一种大规模寡聚核苷酸氨解方法技术

本发明专利技术涉及寡聚核苷酸技术领域，公开了一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，所述的大规模寡聚核苷酸氨解方法包括：S1、进行寡核苷酸位置信息的编辑并合成序列。S2、将合成载体置于合成仪器上，制备获得对应序列的核苷酸。S3、配制切割液，所述的切割液配制方法包括：冷冻氨水和/或正丙胺、超纯水的混合物，置低温的条件下保存。S4、将核苷酸与切割液混合进行切割反应获得寡聚核苷酸。在氨解过程中切割液的体积以及切割时间大大减小；生产步骤简单、缩减了生产步骤，提高了整体产率，且保证了寡聚核苷酸粗产品质量；粗产品的回收率高；切割液的减少也极大地降低了生产废液的产生，降低了生产成本，也降低了生产环境污染的问题。也降低了生产环境污染的问题。也降低了生产环境污染的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种大规模寡聚核苷酸氨解方法


[0001]本专利技术涉及寡聚核苷酸
，具体涉及一种大规模寡聚核苷酸氨解方法。

技术介绍

[0002]目前寡聚核苷酸合成结束后的切割工艺根据所合成的规模来定，使用通量仪器合成规模小于1umol的可使用单管氨解或者氨解锅氨解，所使用的切割液以及切割时间也是根据工艺来确定。随着药规级别核酸市场的需求以及对克级别核酸的需求日益增大，大规模合成核酸目前已成为药用级别研究方向的主流。
[0003]但是鉴于目前市面上核酸合成以及切割工艺的不完善性，切割结束后的切割液比较多、以及切割时间比较漫长，造成浪费、生产成本高，并且切割时间以及切割方法会对产品质量有一定的影响。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，所述的大规模寡聚核苷酸氨解方法包括：
[0005]S1、进行寡核苷酸位置信息的编辑并合成序列；
[0006]S2、将合成载体置于合成仪器上，制备获得对应序列的核苷酸；
[0007]S3、配制切割液，所述的切割液配制方法包括：冷冻氨水和/或正丙胺、超纯水的混合物，置低温的条件下保存；
[0008]S4、将核苷酸与切割液混合进行切割反应获得寡聚核苷酸。
[0009]优选的：所述核苷酸序列负载于载体方法为：A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，分别置于合成仪单独的对应合成通道，合成结束后取下载体柱，载体柱进行干燥，从载体柱中分离获得核苷酸。
[0010]优选的：所述载体柱干燥方法为使用氩气吹干载体柱，或者将载体柱放置真空干燥箱20℃
‑
50℃条件下1
‑
3h。
[0011]优选的：所述A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈的浓度为0.1M。
[0012]优选的：所述切割液为正丙胺、超纯水、冷冻氨水混合溶液。
[0013]优选的：正丙胺、超纯水、冷冻氨水体积比为1
‑
5:1
‑
5:3
‑
15。
[0014]优选的：正丙胺、超纯水、冷冻氨水体积比为1:1:3。
[0015]优选的：所述切割液与核苷酸体积比值为100
‑
200:1。
[0016]优选的：所述切割液与核苷酸体积比值为300:1。
[0017]优选的：所述切割反应温度为65℃的条件下氨解3h。
[0018]本专利技术的技术效果和优点：在氨解过程中切割液的体积以及切割时间大大减小；切割液制备简单，适合大规模生产，生产成本低；生产步骤简单、缩减了生产步骤，提高了整体产率，且保证了寡聚核苷酸粗产品质量；粗产品的回收率高；切割液的减少也极大地降低了生产废液的产生，降低了生产成本，也降低了生产环境污染的问题。
附图说明
[0019]图1为本专利技术提出的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法的流程图。
[0020]图2为本专利技术中的寡聚核苷酸的MS图谱结果。
[0021]图3为本专利技术中的寡聚核苷酸的MS图谱。
[0022]图4为本专利技术实施例1的分析图谱。
[0023]图5为本专利技术实施例2的分析图谱。
[0024]图6为本专利技术实施例3的分析图谱。
[0025]图7为本专利技术实施例4的分析图谱。
具体实施方式
[0026]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。本专利技术的实施例是为了示例和描述起见而给出的，而并不是无遗漏的或者将本专利技术限于所公开的形式。很多修改和变化对于本领域的普通技术人员而言是显而易见的。选择和描述实施例是为了更好说明本专利技术的原理和实际应用，并且使本领域的普通技术人员能够理解本专利技术从而设计适于特定用途的带有各种修改的各种实施例。
[0027]参考图1，在本实施例中提出了一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，用于大规模制备核苷酸并进行切割氨解，所述的大规模寡聚核苷酸氨解方法包括：
