用于增强逆转录酶活性和/或减少逆转录酶抑制的组合物和方法技术

本申请涉及用于增强逆转录酶(RT)活性和/或减少RT被抑制剂(例如福尔马林、单宁酸和/或肝素)抑制的组合物和方法。在一些实施方式中，通过向包含聚合酶的反应混合物中添加谷氨酸钾、组氨酸盐酸盐一水化物、泊洛沙姆188或其任意组合，以减少RT抑制。在其他实施方式中，通过向反应混合物中添加聚乙烯磺酸钠盐(PVSA)来增强RT。本申请还提供了用于目标序列的逆转录及其增强的寡核苷酸引物。这些引物具有高GC含量或低GC含量。还提供了在具有RNA模板和RT的组合物中使用RT抑制减少剂或RT增强剂改进RT产量、RT敏感性或RT对各种化学品的耐受性的方法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于增强逆转录酶活性和/或减少逆转录酶抑制的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年6月25日提交的美国临时申请62/866,182的权益，其通过引用全文纳入本文。
[0003]此申请的序列表被记为“Seq
‑
List.txt”，其于2020年6月20日创建，大小为5KB。序列表的全部内容通过引用整体并入本文。
[0004]专利技术概述
[0005]本专利技术人惊喜地发现，在含有具有高和/或低GC含量的随机化引物的寡核苷酸引物存在的情况下，可以通过从具有高和低GC含量的RNA模板进行互补DNA(cDNA)的合成来增强逆转录酶(RT)活性。还令人惊喜地发现，可以通过在添加剂(例如谷氨酸钾、组氨酸盐酸盐一水化物和/或泊洛沙姆188)存在的情况下由RT进行cDNA的合成以减少肝素、福尔马林或单宁酸对逆转录酶的抑制。还令人惊讶地发现，可以通过在聚乙烯磺酸(PVSA)的盐(例如，PVSA的钠盐)存在的情况下从RNA模板进行互补DNA(cDNA)的合成来增强逆转录酶(RT)活性。还提供了包含本文公开的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种反应混合物，其包含逆转录酶和一种或多种添加剂，所述添加剂选自：谷氨酸或其盐、泊洛沙姆188、组氨酸或其盐和聚乙烯磺酸(PVSA)，以及一种或多种选自以下的寡核苷酸：X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5、X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6、X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7、X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8、X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9、X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9‑
X
10
(SEQ ID NO:21)、X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9‑
X
10
‑
X
11
(SEQ ID NO:22)或X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9‑
X
10
‑
X
11
‑
X
12
(SEQ ID NO:23)。2.如权利要求1所述的反应混合物，其中所述添加剂是：a)谷氨酸或其盐；b)组氨酸或其盐；c)泊洛沙姆188；d)PVSA；e)谷氨酸或其盐和组氨酸或其盐；f)谷氨酸或其盐和泊洛沙姆188；g)谷氨酸或其盐和PVSA；h)组氨酸或其盐和泊洛沙姆188；i)组氨酸或其盐和PVSA；j)泊洛沙姆188和PVSA；k)谷氨酸或其盐，组氨酸或其盐和泊洛沙姆188；l)谷氨酸或其盐，组氨酸或其盐和PVSA；m)组氨酸或其盐，泊洛沙姆188和PVSA；或n)谷氨酸或其盐，组氨酸或其盐，泊洛沙姆188和PVSA；或o)谷氨酸或其盐，泊洛沙姆188和PVSA。3.如权利要求1或2所述的反应混合物，其中所述谷氨酸盐为谷氨酸钾，所述组氨酸盐为组氨酸HCl一水化物。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的反应混合物，其中：a)泊洛沙姆以约0.01％至约5％的量(v/v％)存在；b)组氨酸或其盐以约1mM至约50mM、约5mM至约40mM、约2.5mM至约30mM、约5mM至约30mM、约10mM至约30mM、约10mM至约25mM或约15mM至约20mM的浓度存在；c)谷氨酸或其盐以约5mM至约250mM、约10mM至约400mM、约10mM至约300mM、约10mM至约250mM、约10mM至约200mM、约10mM至约150mM、约15mM至约400mM、约15mM至约300mM、约15mM至约250mM、约15mM至约200mM或约15mM至约150mM的浓度存在；和/或d)PVSA以约0.0001％至约0.002％、约0.0001％至约0.005％、约0.0001％至约0.004％、约0.0001％至约0.003％、约0.0001％至约0.002％或约0.0001％至约0.001％的量(v/v％)存在。5.如权利要求1所述的反应混合物，其中所述添加剂是一种或多种寡核苷酸。6.如权利要求5所述的反应混合物，所述一种或多种寡核苷酸在所述一种或多种寡核苷酸内的任何位置处含有一个或多个硫代磷酸酯键。7.如权利要求6所述的反应混合物，所述一种或多种寡核苷酸在所述寡核苷酸的5
’
末端、3
’
末端或5
’
和3
’
末端两者的最末、倒数第二和/或倒数第三个核苷酸之间含有一个或多
