野大麦农杆菌介导的愈伤侵染方法技术

本发明专利技术涉及一种野大麦农杆菌介导的愈伤侵染方法，属于转基因技术领域，所述方法包括获得愈伤组织和农杆菌侵染；所述获得愈伤组织包括种子愈伤诱导和胚性愈伤系筛选；所述的农杆菌侵染为活化农杆菌，取野大麦愈伤组织，放到侵染液中，抽真空10分钟，超声10分钟，再抽真空十分钟后置于无菌的滤纸上晾干；在23℃暗培养箱中共培养5天，进行暗培养筛选，15天后将其置于含有15mg

【技术实现步骤摘要】
野大麦农杆菌介导的愈伤侵染方法


[0001]本专利技术属于转基因
，具体涉及野大麦农杆菌介导的愈伤侵染方法。

技术介绍

[0002]野大麦(Hordeum brevisubulatium)是禾本科大麦属多年生草本植物，广泛分布于我国东北、华北、内蒙古、新疆等地，是重要的禾本科生态修复草与牧草。野大麦分蘖株丛密，再生能力强，生产性能较好；适应性强，具有耐寒、耐旱、耐盐碱等特性，在
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40℃仍能安全越冬，对土壤要求不严格野大麦耐湿耐涝性较强，在低湿并有临时性积水的草甸黑土上生长良好，是盐化和碱化草甸草原的建群种。
[0003]近年来，利用CRISPR/Cas9技术对目标基因进行编辑已成为热点，野大麦具有较强的抗寒性和耐盐碱能力，是挖掘抗逆基因的优良种质资源，要想利用该技术，必须建立一套成熟的遗传转化体系。由于野大麦缺乏完整的遗传转化体系，功能基因组的研究暂时集中于基因克隆和载体构建，并且只能通过异源表达进行验证；同时，进行品种选育时无法利用基因编辑的方法获得转基因植株，在功能基因组研究和分子育种方面均受到较大的限制。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种野大麦农杆菌介导的愈伤侵染方法，其特征在于，所述方法包括获得愈伤组织和农杆菌侵染；所述获得愈伤组织包括种子愈伤诱导和胚性愈伤系筛选；所述种子愈伤诱导时的培养基为蔗糖30g
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L
‑1+CH 1g
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L
‑1+2,4
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D5mg
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L
‑1+Agar 7.6
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7.8g，pH为5.8
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6.0；所述的胚性愈伤系筛选：获得的种子的愈伤组织后，将其放在MS+30g
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L
‑1蔗糖+1g
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L
‑1CH+2mg
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L
‑
1 2,4
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D+0.05mg
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L
‑1KT的培养基上进行继代，23℃暗培养，继代3
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5次后筛选出结构致密且呈颗粒状的淡黄色胚性愈伤组织；所述的农杆菌侵染为活化PANIC6B农杆菌，取野大麦愈伤组织，放到PANIC6B农杆菌OD＝0.3的侵染液中，抽真空10分钟，超声10分钟，再抽真空十分钟后置于无菌的滤纸上晾干；在23℃暗培养箱中共培养5天，进行暗培养筛选，暗筛培养基为MS+2mg
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L
‑12,4
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：付春祥，赵彦，刘叶飞，赵海霞，姜希萍，李宇琛，邢思年，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：