本发明专利技术涉及抗体技术领域，具体涉及抗人CDK4重组抗体的制备及应用。本发明专利技术提供的CDK4重组抗体，通过构建人源CDK4抗体表达载体，并采用CHO表达系统进行重组抗体的制备，同时通过蛋白印迹法及免疫组织化学法进行抗体的特异性验证，证明本发明专利技术提供的重组抗体特异性强，抗体性质稳定，满足了实验的可重复性，适用于工业化生产及应用。于工业化生产及应用。
【技术实现步骤摘要】
抗人CDK4重组抗体的制备及应用
[0001]本专利技术涉及抗体
，具体涉及抗人CDK4重组抗体的制备及应用。
技术介绍
[0002]CDK4(细胞周期蛋白依赖性激酶4)是人体中由CDK4基因编码的一种酶，属于细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDKs家族的成员。该蛋白是由人的CDK4基因编码，CDK4基因定位于染色体12q13～14，mRNA序列全长为2.14kb，cDNA全长为912bp，编码303个氨基酸，分子量约为34kb，与CDK2非常接近。因为CDK4缺乏典型的PSTAIR序列，故其活性依赖与细胞周期蛋白(Cyclin D)的结合。
[0003]肿瘤细胞恶性增殖主要是由于细胞周期调控行为异常导致，而细胞调控机制的核心是CDKs时相性激活。CDK4与Cyclin D1结合形成复合物，调控细胞周期G1/S进程。研究表明，CDK4与细胞发生癌变的关系非常密切。CDK4可以启动DNA复制及有丝分裂，其表达的增加导致细胞DNA合成增加，进而使细胞分裂增殖失控，从而发生癌变。在多种肿瘤细胞和癌变组织中都发现伴随有CDK4的过度表达和过度活化现象，所以CDK4是目前肿瘤治疗的一个有效靶点。
[0004]据报道，CDK4在肿瘤组织如：粘液性/圆细胞脂肪瘤、横纹肌肉瘤中几乎全部阳性(≧95％的病例阳性)；在去分化脂肪肉瘤、非典型性脂肪肉瘤性肿瘤、低级别骨肉瘤中阳性表达率≧75％；在胰腺腺癌、低级别中央型骨肉瘤中、胰腺导管腺癌中阳性表达率≧55％；在子宫内膜腺癌、低级别纤维黏液肉瘤中也有阳性表达。同时研究发现，CDK4在口腔鳞状细胞癌、肺癌、乳腺癌和结肠癌都有高表达，因此CDK4在肿瘤的诊断、治疗及预后判断等方面具有重要的意义。
[0005]目前，市面上传统的抗CDK4单克隆抗体，依然采用传统免疫动物的方法获得，无法克服由于动物个体差异导致的批次间差异，且产量低，抗体稳定性差，并无法避免杂交瘤细胞丢失的问题，限制了其进一步的工业化生产及应用。
技术实现思路
[0006]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供抗人CDK4重组抗体的制备及应用，本专利技术提供的抗人CDK4重组抗体特异性强，性质稳定，有助于提高实验的重复性。
[0007]本专利技术提供的CDK4重组抗体，包含如下氨基酸序列：
[0008](1)、其重链的CDR区包含如SEQ ID NO:1、2或3所示的氨基酸序列中的至少一个，其轻链的CDR区包含如SEQ ID NO:4、5或6所示的氨基酸序列中的至少一个；或
[0009](2)、与(1)所示的氨基酸序列中经过氨基酸的取代、添加或缺失一个或多个，但与Ⅰ所示氨基酸功能相同或相似的氨基酸序列；或
[0010](3)、与(1)或(2)所示的氨基酸序列具备至少80％同源性的氨基酸序列。
[0011]本专利技术中，所述CDK4重组抗体中：
[0012]I、其重链的四个FR区其中至少一个FR区具有如SEQ ID NO:7、8、9和10所示的氨基
酸序列；其轻链的四个FR其中至少一个FR区具有如SEQ ID NO:11、12、13和14所示的氨基酸序列。
[0013]II、与I所示的氨基酸序列中经过氨基酸的取代、添加或缺失一个或多个，但与I所示氨基酸功能相同或相似的氨基酸序列；或
[0014]III、与I或II所示的氨基酸序列具备至少80％同源性的氨基酸序列。
[0015]本专利技术中，所述具有至少80％同源性的序列为在原序列的基础上，经取代、添加或缺失一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列中，所述多个为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个或38个。
[0016]一些实施例中，所述CDK4重组抗体重链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；
[0017]一些实施例中，所述CDK4重组抗体轻链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。
[0018]一些实施例中，所述CDK4重组抗体重链的四个FR区分别具有如SEQ ID NO:7、8、9和10所示的氨基酸序列；
[0019]一些实施例中，所述CDK4重组抗体轻链的四个FR分别具有如SEQ ID NO:11、12、13和14所示的氨基酸序列。
[0020]一些具体实施例中，所述CDK4重组抗体的重链可变区包含SEQ ID NO:1、2或3所示的CDR区和SEQ ID NO:7、8、9和10所示的FR区。
