免疫原性组合物制造技术

本发明专利技术提供了一种免疫原性组合物，其包含葡萄球菌抗原，其含有蛋白抗原和荚膜多糖的缀合物。还提供了佐剂化的制剂。本发明专利技术可用于预防和治疗葡萄球菌感染。防和治疗葡萄球菌感染。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫原性组合物


[0001]本专利技术涉及用于预防和治疗葡萄球菌感染和疾病，特别是金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染和疾病的免疫原性组合物。本专利技术提供了免疫原性组合物，其包含葡萄球菌抗原，特别是Hla、ClfA、SpA和荚膜多糖的缀合物。还提供了佐剂化制剂，以及此类组合物在预防和治疗葡萄球菌感染中的用途。还提供了具体呈现、制备方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球形细菌，其为在美国和欧洲的血流、下呼吸道、皮肤和软组织感染的主要原因。其也是全世界骨感染的主要原因，并且这些感染是痛苦的，使人衰弱的和难以治疗的。
[0003]由于很多金黄色葡萄球菌菌株发展抗生素抗性，对金黄色葡萄球菌的治疗正变得越来越有挑战性。甲氧西林抗性的金黄色葡萄球菌(MRSA)在医院中流行，并且社区相关的MRSA菌株正在全世界传播，造成重大的全球挑战。在所有社区和医院感染的超过一半中发现MRSA。近年已经看到这样的MRSA菌株的出现，所述MRSA菌株对万古霉素(最后手段的抗生素)也是抗性的，并且基本上无法治疗。
[0004]当前没有授权的疫苗。由于抗生素抗性的问题以及金黄色葡萄球菌感染由于其良好发展的免疫逃逸能力而不能提供对未来感染的免疫力的事实，对疫苗的需求尤为迫切。金黄色葡萄球菌的免疫逃逸特性进而使有效疫苗的开发更加困难。免疫逃逸的机制未被完全理解，但至少部分是由于葡萄球菌蛋白A(SpA)，一种金黄色葡萄球菌表面分子，其结合免疫球蛋白(Ig)的Fcγ和V
H3‑
型B细胞受体的Fab部分。SpA与B细胞受体的相互作用影响感染期间的B细胞发育，干扰适应性免疫应答的发展。SpA与Ig Fc的结合干扰多形核白细胞对葡萄球菌的调理吞噬性清除。
[0005]因此，迫切需要一种预防葡萄球菌疾病的疫苗。几种疫苗已经在临床试验中进行测试，包括荚膜多糖(CPS)缀合物、单个蛋白抗原，以及针对脂磷壁酸的单克隆抗体(mAb)。然而，全部都已经在各个开发阶段失败，并且迄今为止，市场上没有针对金黄色葡萄球菌的疫苗。
[0006]已经在I期人试验中测试了包含金黄色葡萄球菌CPS、ClfA和MntC的多组分疫苗(Anderson等，2012,Hum Vaccine Immunother 8:1585
‑
1594)。该疫苗在I期中诱导调理性抗CP抗体和抑制性抗ClfA抗体，并且随后在IIb期有效性试验中针对在选择性脊柱融合手术患者中的预防性用途进行测试，但由于无用而终止IIb期试验。
[0007]然而，尚未发现在III期试验中具有保护效力的针对金黄色葡萄球菌的疫苗。含有与假单胞菌外蛋白A缀合的金黄色葡萄球菌型5和型8荚膜多糖的缀合物的疫苗(StaphVAX
‑
Nabi Biopharmaceuticals)已经在临床试验中进行测试，其中其在I期和II期中表明安全性，但未能在III期中达到所需的终点，如WO 03/61558中所述。
[0008]类似地，基于IsdB蛋白抗原的疫苗(V710疫苗；Kuklin等，Infect Immun,2006,74:2215
‑
23)在心胸金黄色葡萄球菌感染中进行的III期试验中未达到有效性终点。
[0009]因此，持续需要针对葡萄球菌感染，特别是金黄色葡萄球菌感染的有效疫苗。还需要以有效制剂提供所述疫苗，优选一种适合长期储存的制剂。疫苗制剂是一门精细艺术，提供适当、安全、稳定和易于使用的呈现需要非常细致的实验。随着时间的推移，制剂必须优选地保持蛋白抗原的结构和功能。此类考量包括但不限于免疫原性组合物的化学稳定性(例如，蛋白的蛋白水解或片段化)、免疫原性组合物的物理/热稳定性(例如，聚集、沉淀、吸附)、免疫原性组合物与容器/密封系统的相容性、免疫原性组合物和非活性成分(例如，缓冲液、盐、赋形剂、冷冻保护剂)之间的相互作用、生产工艺、剂型(例如，冻干、液体)、运输、储存和处理过程中遇到的环境条件(例如，温度、湿度、剪切力)以及生产和使用之间的时间长度。

技术实现思路

[0010]本专利技术提供了一种免疫原性组合物，其包含葡萄球菌抗原。在一个方面中，所述免疫原性组合物包含以下两种或更多种：(a)ClfA抗原；(b)Hla抗原；(c)SpA抗原；和/或(d)葡萄球菌荚膜多糖。ClfA抗原、Hla抗原和SpA抗原优选是葡萄球菌抗原，适宜地为金黄色葡萄球菌抗原。在一个方面中，所述组合物是固体形式，例如冷冻干燥形式。在一个方面中，所述组合物是重构的，例如，水溶液形式。
[0011]在一个实施方式中，所述组合物包含填充剂(bulking agent)，任选地糖，优选蔗糖。在一个实施方式中，所述组合物包含表面活性剂，任选地聚山梨醇酯，任选地聚山梨醇酯80。
[0012]在一个实施方式中，本专利技术提供了一种免疫原性组合物，其包含ClfA抗原、Hla抗原、SpA抗原、葡萄球菌荚膜多糖、蔗糖和聚山梨醇酯80。在一个实施方式中，所述组合物还包含佐剂，例如，AS01E。在一个实施方式中，所述组合物是液体形式。
[0013]在一个实施方式中，蔗糖以每单位剂量15
‑
25mg，任选地每单位剂量21mg存在；聚山梨醇酯80以每单位剂量50
‑
100μg，任选地每单位剂量80μg存在；和/或SpA、Hla和/或ClfA以每单位剂量50
