一种具有高荷载量和高稳定的负载叶黄素的大豆肽的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种具有高荷载量和高稳定的负载叶黄素的大豆肽的制备方法，属于功能性纳米载运技术领域。本发明专利技术的方法具体包括以下步骤：对大豆蛋白进行酶解冻干制备得大豆多肽，通过反溶剂法添加叶黄素与大豆肽溶液充分反应后，离心收集上清液，即得包封叶黄素的纳米颗粒溶液，经后续冷冻干燥处理可得粉末制品。制备得到的纳米颗粒上清液的平均粒径均小于200nm。与大豆分离蛋白相比，本发明专利技术得到的大豆肽基叶黄素纳米颗粒粒径分布更均匀，多分散系数均小于0.3，且大豆肽较大豆蛋白对叶黄素具有更高的荷载量并能有效提高叶黄素的光照稳定性及体外消化稳定性。稳定性及体外消化稳定性。稳定性及体外消化稳定性。

【技术实现步骤摘要】
一种具有高荷载量和高稳定的负载叶黄素的大豆肽的制备方法


[0001]本专利技术属于功能性纳米载运
，具体涉及一种具有高荷载量和高稳定的负载叶黄素的大豆肽的制备方法。

技术介绍

[0002]根据当前食品工业的发展趋势，消费者对食品的需求逐渐从安全、廉价和方便转变为健康可持续。叶黄素是一种存在于蔬菜、水果、鸡蛋中的类胡萝卜素，具备显著的眼部保护功效，如预防白内障、老年性黄斑变性、糖尿病视网膜病变。此外，叶黄素还具备治疗神经系统紊乱、口部炎症、保护心脏等功能。然而，由于叶黄素独特的共轭双键结构，导致其难溶于水，无法到达肠道胶束相进而被人体有效吸收；并且叶黄素易受光照、氧气等环境因素降解损失，限制了其在食品生产中的应用。
[0003]纳米递送体系是改善疏水性活性物质的水溶性与稳定性的有效手段。来自于食品中的蛋白、多糖及淀粉已被广泛用作纳米载体。由蛋白质制备得到的纳米颗粒具备生物可降解性、非抗原性、可代谢性及易于表面修饰等优点，其中植物蛋白作为一种天然环保的食用材料，除了能够提供可持续的发展方案满足人类蛋白质的消费需求，还可以通过降低心血管疾病、糖尿病和某些类型的癌症风险来改善人类健康，目前已被广泛用作食品配方中动物蛋白的替代品。
[0004]大豆蛋白作为最常见的植物蛋白之一，其分子量远大于动物蛋白且疏水基团大多被埋藏在结构内部，较大的分子量和表面有限的疏水结合位点使疏水性活性物质在纳米颗粒中的荷载量低于动物蛋白。为解决大豆蛋白载荷量较低的问题，研究表明可以通过物理或化学改性使大豆蛋白内部的疏水基团暴露从而提高对疏水性活性物质的荷载能力，目前已有的手段有热处理、超声处理、添加温和变性剂及酶解。其中酶解改性是目前植物蛋白结构改性的研究热点，具有条件温和、反应快、安全性高、专一性强且易于控制等优点，但对于大豆蛋白酶解到何种程度能够产生更好的包封效果鲜有报道，且是否比未酶解的蛋白而言荷载能力有所提升也未见比较。
[0005]之前有研究报道用大豆蛋白包封姜黄素，但与叶黄素不同，姜黄素是一种多酚类物质，在碱性溶液中可溶，可采用pH驱动法对其进行包封。而叶黄素属于类胡萝卜素，疏水性较姜黄素强，在水中几乎不溶，无法采用该方法。有报道使用乳清蛋白和玉米油高压均质制备叶黄素纳米乳液，虽然粒径分布均匀，能够有效降低粒径，且能更易被Caco
‑
2细胞吸收，但均质过程中自由基诱导效应会导致叶黄素损失，使叶黄素的包封率下降。目前，作为应用最广的植物蛋白，大豆蛋白及大豆多肽未见报道被用于叶黄素的包封载运研究。

