是DNA、RNA或DNA/RNA杂合体。27.如权利要求23
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26中任一项所述的方法，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。28.如权利要求23
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26中任一项所述的方法，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。29.如权利要求23
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26中任一项所述的方法，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。30.一种固定和透化细胞的样品，所述样品包含：(A)至少一个含有靶双链核酸的固定和透化细胞；(B)靶探针组，其中所述靶探针组包含一对靶探针，所述一对靶探针包含与靶双链核酸的第一链特异性地杂交的第一探针和与所述双链核酸的第二链特异性地杂交的第二探针；(C)前置前置扩增子组，所述前置前置扩增子组包含第一前置前置扩增子和第二前置前置扩增子，其中所述第一前置前置扩增子包含用于所述第一靶探针的结合位点，其中所述第二前置前置扩增子包含用于所述第二靶探针的结合位点，其中所述第一前置前置扩增子和所述第二前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点，并且其中所述前置前置扩增子与所述第一靶探针和所述第二靶探针杂交；(D)多个前置扩增子，其中所述前置扩增子包含用于所述第一前置前置扩增子和所述第二前置前置扩增子的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与所述第一前置前置扩增子和所述第二前置前置扩增子杂交；(E)多个扩增子，其中所述扩增子包含用于所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与所述前置扩增子杂交；以及(F)多个标记探针，其中所述标记探针包含标记和用于所述扩增子的结合位点，其中所
述标记探针与所述扩增子杂交；其中所述杂交在所述靶双链核酸上提供可检测的标记。31.如权利要求30所述的样品，其中所述前置扩增子包含用于所述第一前置前置扩增子和所述第二前置前置扩增子的结合位点，其中与两个前置前置扩增子的结合之间的解链温度高于仅一个前置前置扩增子的结合之间的解链温度。32.如权利要求30或31所述的样品，其中所述靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。33.如权利要求30
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32中任一项所述的样品，其中所述双链核酸是DNA、RNA或DNA/RNA杂合体。34.如权利要求30
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33中任一项所述的样品，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。35.如权利要求30
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33中任一项所述的样品，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。36.如权利要求30
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33中任一项所述的样品，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。37.一种载玻片，所述载玻片包含：(A)其上固定有包含至少一个含有靶双链核酸的固定和透化细胞的多个固定和透化细胞的载玻片；(B)靶探...

【专利技术属性】
技术研发人员：XJ马，F汤德内维斯，C托德罗夫，B张，
申请(专利权)人：领先细胞医疗诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：