用于预防金黄色葡萄球菌感染的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及包含至少一种金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抗原的免疫原性组合物，其中所述抗原是与SEQ ID NO：8的SdrH样多肽、SEQ ID NO：4的Nuc或SEQ ID NO：12的LukG具有至少80％同一性的多肽，包含与所述抗原中的至少一种选择性结合的多克隆抗体的免疫治疗组合物以及鉴定赋予受试者针对金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用的抗原的体外方法。菌引起的疾病的保护作用的抗原的体外方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于预防金黄色葡萄球菌感染的组合物和方法


[0001]本专利技术涉及包含金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抗原的免疫原性组合物。本专利技术还涉及免疫原性组合物用于赋予受试者针对金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用的用途。
[0002]金黄色葡萄球菌是人感染的主要原因，导致多种病理，包括皮肤和软组织感染、骨髓炎、心内膜炎和败血症。特别是，金黄色葡萄球菌是与外来装置(例如，导管)和植入物(例如，假体)相关的大部分感染的原因，因为金黄色葡萄球菌能够在这些材料的表面形成生物膜。因为这些感染可能是慢性的或全身性的，在某些情况下会导致假体关节感染、植入失败甚至死亡，所以这些感染问题特别严重。例如，对一家大型血液透析中心的金黄色葡萄球菌感染进行的回顾性分析发现，在血液透析患者中金黄色葡萄球菌感染率接近18％，并且与10％的死亡率相关，其中绝大多数感染与血管导管相关(Fitzgerald等人，2011年)。
[0003]虽然金黄色葡萄球菌感染通常用抗生素疗法进行治疗，但出现了耐抗生素的金黄色葡萄球菌(包括耐甲氧西林(MRSA)和耐万古霉素(VRSA)的菌株)，使得传统抗生素的使用变得复杂。此外，虽然万古霉素目前是治疗MRSA菌血症和心内膜炎的金标准，但由于万古霉素组织穿透性差、不良副作用和杀菌活性慢，所以这种抗生素并不理想(Gould，2008)。在骨科植入物的情况下，最常需要进行再次手术(revision surgery)(Darouiche，2004)。然而，这种策略成本高且具有侵入性，以及通常在技术上比最初的植入手术更难，需要更大范围的手术，并且与受试者较低的生活质量结果相关。
[0004]预防金黄色葡萄球菌感染的有效疫苗的开发代表了一种对当前治疗方法的有希望替代方案，目前各种针对金黄色葡萄球菌的疫苗正在I、II或III期临床试验中进行评价，尽管尚未有成功的III期试验完成。迄今为止，疫苗开发主要集中在金黄色葡萄球菌分泌的α毒素(Hla)和/或荚膜多糖上。虽然靶向α毒素的疫苗已被证明对感染具有保护作用，其中该毒素负责大部分致病作用(例如，肺炎，描述于Bubeck和Schneewind，2008)，但该疫苗还不足以预防亚
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致死感染(Adlam等，1977)。此外，鉴于荚膜多糖的可变性，以及大量的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌菌株是无荚膜的事实，仅有荚膜多糖的用途是受限的。各种单独或组合的金黄色葡萄球菌蛋白质也在评估中，包括IsdB蛋白质，其被证明可以在患有金黄色葡萄球菌感染的受试者中诱导抗体，尽管这不足以提供针对未来感染的保护作用(Zorman等人，2013)。临床试验进一步表明，与安慰剂接受者相比，接种IsdB疫苗没有效果，在某些情况下甚至是有害的(McNeely等人，2014年)。
[0005]由于目前的策略不能令人满意，因此仍然需要改进的免疫原性组合物，其包含金黄色葡萄球菌抗原或针对所述抗原产生的多克隆抗体。特别地，需要能够预防和/或治疗金黄色葡萄球菌感染的新型免疫原性和免疫治疗组合物，例如，其包含能够诱导针对金黄色葡萄球菌感染的保护性抗体的抗原或包含此类抗体本身。还需要新的方法来鉴定赋予受试者针对金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用的抗原。特别是，鉴于临床试验的高成本和持续时间，需要一种可以用作与保护作用相关(correlate of protection)的改进的测定法，用于评估疫苗反应。
[0006]本专利技术通过提供免疫原性组合物、免疫治疗组合物和体外鉴定抗原的方法来满足这些和其他需要，所述抗原赋予受试者针对金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用。
[0007]特别地，本专利技术提供了包含至少一种金黄色葡萄球菌抗原的免疫原性组合物，其中所述抗原是与SEQ ID NO：8的SdrH样多肽、SEQ ID NO：4的Nuc或SEQ ID NO：12的LukG具有至少80％同一性的多肽。
[0008]根据一个特定的方面，免疫原性组合物包含与SEQ ID NO：8的SdrH样多肽具有至少80％同一性的抗原和与SEQ ID NO：12的LukG具有至少80％同一性的抗原。