个硫代磷酸酯键。8.如权利要求1、5、6或7所述的反应混合物，其中所述一种或多种寡核苷酸是选自A、G、T和C的核苷酸的随机序列。9.如权利要求1、5、6、7或8所述的反应混合物，其中所述一种或多种寡核苷酸是：a)X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5寡核苷酸序列，其为：i)随机排列的A和T核苷酸；ii)随机排列的G和C核苷酸；iii)至少一个但少于五个核苷酸随机地选自：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的G和C核苷酸；或iv)至少一个但少于五个核苷酸是随机地选自下组：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的A和T核苷酸；b)X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6寡核苷酸序列，其为：i)随机排列的A和T核苷酸；ii)随机排列的G和C核苷酸；iii)至少一个但少于六个核苷酸随机地选自：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的G和C核苷酸；或iv)至少一个但少于六个核苷酸是随机地选自下组：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的A和T核苷酸；c)X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7寡核苷酸序列，其为：i)随机排列的A和T核苷酸；ii)随机排列的G和C核苷酸；iii)至少一个但少于七个核苷酸随机地选自：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的G和C核苷酸；或iv)至少一个但少于七个核苷酸是随机地选自下组：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的A和T核苷酸；d)X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8寡核苷酸序列，其为：i)随机排列的A和T核苷酸；ii)随机排列的G和C核苷酸；iii)至少一个但少于八个核苷酸随机地选自：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的G和C核苷酸；或iv)至少一个但少于八个核苷酸是随机地选自下组：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的A和T核苷酸；e)X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9寡核苷酸序列，其为：i)随机排列的A和T核苷酸；ii)随机排列的G和C核苷酸；iii)至少一个但少于九个核苷酸随机地选自：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的G和C核苷酸；或iv)至少一个但少于九个核苷酸是随机地选自下组：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的A和T核苷酸；f)X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9‑
X
10
(SEQ ID NO:21)寡核苷酸序列，其为：i)随机排列的A和T核苷酸；ii)随机排列的G和C核苷酸；iii)至少一个但少于十个核苷酸随机地选自：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的G和C核苷酸；或iv)至少一个但少于十个核苷酸是随机地选自下组：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的A和T核苷酸；g)X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9‑
X
10
‑
X
11
(SEQ ID NO:22)寡核苷酸序列，其为：i)随机排列的A和T核苷酸；ii)随机排列的G和C核苷酸；iii)至少一个但少于十一个核苷酸随机地选自：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的G和C核苷酸；或iv)至少一个但少于十一个核苷酸是随机地选自下组：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的A和T核苷酸；或h)X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9‑
X
10
‑
X
11
‑
X
12
(SEQ ID NO:23)寡核苷酸序列，其为：i)随机排列的A和T核苷酸；ii)随机排列的G和C核苷酸；iii)至少一个但少于十二个核苷酸随机地选自：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的G和C核苷酸；或iv)至少一个但少于十二个核苷酸是随机地选自下组：A、G、T和C，而剩余的核苷酸是随机选择的A和T核苷酸。10.如权利要求1、5、6、7、8或9所述的反应混合物，其中所述寡核苷酸具有高GC含量且至少60％的核苷酸是G和/或C，或寡核苷酸具有高AT含量且至少60％的所述核苷酸是A和/或T。
11.如权利要求2、3或4所述的反应混合物，其中所述反应混合物进一步包含一种或多种寡核苷酸作为添加剂。12.如权利要求11所述的反应混合物，所述一种或多种寡核苷酸在所述寡核苷酸内的任何位置处含有一个或多个硫代磷酸酯键。13.如权利要求12所述的反应混合物，所述一种或多种寡核苷酸在所述寡核苷酸的5
’
末端、3
’
末端或5
’
和3
’
末端两者的最末、倒数第二和/或倒数第三个核苷酸之间含有一个或多个硫代磷酸酯键。14.如权利要求11、12或13所述的反应混合物，其中所述一种或多种寡核苷酸是选自A、G、T和C的核苷酸的随机...

【专利技术属性】
技术研发人员：X，
申请(专利权)人：生物辐射实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：