[0021]本专利技术实施例中，所述单克隆抗体的轻链可变区包含SEQ ID NO:4、5或6所示的CDR区和SEQ ID NO:11、12、13和14所示的FR区。
[0022]在一些具体实施例中，所述CDK4重组抗体的重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；轻链可变区具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
[0023]本专利技术提供了生物材料，其包括以下至少一项：
[0024]1)、编码所述的CDK4重组抗体的核酸；
[0025]2)、包含所述核酸的表达载体；
[0026]3)、转化或转染所述表达载体的宿主细胞；
[0027]4)、所述的CDK4重组抗体与固体介质或半固体介质偶联制得的偶联物；
[0028]5)、经化学标记或生物标记的所述的CDK4重组抗体；
[0029]6)、所述经化学标记或生物标记的CDK4重组抗体与固体介质或半固体介质偶联制得的偶联物。
[0030]具体的，所述核酸包括：编码重链可变区的核酸具有如SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列；编码轻链可变区的核酸具有如SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列。
[0031]本专利技术所述的表达载体能够在宿主细胞体内表达产生所述CDK4重组抗体，所述的宿主细胞选自大肠杆菌、酵母菌、昆虫细胞或哺乳动物细胞。
[0032]所述化学标记为同位素、免疫毒素和/或化学药物；所述生物标记为生物素、亲和素或酶标记。所述酶标记优选为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。所述免疫毒素优选为黄曲霉毒素、白喉毒素、绿脓杆菌外毒素、蓖麻毒蛋白、相思子毒蛋白、槲寄生凝集素、蒴莲根毒素、PAP、造草素、白树毒素或丝瓜毒素。
[0033]所述固相介质或半固体介质是指本专利技术所述的重组抗体、经标记的重组抗体能够附着至其上的任何支持物，包括但不限于硝酸纤维素膜、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜、iPDMS芯片、微孔板、聚苯乙烯平板、微粒、微载体、凝胶等。
[0034]本专利技术所述的CDK4重组抗体、生物材料、经宿主细胞表达的CDK4重组抗体在制备肿瘤检测试剂或试剂盒中的应用。
[0035]所述肿瘤细胞包括粘液性/圆细胞脂肪瘤、横纹肌肉瘤、分化脂肪本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.CDK4重组抗体，其特征在于，包含如下氨基酸序列：(1)其重链的CDR区包含如SEQ ID NO:1、2或3所示的氨基酸序列中的至少一个，其轻链的CDR区包含如SEQ ID NO:4、5或6所示的氨基酸序列中的至少一个；或(2)与(1)所示的氨基酸序列中经过氨基酸的取代、添加或缺失一个或多个，但与(1)所示氨基酸功能相同或相似的氨基酸序列；或(3)与(1)或(2)所示的氨基酸序列具备至少80％同源性的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的CDK4重组抗体，其特征在于，其重链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；其轻链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的CDK4重组抗体，其特征在于，其重链的四个FR区分别具有如SEQ ID NO:7、8、9和10所示的氨基酸序列；其轻链的四个FR分别具有如SEQ ID NO:11、12、13和14所示的氨基酸序列。4.如权利要求1～3任一项所述的CDK4重组抗体，其特征在于，其重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；其轻链可变区具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。5.生物材料，其特征在于，包括以下至少一项：1)、编码如权利要求1～4任一项所述的CDK4重组抗体的核酸；2)、包含所述核酸的表达载体；3)、转化或转染所述表达载体的宿主细胞；4)、权利要求1～4任一项所述的CDK4重组抗体与固体介质或半固体介质偶联制得的偶联物；5)、经化学标记或生物标记的权利要求1～4任一项所述的CDK4重组抗体；6)、所述经化学标记或生...
【专利技术属性】
技术研发人员：张倩，宋辉，李三华，柴素珍，王迎利，曹晓菲，翟晋豫，齐华，
申请(专利权)人：河南赛诺特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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