[0028]S1、进行寡核苷酸位置信息的编辑并合成序列。核苷酸原料可以通过购买获得。
[0029]S2、将合成载体置于合成仪器上，制备获得对应序列的核苷酸。可以通过自动化合成仪进行合成，A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，分别置于合成仪单独的对应合成通道。从合成仪中拿出载体柱，对载体柱进行干燥。
[0030]S3、配制切割液。所述的切割液配制方法包括：正丙胺、超纯水、冷冻氨水混合，并进行搅拌完全溶解。摇匀置低温的条件下保存。
[0031]S4、将核苷酸与切割液混合进行切割反应，获得寡聚核苷酸。
[0032]本专利技术一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，在氨解过程中切割液的体积以及切割时间大大减小；切割制备简单，适合大规模生产，生产成本低；生产步骤简单、缩减了生产步骤，提高了整体产率，且保证了寡聚核苷酸粗产品质量；粗产品的回收率高；切割液的减少也极大地降低了生产废液的产生，降低了生产成本，也降低了生产环境污染的问题。
[0033]下面将结合实施例、对照例及实验数据对本申请的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法进行详细说明。
[0034]实施例1
[0035]S1、先进行核苷酸的合成，其中所述核苷酸序列(GTGGAATTCTCGGGTGCCAAGGC，亚磷酰胺单体购自兆维)的位置信息编辑完毕之后。
[0036]S2、将核苷酸序列上载于AKTA Oligopilot plus 100型核酸自动化合成仪。A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，浓度为0.1M，分别置于合成仪单独的对应合成通道，合成规模为100μmol，载体厂家为Cytiva。核苷酸合成结束后模式为DMT OFF形式，从合成仪上拿出载体柱，氩气吹干载体，放置真空干燥箱30℃条件下干燥1h。
[0037]S3、将20mL的正丙胺+20mL超纯水+160mL冷冻新鲜氨水依次混合制备成切割液，摇匀置于2
‑
8℃的条件下保存。
[0038]S4、将S2中制备核苷酸置于防爆耐压瓶中，加入30mL的S3中的切割液，65℃的条件下氨解3h获得寡聚核苷酸。
[0039]实施例2
[0040]S1、先进行核苷酸的合成，其中所述核苷酸序列(GTGGAATTCTCGGGTGCCAAGGC，亚磷酰胺单体购自兆维)的位置信息编辑完毕之后。
[0041]S2、将核苷酸序列上载于AKTA Oligopilot plus 100型核酸自动化合成仪。A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，浓度为0.1M，分别置于合成仪单独的对应合成通道，合成规模为100μmol，载体厂家为Cytiva。核苷酸合成结束后模式为DMT OFF形式，从合成仪上拿出载体柱，氩气吹干载体，放置真空干燥箱50℃条件下干燥3h。
[0042]S3、将S2中制备核苷酸置于防爆耐压瓶中，加入100mL的冷冻新鲜氨水，70℃的条件下氨解4h获得寡聚核苷酸。
[0043]实施例3
[0044]S1、先进行核苷酸的合成，其中所述核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述的大规模寡聚核苷酸氨解方法包括：S1、进行寡核苷酸位置信息的编辑并合成序列；S2、将合成载体置于合成仪器上，制备获得对应序列的核苷酸；S3、配制切割液，所述的切割液配制方法包括：冷冻氨水和/或正丙胺、超纯水的混合物，置低温的条件下保存；S4、将核苷酸与切割液混合进行切割反应获得寡聚核苷酸。2.根据权利要求1所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述核苷酸序列负载于载体方法为：将A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，分别置于合成仪单独的对应合成通道，合成结束后取下载体柱，载体柱进行干燥。3.根据权利要求2所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述载体柱干燥方法为使用氩气吹干载体柱，或者将载体柱放置真空干燥箱20℃
‑
50℃条件下1
‑
3h。4.根据权利要求2所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述A、C、...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟建凯，陈鹏，张前前，金焱林，操云云，
申请(专利权)人：南京吉盛澳玛生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：