化学发光检测法的检测校准系统建立方法、检测校准方法技术方案

本发明专利技术公开了一种化学发光检测法的检测校准系统建立方法、检测校准方法；包括磁珠组分、酶组分、荧光素组分制备；建立检测校准系统：将待测物与磁珠组分、酶组分、荧光素组分经孵育后，形成分别用于检测和校准的免疫复合物1和免疫复合物2，免疫复合物1和免疫复合物2经磁分离清洗后去除杂质，免疫复合物1再与酶底物接触反应，以同时建立检测系统和校准系统，用于同时获取检测系统信号和校准系统荧光信号以得出待测物含量。本发明专利技术通过对化学发光试剂同时建立检测系统和校准系统，在每次检测的时候都可以进行校准，每次检测的时候均可以获得两个光信号，从而可以消除外部因素的干扰；且由于是同时建立的检测系统和校准系统，节省耗材，省时、省力。省力。省力。

【技术实现步骤摘要】
化学发光检测法的检测校准系统建立方法、检测校准方法


[0001]本专利技术涉及化学发光检测
，具体涉及一种化学发光检测法的检测校准系统建立方法、检测校准方法。

技术介绍

[0002]化学发光检测技术作为疾病诊断的一种重要手段，广泛应用于各种体外诊断实验中。
[0003]现有的化学发光检测试剂在进行检测的过程中，除单独的检测试剂外，还需要有配套的校准品对检测系统进行校准；目前的校准品通常是将与待测物结构相似的抗原(合成或天然)用缓冲液制备成一定浓度值的校准品(液体或固体)，在临床测试前，通过测定校准品对检测系统进行校准。这种校准方法存在一些问题，由于需要每隔一段时间进行一次校准，耗费试剂、时间以及人力；同时为了节约耗材、时间和人力，只是在特定的时间点对检测系统进行校准，在两次校准操作之间，仪器、环境等因素可能使整个系统发生不可预知的变化，从而会影响检测结果。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是现有的化学发光检测技术中的校准过程费时费力及耗费耗材，且在间隔校准操作期间仪器、环境等因素可能使整个系统发生不可预知的变化从而影响检测结果。目的在于提供一种化学发光检测法的检测校准系统建立方法、检测校准方法，以解决以上问题。
[0005]本专利技术的第一个目的在于提供的一种化学发光检测法的检测校准系统建立方法，包括：
[0006]磁珠组分制备；
[0007]酶组分制备；
[0008]荧光素组分制备；
[0009]将待测物与磁珠组分、酶组分、荧光素组分经孵育后，形成分别用于检测和校准的免疫复合物1和免疫复合物2，免疫复合物1和免疫复合物2经磁分离清洗后去除杂质，所述免疫复合物1再与酶底物接触反应，以同时建立检测系统和校准系统，用于同时获取检测系统信号和校准系统荧光信号以得出待测物含量。
[0010]本专利技术中对化学发光试剂同时建立检测系统和校准系统，这样在每次检测的时候都可以进行校准，每次检测的时候均可以获得两个光信号，即检测系统的光信号和校准系统的荧光信号，从而可以消除外部因素的干扰；且由于是同时建立的检测系统和校准系统，不需要专门配备校准品，可以节省耗材，并省时、省力。其中免疫复合物1用于检测，如免疫复合物1可以为磁珠(链接单克隆抗体1)
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待测物
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酶(链接单克隆抗体2)，免疫复合物2用于校准，如免疫复合物2可以为磁珠(链接羊抗鸡IgY)
‑
APC荧光素(链接鸡IgY)。
[0011]在一可选地实施例中，所述磁珠组分为用单克隆抗体1和羊抗鸡IgY包被磁珠，或
用单克隆抗体1和抗FITC抗体包被磁珠；
[0012]所述荧光素组分为用鸡IgY标记APC，或用FITC标记牛血清白蛋白或酪蛋白；
[0013]所述酶组分为碱性磷酸酶(ALP)链接单克隆抗体2或BNP标记抗体。
[0014]在一可选地实施例中，所述磁珠组分的制备过程为：将单克隆抗体1和羊抗鸡IgY或抗FITC抗体链接生物素酯，利用生物素
‑
链霉亲和素反应体系，将链接有单克隆抗体1的生物素酯再链接至标记有链霉亲和素的超顺磁微粒上，对磁微粒上多余点位用维生素H进行封闭；将制备好的两种免疫磁珠(即是单克隆抗体1包被的磁珠和羊抗鸡IgY包被的磁珠；或者单克隆抗体1包被的磁珠和抗FITC抗体包被的磁珠。)进行混合。其中的超顺磁微粒上还可以是羧基磁珠或Tosyl磁珠。
[0015]在一可选地实施例中，所述酶组分制备过程为：将碱性磷酸酶与交联剂SMCC链接，单克隆抗体2与交联剂2
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IT链接，链接为ALP
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SMCC
‑2‑
IT
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抗体复合物，加入氯化锌、氯化镁提升酶活性。
[0016]在一可选地实施例中，所述荧光素组分制备过程为：先将鸡IgY用活化液进行活化；将活化后的鸡IgY与荧光素混合，2
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8℃条件下避光反应过夜；加入猝灭剂后室温反应；层析柱分离，收集荧光素
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鸡IgY标记产物。