技术实现思路

[0006]为了解决叶黄素水溶性及稳定性差的问题，本专利技术提供了一种基于大豆肽载体提高叶黄素荷载量及稳定性的方法。本专利技术的方法具体包括以下步骤：对大豆蛋白进行酶解
冻干制备得大豆多肽，通过反溶剂法添加叶黄素与大豆肽溶液充分反应后，离心收集上清液，即得包封叶黄素的纳米颗粒溶液，经后续冷冻干燥处理可得粉末制品。制备得到的纳米颗粒上清液的平均粒径均小于200nm。与大豆分离蛋白相比，本专利技术得到的大豆肽基叶黄素纳米颗粒粒径分布更均匀，多分散系数均小于0.3，且大豆肽较大豆蛋白对叶黄素具有更高的荷载量并能有效提高叶黄素的光照稳定性及体外消化稳定性。
[0007]本专利技术是通过大豆蛋白的酶解和纳米颗粒溶液的制备的技术方案实现的：
[0008]本专利技术的目的是提供一种具有高荷载量和高稳定的负载叶黄素的大豆肽的制备方法，包括以下步骤：
[0009](1)将大豆分离蛋白溶液与蛋白酶混合，并加热进行酶解反应，灭活后固液分离取液相，干燥后得到大豆肽粉末；
[0010](2)将步骤(1)所得大豆肽粉末溶于缓冲液中，加入叶黄素的醇溶液进行混合，固液分离取上清液，得到负载叶黄素的大豆肽。
[0011]进一步地，步骤(1)中，所述大豆分离蛋白溶液中大豆分离蛋白的质量分数为4％
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8％(w/v)。
[0012]进一步地，步骤(1)中，所述大豆分离蛋白溶液与蛋白酶是在pH值为2.0
‑
8.0的条件下混合。
[0013]进一步地，步骤(1)中，所述蛋白酶选自胃蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中的一种或多种。
[0014]进一步地，步骤(1)中，所述酶解温度为35℃
‑
57℃。
[0015]进一步地，步骤(1)中，所述酶解反应的时间为2min
‑
3h。
[0016]进一步地，步骤(1)中，所述蛋白酶的添加量为2000U/g
‑
2500U/g蛋白。
[0017]进一步地，步骤(1)中，所述灭活的温度为90℃
‑
100℃；所述灭酶的时间为8min
‑
10min。
[0018]进一步地，步骤(2)中，所述叶黄素与大豆肽的质量比为1:100
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2:25。
[0019]进一步地，步骤(2)所述无水乙醇与蛋白溶液的体积比为1:10(v/v)。
[0020]进一步地，步骤(2)中，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液中的一种或多种。
[0021]进一步地，步骤(2)中，所述混合的时间为1.5h
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2.5h。
[0022]进一步地，步骤(2)中，所述离心条件为：转速8000rpm
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10000rpm下离心15min
‑
20min。
[0023]进一步地，所述蛋白酶为胃蛋白酶时的酶解温度为35℃
‑
37℃，酶解时间为45min
‑
1h。
[0024]进一步地，所述蛋白酶为碱性蛋白酶时的酶解温度为53℃
‑
55℃，酶解时间为2min
‑
5min。
[0025]进一步地，所述蛋白酶为胰蛋白酶时的酶解温度为35℃
‑
37℃，酶解时间为45min
‑
3h。
[0026]本专利技术的技术方案具有以下优点：
[0027]本专利技术提供了一种基于大豆肽载体提高叶黄素荷载量及稳定性的方法，针对食品中天然类胡萝卜素叶黄素水溶性和稳定性差的问题。由于大豆蛋白疏水基团大多被埋藏于
内部，表面与疏水活性物质的结合位点有限，需要对其处理使内部的疏水基团暴露，增加对疏水活性物质的荷载量。本专利技术通过对大豆蛋白酶解后暴露疏水基团，得到大豆肽荷载叶黄素，提高了对叶黄素的荷载量。经光照24h后，测定叶黄素的保留率，经大豆肽包封的叶黄素保留率较未经包封的叶黄素提升14.97％～26.18％。经体外胃消化后，测定叶黄素的保留率，经大豆肽包封的叶黄素保留率较未经包封的叶黄素提升6.04％～12.47％。经体外肠消化后，测定叶黄素的保留率，经大豆肽包封的叶黄素保留率较未经包封的叶黄素提升8.04～15.57％。本专利技术利用大豆肽负载叶黄素提高叶黄素的荷载量和稳定性的方法简单便捷，易于实施，对于叶黄素经光照及胃肠道消化而导致的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有高荷载量和高稳定的负载叶黄素的大豆肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将大豆分离蛋白溶液与蛋白酶混合，并加热进行酶解反应，灭活后固液分离取液相，干燥后得到大豆肽粉末；(2)将步骤(1)所得大豆肽粉末溶于缓冲液中，加入叶黄素的醇溶液进行混合，固液分离取上清液，得到负载叶黄素的大豆肽。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述大豆分离蛋白溶液中大豆分离蛋白的质量分数为4％
‑
8％(w/v)。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述大豆分离蛋白溶液与蛋白酶是在pH值为2.0
‑
8.0的条件下混合。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述蛋白酶选自胃蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：何志勇，吴任依，陈洁，曾茂茂，王召君，陈秋铭，秦昉，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：