一种生物标志物IL-8的Simoa试剂盒及其应用和使用方法技术

本发明专利技术公开了一种生物标志物IL

【技术实现步骤摘要】
一种生物标志物IL
‑
8的Simoa试剂盒及其应用和使用方法


[0001]本专利技术涉及蛋白检测技术及生殖医学领域，具体而言，涉及一种生物标志物IL
‑
8的Simoa试剂盒及其应用和使用方法。

技术介绍

[0002]在过去几十年里，人类辅助生殖技术得到重大发展。为提高胚胎种植率以及降低多胎妊娠率，选择高质量的单囊胚进行胚胎移植逐渐成为趋势。目前，在全球范围内，胚胎实验室通常利用传统的形态学评分方法选择移植的胚胎，但其主观性较强、准确性较差。因此，如何挑选更具有发育潜能的胚胎是一直困扰临床医生及胚胎学家的难题。胚胎发育过程中存在着广泛的蛋白分泌现象，其表达与分泌体现了机体的生理状态，有研究表明，白细胞介素
‑
8(IL
‑
8)在子宫内膜容受前期和容受期时表达明显增高，胚胎移植成功后胚胎植入部位的趋化因子和前炎症细胞因子水平与IVF/ICSI患者的临床结局成正相关，胚胎植入部位的趋化因子和前炎症细胞因子是胚胎成功种植的关键。因此，希望通过检测胚胎分泌蛋白IL
‑
8来预测胚胎的发育潜能。
[0003]目前临床上使用的IL
‑
8检测方法有传统酶联免疫吸附法(ELISA)，但由于单胚胎条件培养液体积小(25μL)，且蛋白丰度极低(fg/mL)，ELISA技术无法定量检测单胚胎条件培养液中的IL
‑
8水平；另外，Quanterix公司研发了一种关于检测IL
‑
8含量的单分子免疫阵列检测(Simoa)试剂盒，配合Quanterix HD
‑
X仪器可以使灵敏度得到提高，但是其仅能定量检测部分单胚胎条件培养液样品中的IL
‑
8含量(高于定量限的样品占所有样品的30
‑
50％)，灵敏度仍然达不到定量检测要求。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种生物标志物IL
‑
8的Simoa试剂盒及其应用和使用方法，该试剂盒能够提高灵敏度进而实现IL
‑
8含量极低的样品的定量检测。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]本专利技术提供一种生物标志物IL
‑
8的Simoa试剂盒，其包括捕获抗体包被的磁珠、IL
‑
8标准品、生物素化的检测抗体、链霉亲和素
‑
β
‑
半乳糖苷酶溶液、荧光底物溶液和样品稀释液；
[0008]捕获抗体包括单克隆抗体10098
‑
MM05；检测抗体包括单克隆抗体10098
‑
MM18；IL
‑
8标准品包括10098
‑
H08Y。
[0009]在可选的实施方式中，捕获抗体包被的磁珠的制备方法包括：将捕获抗体用磁珠偶联缓冲液进行液体置换处理，并将磁珠进行活化，然后将置换后的捕获抗体与活化磁珠偶联，偶联产物经过清洗液清洗后，用封闭缓冲液封闭，再用清洗液清洗后即获得捕获抗体包被的磁珠。
[0010]在可选的实施方式中，活化磁珠步骤中的活化条件为：活化温度2
‑
8℃，活化时间
20
‑
40min。
[0011]在可选的实施方式中，活化磁珠步骤中的活化试剂包括EDC溶液，EDC溶液浓度为0.1
‑
0.5mg/mL。
[0012]在可选的实施方式中，偶联步骤中的偶联条件为：偶联温度2
‑
8℃，偶联时间1.5
‑
2.5h。
[0013]在可选的实施方式中，偶联步骤中活化磁珠的浓度为1.3
×
109‑
1.5
×
109个/mL；置换后的捕获抗体的浓度为0.1
‑
0.3mg/mL。
[0014]在可选的实施方式中，生物素化的检测抗体的制备方法包括：将检测抗体用生物素化反应缓冲液进行液体置换处理，然后将置换后的检测抗体与生物素连接，得到的产物经过纯化处理后即获得生物素化的检测抗体。