[0009]与现有抗原(如IsdB)相比，本专利技术的免疫原性组合物中包含的一种或多种抗原有利地提供出人意料的、改进的免疫原性特性(例如，免疫原性反应的水平、质量和/或范围)。
[0010]优选地，免疫原性组合物包含呈单独多肽形式的、或呈一种或多种融合多肽形式的、或呈单独多肽和融合多肽形式的金黄色葡萄球菌抗原。
[0011]优选地，免疫原性组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂。
[0012]优选地，免疫原性组合物用作赋予受试者针对金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用的疫苗。
[0013]本专利技术进一步涉及免疫治疗组合物，其包含与至少一种如本文定义的抗原选择性结合的多克隆抗体，其中所述抗体促进吞噬细胞对金黄色葡萄球菌的摄取和杀死。
[0014]优选地，免疫治疗组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂。
[0015]优选地，免疫治疗组合物用作被动免疫治疗，以赋予受试者针对由金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用。
[0016]优选地，所述金黄色葡萄球菌是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)或甲氧西林易感的金黄色葡萄球菌(MSSA)。
[0017]优选地，所述受试者具有骨关节装置，优选具有骨关节植入物，更优选具有全关节置换假体。
[0018]优选地，本文提供的所述免疫原性或免疫治疗组合物用于与一种或多种对金黄色葡萄球菌感染有效的抗生素联合使用。
[0019]本专利技术进一步涉及鉴定抗原的体外方法，所述抗原赋予受试者针对金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用，所述方法包括：
[0020]a)将包含金黄色葡萄球菌的溶液与包含针对金黄色葡萄球菌抗原产生的抗体的溶液一起孵育，优选在35℃下孵育1小时，从而获得混合悬浮液，
[0021]b)使巨噬细胞与步骤a)的混合悬浮液接触，
[0022]c)从巨噬细胞中去除混合悬浮液并添加补充有抗生素的新鲜培养基以杀死细胞外的金黄色葡萄球菌细菌，和
[0023]d)评估所述巨噬细胞对金黄色葡萄球菌细菌的内化和杀死，其中当所述抗原诱导对金黄色葡萄球菌的内化和杀死增加同时保留了巨噬细胞的活力时，所述抗原视为赋予了针对金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用。
[0024]与之前的方法(其尤其使用多形核嗜中性粒细胞)相比，本专利技术人开发了新的OPA测定法，用于鉴定能够产生促进对金黄色葡萄球菌的摄取和杀死的抗体的目标疫苗抗原。事实上，多形核嗜中性粒细胞显示出非常强的杀菌活性(“杀死”)，这尤其使得其无法评价最终是否产生了“促进”抗体(即，其促进细菌的摄取，但随后导致细菌在细胞内生长而不是
被杀死)。有利地，巨噬细胞具有比多形核嗜中性粒细胞低得多的杀菌(“杀死”)活性，因为巨噬细胞具有较低的活性氧合成和抗微生物肽的水平。此外，在骨关节假体感染的特定背景下，开发基于巨噬细胞的测定法特别有利，因为在感染的病理生理学中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫原性组合物，其包含至少一种金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抗原，其中所述抗原是与SEQ ID NO：8的SdrH样多肽、SEQ ID NO：4的Nuc或SEQ ID NO：12的LukG具有至少80％同一性的多肽。2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其包含与SEQ ID NO：8的SdrH样多肽具有至少80％同一性的抗原和与SEQ ID NO：12的LukG具有至少80％同一性的抗原。3.根据权利要求1或2所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包含所述金黄色葡萄球菌抗原中的两种或更多种，其呈单独多肽的形式、或呈一种或多种融合多肽的形式、或呈单独多肽和融合多肽的形式。4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫原性组合物，进一步包含药学上可接受的赋形剂。5.权利要求1至4中任一项所述的免疫原性组合物，用作赋予受试者针对金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用的疫苗的用途。6.一种免疫治疗组合物，其包含与至少一种权利要求1中限定的抗原选择性结合的多克隆抗体，其中所述抗体促进吞噬细胞对金黄色葡萄球菌的摄取和杀死。7.根据权利要求6所述的免疫治疗组合物，其进一步包含药学上可接受的赋形剂。8.权利要求6或7所述的免疫治疗组合物，用于赋予受试者针对由金黄色葡萄球菌引起的疾病的保护作用的被动免疫治疗的用途。9.根据权利要求5或8所述用途的免疫原性或免疫治疗组合物，其中所述金黄...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：凡尔赛大学法国公立援助医院，
类型：发明
国别省市：