‑
100μg，任选地每单位剂量60μg存在。
[0014]在一个实施方式中，所述免疫原性组合物以每人剂量25μg水平包含QS21和3D
‑
MPL。
[0015]本专利技术还提供了一种试剂盒，其包含(i)第一容器，所述第一容器包含如本文所公开的固体形式的免疫原性组合物；和(ii)第二容器，所述第二容器包含佐剂，任选地AS01E。所述佐剂是在水溶液中。第一容器是瓶(vial)，和/或第二容器是预充式注射器。
[0016]在一个实施方式中，所述免疫原性组合物包含ClfA抗原；Hla抗原；SpA抗原；和葡萄球菌荚膜多糖。荚膜多糖可以适宜地是金黄色葡萄球菌血清型5和/或型8荚膜多糖。在一个优选实施方式中，所述免疫原性组合物包含ClfA抗原；Hla抗原；SpA抗原；来自金黄色葡萄球菌血清型5的荚膜多糖和来自金黄色葡萄球菌血清型8的荚膜多糖。
[0017]在一个实施方式中，所述荚膜多糖与载体蛋白缀合。所述荚膜多糖蛋白可以与上述抗原(a)
‑
(c)之一缀合。在一个优选实施方式中，所述组合物包含与Hla抗原缀合的金黄色葡萄球菌血清型5荚膜多糖和/或与ClfA抗原缀合的型8荚膜多糖。
[0018]在一个实施方式中，所述ClfA抗原是包含SEQ ID NO.2的氨基酸序列或与SEQ ID NO.2至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的ClfA蛋
白，或其免疫原性片段。
[0019]所述ClfA抗原可以包含根据SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫原性组合物，其包含a.ClfA抗原，b.Hla抗原，c.SpA抗原，和d.葡萄球菌荚膜多糖；其中所述组合物是固体形式。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是冷冻干燥的。3.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述组合物包含填充剂，任选地糖。4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述填充剂是蔗糖。5.根据权利要求4所述的组合物，其中蔗糖以每单位剂量15
‑
25mg，任选地每单位剂量21mg存在。6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其还包含表面活性剂，任选地聚山梨醇酯，任选地聚山梨醇酯80。7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中聚山梨醇酯以每单位剂量50
‑
100μg，任选地每单位剂量80μg存在。8.根据权利要求1至7中任一项所述的免疫原性组合物，其中SpA、Hla和/或ClfA以每单位剂量50
‑
100μg，任选地每单位剂量60μg存在。9.根据权利要求1至8中任一项所述的免疫原性组合物，其包含ClfA抗原、Hla抗原、SpA抗原、葡萄球菌荚膜多糖、蔗糖和聚山梨醇酯80。10.根据权利要求9所述的免疫原性组合物，其中蔗糖以每单位剂量15
‑
25mg，任选地每单位剂量21mg存在；聚山梨醇酯80以每单位剂量50
‑
100μg，任选地每单位剂量80μg存在；和/或其中SpA、Hla和/或ClfA以每单位剂量50
‑
100μg，任选地每单位剂量60μg存在。11.根据权利要求9或权利要求10所述的免疫原性组合物，其是液体形式。12.根据权利要求9至11中任一项所述的免疫原性组合物，其还包含佐剂，任选地AS01E。13.根据权利要求9至12中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述佐剂包含皂苷和脂多糖。14.根据权利要求9至13中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述佐剂在脂质体制剂中包含皂苷、脂多糖。15.根据权利要求9至14中任一项所述的免疫原性组合物，其还包含甾醇。16.根据权利要求9至15中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述皂苷是源自皂皮树的树皮的免疫活性皂苷级分。17.根据权利要求16所述的免疫原性组合物，其中所述皂苷是QS21。18.根据权利要求9至17中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述脂多糖是脂质A衍生物。19.根据权利要求18所述的免疫原性组合物，其中所述脂多糖是3D
‑
MPL。20.根据权利要求11至19中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述甾醇是胆固醇。21.根据权利要求11至20中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含每人剂量25μg水平的QS21。
22.根据权利要求11至21中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含每人剂量25μg水平的3D
‑
MPL。23.根据权利要求1至22中任一项所述的组合物，其中所述荚膜多糖与载体蛋白缀合。24.根据权利要求1至23中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述荚膜多糖是金黄色葡萄球菌血清型5和/或型8荚膜多糖。25.根据权利要求1至24中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述荚膜多糖与权利要求1的抗原(a)
