一种荧光核酸探针的制备方法及其在RNA成像中的应用技术

本发明专利技术涉及核酸探针技术领域，特别公开了一种荧光核酸探针的制备方法及其在RNA成像中的应用。它包括：首先由4

【技术实现步骤摘要】
一种荧光核酸探针的制备方法及其在RNA成像中的应用


[0001]本专利技术涉及核酸探针
，具体为一种荧光核酸探针的制备方法及其在RNA成像中的应用。

技术介绍

[0002]遗传物质DNA主要作为遗传信息的保存介质，而RNA作为遗传介质的功能则多种多样，RNA可以参与蛋白的合成、基因功能的调控和生物催化。在蛋白合成过程中，信使RNA（mRNA）传递来自DNA的遗传信息，转运RNA(tRNA)负责携带合适的氨基酸并放置在核糖体上，核糖体RNA则固定核糖体中的mRNA和tRNA并催化多肽的转移反应。近些年又发现了大量的非编码RNA，这些非编码RNA参与到了转录和翻译的调节。有些RNA是在细胞质中均匀分布的，而有些RNA因为和蛋白质结合则分布在细胞质中的特定区域。很多体外方法如Northern blotting、微阵列或者荧光定量PCR已经应用到了RNA的功能分析上，这些方法对于基于大量细胞的分析和区分正常和病变的组织十分有效。但是这些胞外的方法缺少时空信息分析，比如RNA的动态定位、表达和降解。大量方法已经用于追踪RNA的动态。通常，通过荧光原本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光核酸探针的制备方法，其特征是：其步骤为：（1）选取15.8
‑
16 mL的4
‑
甲基喹啉和18
‑
18.2g的5
‑
溴戊酸混合得到混合物，将该混合物在微波反应器中以90
‑
110W，145
‑
155℃的条件反应4.5
‑
5.5 分钟,然后将反应溶液冷却至20
‑
25℃，向反应混合物中加入了950
‑
1050毫升的二氯甲烷，得到悬浮物；将上述悬浮液在室温条件下冷却，超声处理后得到白色沉淀，产生的白色沉淀经过过滤，减压干燥，用乙酸乙酯洗涤并过滤后得到白色固体产物1
‑
(4
‑
羧基丁基)
‑4‑
甲基喹啉盐，其反应式如下：；（2）选取116
‑
120 mg的1
‑
(4
‑
羧基丁基)
‑4‑
甲基喹啉盐和340
‑
345 mg的9
‑
乙基
‑3‑
甲醛
‑
咔唑加入0.18
‑
0.22mL的哌啶和19
‑
21mL的无水乙醇中，得混合物，将该混合物在85
‑
95℃下搅拌反应11
‑
13小时，将反应溶液冷却至室温得悬浮液，悬浮液经过滤，纯乙醇洗涤，乙酸乙酯洗涤，石油醚洗涤后得到 (E)
‑1‑
(4
‑
羧基丁基)
‑4‑
(2
‑
(9
‑
乙基
‑
9H
‑
咔唑
‑3‑
)乙烯基)喹啉盐，其反应式如下：；（3）选取4.5
‑
4.7mg N
‑
羟基琥珀酰亚胺和7.5
‑
7.9mg的1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐添加到19
‑
21μmole、浓度为3.9
‑
4.1mM的(E)
‑1‑
(4
‑
羧基丁基)
‑4‑
(2
‑
(9
‑
乙基
‑
9H
‑
咔唑
‑3‑
)乙烯基)喹啉盐的DMF溶液中，23
‑
27℃搅拌15
‑
17h，得到浓度为 3.9
‑
4.1mM的 (E)
‑1‑
(4
‑
羧基丁基)
‑4‑
(2
‑
(9
‑
乙基
‑
9H
‑
咔唑
‑3‑
)乙烯基)喹啉盐的琥珀酰亚胺酯的DMF溶液，其反应式如下：；
（4）用dA、dG、dC、dT和二氨基修饰的核苷dU对应的磷酰胺合成带有活性氨基的核酸；然后采用DNA/RNA合成仪将上述带有活性氨基的核酸用26
‑
30%的氨水于50
‑
60℃下裂解4.5
‑
5.5h，得反应混合物，利用真空离心法除去上述反应混合物中的氨水后用HPLC纯化得到相应的活性氨基核酸产物，其结构如下：；（5）将78
‑
82uL、浓度为3.9
‑
4.1mM的 (E)
‑1‑
(4
‑
羧基丁基)
‑4‑
(2
‑
(9
‑
乙基
‑
9H
‑
咔唑
‑3‑
)乙烯基)喹啉盐的琥珀酰亚胺酯的DMF溶液和溶有活性氨基核酸产物的碳酸钠缓冲液混合并于23
‑
27℃条件下反应80
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：崔云亮，张树柳，李伟伟，陈玉刚，杜超，国立浩，李慧丽，
申请(专利权)人：中国人民解放军联勤保障部队第九六〇医院，
类型：发明
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