[0015]在可选的实施方式中，生物素包括生物素四聚乙二醇
‑
N
‑
羟基琥珀酰亚胺酯。
[0016]在可选的实施方式中，检测抗体与生物素的摩尔比为1：30
‑
1：50。
[0017]在可选的实施方式中，试剂盒还包括链霉亲和素
‑
β
‑
半乳糖苷酶溶液和荧光底物溶液。
[0018]在可选的实施方式中，荧光底物包括试卤灵
‑
β
‑
D
‑
半乳糖苷。
[0019]本专利技术还提供了上述Simoa试剂盒在检测单囊胚条件培养液中IL
‑
8蛋白中的应用。
[0020]本专利技术还提供了上述Simoa试剂盒的使用方法，其包括：将IL
‑
8捕获抗体包被的磁珠溶液、生物素化的IL
‑
8检测抗体溶液、链霉亲和素
‑
β
‑
半乳糖苷酶溶液、荧光底物溶液、以及加有已知浓度的标准品、质控品和样品的96孔板加载进仪器，运行试验后导出拟合曲线及样品检测结果；其中，质控品由已知浓度的IL
‑
8标准品稀释制得。
[0021]本专利技术具有以下有益效果：
[0022](1)本专利技术通过筛选新的IL
‑
8抗体对及标准品，制备出一种IL
‑
8的Simoa试剂盒，相比于现有技术，灵敏度提高4
‑
10倍。用于检测单囊胚条件培养液中IL
‑
8含量时，灵敏度几乎满足单囊胚条件培养液中超低浓度的IL
‑
8定量检测的需求。
[0023](2)本专利技术的试剂盒可结合Simoa仪器使用，通过全自动检测仪器，解决手工操作依赖问题，在具有较高灵敏度的同时，也使检测结果具备良好的重复性和准确性，为体积小且IL
‑
8蛋白含量极低的样品提供了有效的定量检测方法。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0025]图1为实施例2中IL
‑
8的标准曲线图。
具体实施方式
[0026]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建
议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物标志物IL
‑
8的Simoa试剂盒，其特征在于，包括捕获抗体包被的磁珠、已知浓度的IL
‑
8标准品、生物素化的检测抗体；所述捕获抗体包括单克隆抗体10098
‑
MM05；所述检测抗体包括单克隆抗体10098
‑
MM18；所述IL
‑
8标准品包括10098
‑
H08Y。2.根据权利要求1所述的Simoa试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体包被的磁珠的制备方法包括：将所述捕获抗体用磁珠偶联缓冲液进行液体置换处理，并将所述磁珠进行活化，然后将置换后的捕获抗体与活化磁珠偶联，偶联产物经过清洗液清洗后，用封闭缓冲液封闭，再用清洗液清洗后即获得捕获抗体包被的磁珠。3.根据权利要求2所述的Simoa试剂盒，其特征在于，所述活化磁珠步骤中的活化条件为：活化温度2
‑
8℃，活化时间20
‑
40min。4.根据权利要求3所述的Simoa试剂盒，其特征在于，所述活化磁珠步骤中的活化试剂包括EDC溶液，所述EDC溶液浓度为0.1
‑
0.5mg/mL。5.根据权利要求2所述的Simoa试剂盒，其特征在于，所述偶联步骤中的偶联条件为：偶联温度2
‑
8℃，偶联时间1.5
‑
2.5h。6.根据权利要求5所述的Simoa试剂盒，其特征在于，所述偶联步骤中活化磁珠的浓度为1.3
×
109‑
1.5
×
109个/mL；所述置换后的捕获抗体的...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟惠娴，陈培林，陈露平，孙青，刁梁辉，熊风，曾勇，
申请(专利权)人：深圳市锦欣医疗科技创新中心有限公司，
类型：发明
国别省市：