谷氨酸脱氢酶测定试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及体外诊断技术领域，特别涉及谷氨酸脱氢酶测定试剂盒。本发明专利技术提供了谷氨酸脱羧酶、谷氨酸氧化酶或谷氨酰胺合成酶中的一种或多种在提高谷氨酸脱氢酶测定的灵敏度、准确度和/或重复性中的应用；还提供了谷氨酸脱羧酶、谷氨酸氧化酶或谷氨酰胺合成酶中的一种或多种在降低谷氨酸脱氢酶测定过程中产物L

【技术实现步骤摘要】
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，特别涉及谷氨酸脱氢酶测定试剂盒。

技术介绍

[0002]谷氨酸脱氢酶(GLDH)是一种含锌线粒体酶，是在动物、植物和微生物中广泛存在的一种酶。该酶主要存在于真核细胞的线粒体上，在一些哺乳动物中占到其线粒体基质总蛋白的10％。通常情况下，该酶以NAD(H)和NADP(H)为辅酶，主要催化L
‑
谷氨酸和α
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酮戊二酸的可逆反应，参与包括三羧酸循环(TCA循环)、氨代谢调控、能量产生和信号转导在内的多种细胞生理过程，在细胞稳态、氨基酸转化和碳水化合物代谢中起着十分重要的作用。该酶在人体中主要分布于肝脏、心肌和肾细胞线粒体的基质及内膜中，少量存在于脑、骨骼肌及白细胞中，其中以肝组织中酶活性最高，且几乎全部集中于线粒体基质中。因此谷氨酸脱氢酶作为肝线粒体特异性酶，正常情况下，在人体血清中含量很低，参考值范围仅为：0～8U/L，只有当肝细胞受到病毒、药物、酒精等的损伤或者肝细胞出现坏死的时候，进入血液中，此时血清中的谷氨酸脱氢酶的含量及活性会明显增高，而谷氨酸脱氢酶含量的升高只出现在肝、胆系的疾病中，然而在其他的非肝胆性疾病中并不会升高，因此也说明了谷氨酸脱氢酶的测定对于疾病的判断具有很强的特异性。如在急性缺血性肝炎中谷氨酸脱氢酶的阳性率可达到100％，因此对于谷氨酸脱氢酶的检测是诊断急性缺血性肝病的一个重要指标。血清中谷氨酸脱氢酶活性的测定也可作为诊断肝细胞病变，特别是急性坏死性肝炎和酒精性肝炎的重要指标。另外，谷氨酸脱氢酶还可用于阻塞性黄疸和非阻塞性黄疸的鉴别、高血清转氨酶的鉴别诊断以及评价肝细胞损害的严重程度等。同时，对谷氨酸脱氢酶的动态观察，也能对上述疾病的治疗效果及预后也有着重要意义。对于其他一些疾病，谷氨酸脱氢酶也有一定的诊断价值，因此谷氨酸脱氢酶的检测有很大的应用和开发前景。
[0003]目前对于血清中谷氨酸脱氢酶检测的方法多建立在以连续监测法为基础的检测方法，该方法的原理为在NADH的存在时，谷氨酸脱氢酶催化α
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酮戊二酸和氨反应生成谷氨酸、水，同时NADH被氧化为NAD
+
，引起其在340nm处吸光度的下降。在340nm处检测吸光度之差，其变化程度与样本中的谷氨酸脱氢酶活性成正比，从而测定出血清中谷氨酸脱氢酶的活性。该方法操作较为简单，产品的抗干扰能力也较强，并且能够很好地结合全自动生化分析仪器的使用，有利于临床中的使用和推广，但是该方法中的化学反应为一个可逆反应，即生成的谷氨酸和NAD
+
会再次反应生成NADH和α
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酮戊二酸，导致了检测的灵敏度低，低值区准确度不高，再加之人体中谷氨酸脱氢酶的含量非常的少，因此也会造成检测结果的重复性差，出现较多0值和负值，这给临床中的使用和推广造成很大的阻力。
[0004]下述为一种谷氨酸脱氢酶活性浓度测定方法的以及谷氨酸脱氢酶检测试剂盒，其与本专利技术创造最为接近：(CN101169372A
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谷氨酸脱氢酶诊断试剂盒及谷氨酸脱氢酶活性浓度测定方法)
[0005]1、其方法原理如下：
[0006][0007]将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降速度，测算出谷氨酸脱氢酶的活性浓度大小。
[0008]2、一种谷氨酸脱氢酶测定试剂盒：
[0009]试剂1：
[0010]缓冲液
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20～500mmol/L；
[0011]稳定剂
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1～50mmol/L；
[0012]还原型辅酶
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0.1～0.35mmol/L；
[0013]试剂2：
[0014]缓冲液
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20～500mmol/L；
[0015]2‑
酮戊二酸酯
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1～50mmol/L；
[0016]氯化氨
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1～50mmol/L。
[0017]由上述示例可知，目前与本专利技术较为接近的实现方案中，几乎都忽略了反应原理中其反应的可逆性，因此导致检测的灵敏度不高，准确度和重复性较差的情况。
[0018]目前国际市场上，能够测定谷氨酸脱氢酶活性的方法或者试剂盒均为上述还原型辅酶参与的酶促反应来测定酶活，但由于反应为可逆反应导致了检测的准确性不高，再加之人体中谷氨酸脱氢酶的含量非常的少，正常人仅有0～8U/L左右，也因此会造成检测结果的重复性差，测值出现较多0值和负值。