[0017]在一可选地实施例中，校准系统与检测系统的磁珠组分用量比值为1:4。
[0018]本专利技术的第二个目的在于提供一种化学发光检测法的检测校准方法，采用上述建立的所述的检测校准系统，通过检测系统信号和校准系统荧光信号得出待测物含量；
[0019]在化学发光检测仪上加装光学模块，所述光学模块包括所述半导体激光器、滤光片、光敏二极管；
[0020]所述检测系统信号的获取方法为：免疫复合物1上的酶催化底物脱去磷酸基产生光子，光电倍增管将光信号转换为电信号2输出得到；
[0021]所述校准系统信号的获取方法为：半导体激光器发射激光聚焦到免疫复合物2，激发出来的荧光经滤光片后聚集到光敏二极管上，光敏二极管将荧光收集，并将荧光的强弱转换为电信号1输出得到。
[0022]由于本专利技术对化学发光试剂是同时建立的检测系统和校准系统，且在化学发光检测仪上加装了光学模块来获取校准系统的荧光信号，从而可以利用同一个待测物体系在同一台仪器上同时获取检测系统信号和校准系统荧光信号，不需要采用专门的仪器采集专门配套的校准品的信号，操作简单、节约耗材，省时省力，每次检测均可采集到检测系统信号和校准系统荧光信号，进而通过校准系统的信号对检测系统的信号进行修正，消除外部因素的干扰。
[0023]在一可选地实施例中，所述光学模块加装在化学发光检测仪上的光电倍增管的侧面；
[0024]所述滤光片位于所述半导体激光器与所述光敏二极管之间，以接收半导体激光器发生的激光并对所述激光进行选取，将得到的所需辐射波段的光聚集到光敏二极管上。
[0025]在一可选地实施例中，免疫复合物2被激发出来的荧光的波长与酶催化底物发出的光波的波长之间的差值大于20nm。
[0026]在一可选地实施例中，半导体激光器发出的激光波长为630nm；免疫复合物2被激发出来的荧光的波长为660nm；酶催化底物发出的光波的波长为470nm。
[0027]在一可选地实施例中，所述通过检测系统信号和校准系统荧光信号得出待测物含量的过程为：
[0028]通过测定不同浓度的参考品制作校准曲线，并根据所述标准曲线得到浓度
‑
信号比值的拟合公式，所述信号比值为电信号2/电信号1的比值；
[0029]当检测完待测物后，计算信号比值并代入拟合公式，即可得待测物含量。
[0030]本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
[0031]本专利技术实施例提供的一种化学发光检测法的检测与校准系统的建立方法，通过对化学发光试剂同时建立检测系统和校准系统，在每次检测的时候都可以进行校准，每次检测的时候均可以获得两个光信号，即检测系统的光信号和校准系统的荧光信号，从而可以消除外部因素的干扰；且由于是同时建立的检测系统和校准系统，可以节省耗材，并省时、省力。
[0032]检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化学发光检测法的检测校准系统建立方法，其特征在于，包括：磁珠组分制备；酶组分制备；荧光素组分制备；建立检测校准系统：将待测物与磁珠组分、酶组分、荧光素组分经孵育后，形成分别用于检测和校准的免疫复合物1和免疫复合物2，免疫复合物1和免疫复合物2经磁分离清洗后去除杂质，所述免疫复合物1再与酶底物接触反应，以同时建立检测系统和校准系统，用于同时获取检测系统信号和校准系统荧光信号以得出待测物含量。2.如权利要求1所述的一种化学发光检测法的检测与校准系统的建立方法，其特征在于，所述磁珠组分为用单克隆抗体1和羊抗鸡IgY包被磁珠，或用单克隆抗体1和抗FITC抗体包被磁珠，或用BNP包被抗体和羊抗鸡IgY或抗FITC抗体包被磁珠；所述荧光素组分为用鸡IgY标记APC，或用FITC标记牛血清白蛋白或酪蛋白；所述酶组分为碱性磷酸酶链接单克隆抗体2或BNP标记抗体。3.如权利要求1所述的一种化学发光检测法的检测与校准系统的建立方法，其特征在于，所述磁珠组分的制备过程为：将单克隆抗体1和羊抗鸡IgY或抗FITC抗体链接生物素酯，利用生物素
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链霉亲和素反应体系，将链接有单克隆抗体1的生物素酯再链接至标记有链霉亲和素的超顺磁微粒上，对磁微粒上多余点位用维生素H进行封闭；将制备好的两种免疫磁珠进行混合。4.如权利要求1所述的一种化学发光检测法的检测与校准系统的建立方法，其特征在于，所述酶组分制备过程为：将碱性磷酸酶与交联剂SMCC链接，单克隆抗体2与交联剂2
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IT链接，链接为ALP
‑
SMCC
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IT
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抗体复合物，加入氯化锌、氯化镁提升酶活性。5.如权利要求1所述的一种化学发光检测法的检测与校准系统的建立方法，其特征在于，所述荧光素组分制备过程为：先将鸡IgY用活化液进行活化；将活化后的鸡IgY与荧光素混合，2
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨博，石彩娟，蒋明君，漆海林，林源，陈卫，
申请(专利权)人：四川新健康成生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：