一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒，包括包被有卡拉洛尔偶联蛋白抗原的微孔反应板、多份浓度不同的卡拉洛尔标准品溶液、抗体工作液、酶标记物、显色剂、终止液、洗涤液、样本稀释液；抗体工作液是添加有抗卡拉洛尔抗体的溶液；酶标记物是添加有辣根过氧化酶标记的抗小鼠IgG抗体的溶液；显色剂是TMB溶液；卡拉洛尔偶联蛋白抗原利用卡拉洛尔

【技术实现步骤摘要】
一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒


[0001]本专利技术涉及食品检测，尤其是一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒。

技术介绍

[0002]ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)是酶联免疫吸附检测的简称，是继免疫荧光和射免疫技术之后发展起来的一种酶免技术,被广泛应用在免疫学检验的各领域中，ELISA检测试剂盒则常用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体ELISA检测。
[0003]卡拉洛尔英文名称Carazolol，功用是阻断β1、β2受体，无内在拟交感活性，作用比普萘洛尔强，除对心脏的β受体(β1受体)有阻断作用外，对支气管及血管平滑肌的β受体(β2受体)亦有阻断作用，可引起支气管痉挛及鼻粘膜微细血管收缩，故忌用于哮喘及过敏性鼻炎病人，忌用于窦性心动过缓、重度房室传导阻滞、心源性休克、低血压症病人。副作用可见乏力、嗜睡、头晕、失眠、恶心、腹胀、皮疹、晕厥、低血压、心动过缓等。而在现有的畜禽养殖业中，有的会将卡拉洛尔注射进畜禽身上，以防止动物在运输过程中发生猝死，特别是对于生猪等动物长途运输，而人食用了注射有卡拉洛尔的食品后，残留在食品中的卡拉洛尔就会对人体产生危害，在现有的检测中基本是通过液相色谱
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质谱/质谱法来检测的，检测步骤繁琐还需要专业的人员进行操作，需要萃取溶剂体积较大，操作极不方便，无法快速准确的进行检测。