技术实现思路

[0019]有鉴于此，本专利技术提供了谷氨酸脱氢酶测定试剂盒，其灵敏性、准确性和重复性高。
[0020]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0021]本专利技术提供了可与谷氨酸发生反应的酶在提高谷氨酸脱氢酶测定的灵敏度、准确度和/或重复性中的应用；
[0022]所述可与谷氨酸发生反应的酶包括但不限于谷氨酸脱羧酶、谷氨酸氧化酶或谷氨酰胺合成酶中的一种或多种。
[0023]本专利技术还提供了可与谷氨酸发生反应的酶在降低谷氨酸脱氢酶测定过程中产物L
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谷氨酸的逆反应中的应用；
[0024]所述可与谷氨酸发生反应的酶包括但不限于谷氨酸脱羧酶、谷氨酸氧化酶或谷氨酰胺合成酶中的一种或多种。
[0025]本专利技术还提供了试剂组合，包括缓冲液、稳定剂、α
‑
酮戊二酸、氯化氨、NADH和/或可与谷氨酸发生反应的酶；
[0026]所述可与谷氨酸发生反应的酶包括但不限于谷氨酸脱羧酶、谷氨酸氧化酶或谷氨酰胺合成酶中的一种或多种。
[0027]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合中以浓度计，包括：
[0028][0029]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合中所述缓冲液包括三乙醇胺和/或磷酸盐缓冲液；和/或
[0030]所述稳定剂包括NaN3和/或Pro
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clin300；和/或
[0031]所述可与谷氨酸发生反应的酶包括但不限于谷氨酸脱羧酶、谷氨酸氧化酶或谷氨酰胺合成酶中的一种或多种。
[0032]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂组合中还包括磷酸吡哆醛。
[0033]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述磷酸吡哆醛的浓度包括5.0mmol/L。
[0034]本专利技术还提供了上述试剂组合在制备谷氨酸脱氢酶测定试剂盒中的应用。
[0035]本专利技术还提供了试剂盒，包括上述试剂组合，以及可接受的辅料或助剂。
[0036]本专利技术还提供了上述试剂盒的制备方法，包括将所述缓冲液、所述稳定剂、所述α
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酮戊二酸、所述氯化氨、所述NADH和所述可与谷氨酸发生反应的酶混合，获得所述试剂盒；
[0037]所述混合不包括将所述α
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.可与谷氨酸发生反应的酶在提高谷氨酸脱氢酶测定的灵敏度、准确度和/或重复性中的应用；所述可与谷氨酸发生反应的酶包括但不限于谷氨酸脱羧酶、谷氨酸氧化酶或谷氨酰胺合成酶中的一种或多种。2.可与谷氨酸发生反应的酶在降低谷氨酸脱氢酶测定过程中产物L
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谷氨酸的逆反应中的应用；所述可与谷氨酸发生反应的酶包括但不限于谷氨酸脱羧酶、谷氨酸氧化酶或谷氨酰胺合成酶中的一种或多种。3.试剂组合，其特征在于，包括缓冲液、稳定剂、α
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酮戊二酸、氯化氨、NADH和/或可与谷氨酸发生反应的酶；所述可与谷氨酸发生反应的酶包括但不限于谷氨酸脱羧酶、谷氨酸氧化酶或谷氨酰胺合成酶中的一种或多种。4.如权利要求3所述的试剂组合，其特征在于，以浓度计，包括：5.如权利要求3或4所述的试剂组合，其特征在于，所述缓冲液包括三乙醇胺和/或磷酸盐缓冲液；和/或所述稳定剂包括NaN3和/或Pro
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clin300；和/或所述可与谷氨酸发生反应的酶包括但不...

【专利技术属性】
技术研发人员：张婷婷，
申请(专利权)人：北京安图生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：