‑
(c)之一缀合。26.根据权利要求1至26中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包含金黄色葡萄球菌血清型5荚膜多糖和型8荚膜多糖。27.根据权利要求1至26中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包含与Hla抗原缀合的金黄色葡萄球菌血清型5荚膜多糖和/或与ClfA抗原缀合的型8荚膜多糖。28.根据权利要求1至27中任一项所述的免疫原性组合物，其中a.所述ClfA抗原是包含SEQ ID NO.2的氨基酸序列或与SEQ ID NO.2至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的ClfA蛋白，或其免疫原性片段；b.所述Hla抗原是具有SEQ ID NO.3的氨基酸序列或与SEQ ID NO.3至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的Hla蛋白，或其免疫原性片段；和/或c.所述SpA抗原是具有SEQ ID NO.13或SEQ ID NO:26的氨基酸序列或与SEQ ID NO.13或SEQ ID NO:26至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的SpA蛋白，或其免疫原性片段。29.根据权利要求1至28中任一项所述的组合物，其中所述ClfA抗原包含根据SEQ ID NO.2的氨基酸序列的选自P116至S和Y118至A(或与SEQ ID NO.2至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列中的等同位置)的至少一个氨基酸取代，任选地包含SEQ ID NO 5
‑
7或32中的任一序列。30.根据权利要求28或权利要求29所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA抗原包含选自以下的一个或多个PglB共有序列：D/E
‑
X
‑
N
‑
Z
‑
S/T(SEQ ID NO.28)和K
‑
D/E
‑
X
‑
N
‑
Z
‑
S/T
‑
K(SEQ ID NO.29)，其中X和Z独立地是除脯氨酸外的任何氨基酸。31.根据权利要求30所述的免疫原性组合物，其中所述共有序列已经添加在SEQ ID NO:2的氨基酸残基313
‑
342之间的一个或多个氨基酸处，或取代SEQ ID NO:2的氨基酸残基313
‑
342之间的一个或多个氨基酸，任选地取代位置I337处，或与SEQ ID NO.2至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列内的等同位置处的氨基酸。32.根据权利要求30或权利要求31所述的免疫原性组合物，其中X是Q(谷氨酰胺)且Z是A(丙氨酸)(例如，K
‑
D
‑
Q
‑
N
‑
A
‑
T
‑
K，SEQ ID NO:31)。33.根据权利要求32所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA抗原包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:32的序列或由其组成。34.根据权利要求1至33中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述Hla抗原在SEQ ID NO.3的位置H35处或在与SEQ ID NO.3至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或
99％相同的氨基酸序列内的等同位置处包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代任选地是H至L。35.根据权利要求1至34中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述Hla抗原包含选自以下的一个或多个PglB共有序列：D/E
‑
X
‑
N
‑
Z
‑
S/T(SEQ ID NO.28)和K
‑
D/E
‑
X
‑
N
‑
Z
‑
S/T
‑
K(SEQ ID NO.29)，其中X和Z独立地是除脯氨酸外的任何氨基酸。36.根据权利要求35所述的免疫原性组合物，其中所述共有序列已经添加在SEQ ID NO.3的氨基酸序列或与SEQ ID NO.3至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的一个或多个氨基酸处，或取代SEQ ID NO.3的氨基酸序列或与SEQ ID NO.3至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的一个或多个氨基酸。37.根据权利要求36所述的免疫原性组合物，其中所述共有序列已经取代SEQ ID NO:3的SEQ ID NO.3的位置K131处或与SEQ ID NO:3至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列内的等同位置处的氨基酸。...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：葛兰素史克生物有限公司，
类型：发明
国别省市：