技术实现思路

[0004]针对现有的不足，本专利技术提供一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒。
[0005]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒，包括包被有卡拉洛尔偶联蛋白抗原的微孔反应板、多份浓度不同的卡拉洛尔标准品溶液、抗体工作液、酶标记物、显色剂、终止液、洗涤液、样本稀释液；所述卡拉洛尔标准品溶液包括七份，其浓度分别是0ng/ml、0.2ng/ml、0.6ng/ml、1.8ng/ml、5.4ng/ml、16.2ng/ml、1μg/ml；所述抗体工作液是添加有抗卡拉洛尔抗体的溶液，其在抗体工作液中的重量百分比是0.005
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0.006％；所述酶标记物是添加有辣根过氧化酶标记的抗小鼠IgG抗体的溶液，所述辣根过氧化酶标记的抗小鼠IgG抗体在酶标记物中的重量百分比是0.009
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0.011％；所述显色剂是含有浓度为0.045
‑
0.055mg/ml TMB的溶液；所述卡拉洛尔偶联蛋白抗原利用卡拉洛尔
‑
HS和BSA制得，所述抗卡拉洛尔抗体利用卡拉洛尔
‑
HS和KLH在兔源或鼠源上制得。
[0006]作为优选，所述卡拉洛尔偶联蛋白抗原通过如下步骤制得：
[0007]S1a，将卡拉洛尔在吡啶中溶解并加入琥珀酸酐搅拌形成反应液；
[0008]S1b，将反应液在冰蒸馏水和浓盐酸的混合溶液中静置；
[0009]S1c，将静置后的溶液过滤，并通过洗涤调节沉淀的pH值为5
‑
5.8后干燥得粗产品；
[0010]S1d，将粗产品层析分离制得卡拉洛尔
‑
HS纯品；
[0011]S1e，将卡拉洛尔
‑
HS纯品和BSA分别溶于二氧六环中，并在卡拉洛尔
‑
HS纯品溶液中依次加入三正丁胺、氯甲酸异丁酯，之后将卡拉洛尔
‑
HS纯品溶液和BSA溶液混合；
[0012]S1f，将卡拉洛尔
‑
HS纯品溶液和BSA溶液的混合溶液透析并浓缩干燥制得卡拉洛尔偶联蛋白抗原。
[0013]作为优选，所述抗卡拉洛尔抗体是兔源抗卡拉洛尔多克隆抗体或鼠源抗卡拉洛尔单克隆抗体，并通过如下步骤制得：
[0014]S2a，将卡拉洛尔在吡啶中溶解并加入琥珀酸酐搅拌形成反应液；
[0015]S2b，将反应液在冰蒸馏水和浓盐酸的混合溶液中静置；
[0016]S2c，将静置后的溶液过滤，并通过洗涤调节沉淀的pH值为5
‑
5.8后干燥得粗产品；
[0017]S2d，将粗产品层析分离制得卡拉洛尔
‑
HS纯品；
[0018]S2e，将卡拉洛尔
‑
HS纯品和KLH分别溶于二氧六环中，并在卡拉洛尔
‑
HS纯品溶液中依次加入三正丁胺、氯甲酸异丁酯，之后将卡拉洛尔
‑
HS纯品溶液和KLH溶液混合；
[0019]S2f，将卡拉洛尔
‑
HS纯品溶液和KLH溶液的混合溶液透析并浓缩制得卡拉洛尔
‑
HS
‑
KLH；
[0020]S2g，将卡拉洛尔
‑
HS
‑
KLH与免疫佐剂混合后皮下注射进兔子体内，通过兔子血液制得兔源抗卡拉洛尔多克隆抗体；或者将卡拉洛尔
‑
HS
‑
KLH与免疫佐剂混合后皮下注射进小鼠体内，通过小鼠脾细胞培养形成细胞株，并将细胞株注射入小鼠腹腔，再通过对小鼠的腹水的纯化制得鼠源抗卡拉洛尔单克隆抗体。
[0021]作为优选，所述微孔反应板通过如下方法制得：将纯化过后的卡拉洛尔偶联蛋白抗原，用磷酸盐缓冲液稀成浓度为0.9
‑
1.05μg/ml的抗原包被液，混匀后以100
±
2μl/孔的量加入到微孔板中，温度在4
±
0.5℃下放置14小时
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16小时，之后甩掉孔内液体，以洗涤液洗涤，洗涤后甩干并以150
±
2μl/孔的量加入封闭液，在室温下放置至少4小时，之后甩干并进行干燥封装。
[0022]作为优选，所述封闭液包括如下重量百分比的组分：蔗糖2％
‑
20％、牛血清白蛋白0.1％
‑
2％、小牛血清0.05％
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1％、酪蛋白0.5％
‑
2％、聚乙烯吡咯烷酮0.1％
‑
2％。
[0023]作为优选，所述抗体工作液是在pH值为7.0
‑
8.0，浓度为0.02
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0.2mol/L的磷酸盐缓冲液或Tris
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HCl缓冲液中添加如下重量百分比的组分制成：牛血清白蛋白0.05％
‑
0.1％、防腐剂0.01％
‑
0.1％、保护剂0.1％
‑
0.5％、抗卡拉洛尔抗体0.005％。
[0024]作为优选，所述述酶标记物包括如下重量百分比的组分：蔗糖2％
‑
20％、牛血清白蛋白0.1％
‑
2％、小牛血清0.05％
‑
1％、酪蛋白0.5％
‑
2％、聚乙烯吡咯烷酮0.1％
‑
2％、吐温
‑
20 0.01％
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒，其特征在于：包括包被有卡拉洛尔偶联蛋白抗原的微孔反应板、多份浓度不同的卡拉洛尔标准品溶液、抗体工作液、酶标记物、显色剂、终止液、洗涤液、样本稀释液；所述卡拉洛尔标准品溶液包括七份，其浓度分别是0ng/ml、0.2ng/ml、0.6ng/ml、1.8ng/ml、5.4ng/ml、16.2ng/ml、1μg/ml；所述抗体工作液是添加有抗卡拉洛尔抗体的溶液，其在抗体工作液中的重量百分比是0.005
‑
0.006％；所述酶标记物是添加有辣根过氧化酶标记的抗小鼠IgG抗体的溶液，所述辣根过氧化酶标记的抗小鼠IgG抗体在酶标记物中的重量百分比是0.009
‑
0.011％；所述显色剂是含有浓度为0.045
‑
0.055mg/ml TMB的溶液；所述卡拉洛尔偶联蛋白抗原利用卡拉洛尔
‑
HS和BSA制得，所述抗卡拉洛尔抗体利用卡拉洛尔
‑
HS和KLH在兔源或鼠源上制得。2.根据权利要求1所述检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒，其特征在于:所述卡拉洛尔偶联蛋白抗原通过如下步骤制得：S1a，将卡拉洛尔在吡啶中溶解并加入琥珀酸酐搅拌形成反应液；S1b，将反应液在冰蒸馏水和浓盐酸的混合溶液中静置；S1c，将静置后的溶液过滤，并通过洗涤调节沉淀的pH值为5
‑
5.8后干燥得粗产品；S1d，将粗产品层析分离制得卡拉洛尔
‑
HS纯品；S1e，将卡拉洛尔
‑
HS纯品和BSA分别溶于二氧六环中，并在卡拉洛尔
‑
HS纯品溶液中依次加入三正丁胺、氯甲酸异丁酯，之后将卡拉洛尔
‑
HS纯品溶液和BSA溶液混合；S1f，将卡拉洛尔
‑
HS纯品溶液和BSA溶液的混合溶液透析并浓缩干燥制得卡拉洛尔偶联蛋白抗原。3.根据权利要求1所述检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒，其特征在于:所述抗卡拉洛尔抗体是兔源抗卡拉洛尔多克隆抗体或鼠源抗卡拉洛尔单克隆抗体，并通过如下步骤制得：S2a，将卡拉洛尔在吡啶中溶解并加入琥珀酸酐搅拌形成反应液；S2b，将反应液在冰蒸馏水和浓盐酸的混合溶液中静置；S2c，将静置后的溶液过滤，并通过洗涤调节沉淀的pH值为5
‑
5.8后干燥得粗产品；S2d，将粗产品层析分离制得卡拉洛尔
‑
HS纯品；S2e，将卡拉洛尔
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HS纯品和KLH分别溶于二氧六环中，并在卡拉洛尔
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HS纯品溶液中依次加入三正丁胺、氯甲酸异丁酯，之后将卡拉洛尔
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HS纯品溶液和KLH溶液混合；S2f，将卡拉洛尔
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HS纯品溶液和KLH溶液的混合溶液透析并浓缩制得卡拉洛尔
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HS
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KLH；S2g，将卡拉洛尔
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HS
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KLH与免疫佐剂混合后皮下注射进兔子体内，通过兔子血液制得兔源抗卡拉洛尔多克隆抗体；或者将卡拉洛尔
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HS
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KLH与免疫佐剂混合后皮下注射进小鼠体内，通过小鼠脾细胞培养形成细胞株，并将细胞株注射入小鼠腹腔，再通过对小鼠的腹水的纯化制得鼠源抗卡拉洛尔单克隆抗体。4.根据权利要求1所述检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒，其特征在于:所述微孔反应板通过如下方法制得：将纯化过后的卡拉洛尔偶联蛋白抗原，用磷酸盐缓冲液稀成浓度为0.9
‑
1.05μg/ml的抗原包被液，混匀后以100
±
2μl/孔的量加入到微孔板中，温度在4
±
0.5℃下...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄斌，张金超，张吉，张伟涛，刘明如，常文伟，
申请(专利权)人：深圳市绿诗源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：