一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒，包括以下组分：裂解液、磁珠、RNase A溶液、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液。所述裂解液包含CHAPS、盐酸胍、尿素、非离子表面活性剂、缓冲液、聚己缩胍，三异丁基铝；本发明专利技术通过试剂配方的优化，提高了真菌基因组DNA的提取效率。本发明专利技术将裂解液与前处理溶液A溶液加在同一孔位中，CHAPS、盐酸胍、尿素等、聚己缩胍，三异丁基铝在裂解真菌外壳结构的同时，结合异丙醇等沉淀基因组DNA，使基因组DNA快速的吸附在磁珠上，极大地提高了提取效率。极大地提高了提取效率。极大地提高了提取效率。

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒。

技术介绍

[0002]在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的产量、纯度及完整性直接关系到下游核酸检测、生物学研究或其他新产品开发的成败。磁珠法核酸提取方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠(以下简称磁珠)为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取的方法。该方法不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。
[0003]目前基因组DNA提取纯化的方法有很多种，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法等，但上述方法存在提取试剂有毒，操作繁琐，易导致污染等问题，而磁珠法不使用有毒试剂，操作简单，不易污染，已经成为目前分子生物学和临床检验医学研究的理想方法。
[0004]磁珠法对于真菌基因组DNA提取同样有效，但由于真菌细胞壁成分复杂，提取过程中难以使真菌得到充分裂解，真菌中富含的多糖、色素、核酸酶等物质使得核酸的分离更加困难。已报道的真菌破壁方法有：液氮冻融、
‑
70℃冻融、酶消解、超声破碎、高盐溶液、尿素缓冲液处理等等，但是上述方法均有其缺陷，例如冻融处理不适合配合核酸提取仪使用；酶消解前处理复杂；超声破碎存在标本间污染的可能；高盐溶液、尿素缓冲液处理的检测限较高，检测结果不理想；
[0005]此外，传统的CTAB法是提取的真菌基因组DNA较常见的方法，其主要原理为CTAB是一种阳离子去污剂，可与蛋白质形成络合物，沉淀蛋白质物质，达到分离纯化核酸的目的，再经过酚、氯仿等物质的纯化离心、洗涤、洗脱等步骤后实现对DNA的提取工作。但是针对多糖含量较高的产菌核真菌的DNA提取无法达到理想的效果。
[0006]因此寻找一种有效裂解真菌、高效提取真菌基因组DNA的磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒是目前丞待解决的问题。

技术实现思路

[0007]具体的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种磁珠法真菌基因组DNA提取裂解液，其成分和含量如下：
[0009][0010]进一步的，本专利技术提供一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒，包括上述的裂解液，还包括磁珠、RNase A溶液、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液，其中：
[0011]所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；
[0012]所述清洗液I的成分和含量如下：
[0013][0014]所述清洗液II为75％乙醇；
[0015]所述洗脱液的成分和含量如下：
[0016]缓冲液
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0.04～0.05mol/L
[0017]EDTA
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0.004～0.04mol/L；
[0018]所述前处理溶液A成分和含量如下：
[0019]SDS
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10％
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20％
[0020]非离子表面活性剂
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2％
‑
6％
[0021]缓冲液
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0.04～0.05mol/L；
[0022]所述RNase A溶液的浓度为10～20mg/ml。
[0023]进一步的，所述非离子表面活性剂为NP
‑
40、Tween
‑
20、Triton
‑
X100中的一种或多种。
[0024]进一步的，所述缓冲液为pH7.0～8.0的Tris
‑
HCl缓冲液或磷酸缓冲液。
[0025]进一步的，所述磁珠的粒径在500～2000nm之间。
[0026]本专利技术还提供一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒进行真菌DNA提取的方法，包括如下步骤：
[0027](1)取真菌菌液，用前处理溶液A进行处理，得到处理后的真菌菌液，将其加入到预
分装的96深孔板中；
[0028](2)分别添加处理后的真菌菌液、前处理溶液A、RNase A溶液到96深孔板中，使用核酸提取仪依次经过裂解，磁珠准备，裂解，多次清洗及洗脱后，实现真菌DNA的提取。
[0029]本专利技术还保护三异丁基铝在裂解细胞中的应用。
[0030]所述三异丁基铝或用于裂解细胞膜；或用于裂解细胞壁；或用于促进释放核酸。
[0031]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0032]1.本专利技术提供的一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒提取的OD值均在1.80～2.03之间，具有较高的纯度；
[0033]2.使用三异丁基铝作为裂解液的成分可以更高效破坏细胞膜结构，快速释放核酸，缩短提取时间，增加裂解效率；
[0034]3.本专利技术的磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒可实现裂解与结合步骤一步完成，从而使本专利技术在自动化应用时每一步骤的反应试剂可以预先灌装，使用时只需将样本加入，即可放入仪器中开始提取操作，配合核酸提取仪极大地提高了提取效率。
附图说明
[0035]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0036]图1为本专利技术的磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒中实施例1从菌液中提取基因组DNA产物的电泳胶图以及对比例1(即图中对照组)基因组DNA产物的电泳胶图(孔道1：Marker，孔道2
‑
8：对比例1，7个平行，孔道9
‑
15：实施例1，7个平行)。
具体实施方式
[0037]为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例和附图进行详细描述。
[0038]在本专利技术的一些实施例中：
[0039]一种磁珠法真菌基因组DNA提取裂解液的成分和含量如下：
[0040][0041]一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒，还包括磁珠、RNase A溶液、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液，其中：
[0042]所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；
[0043]所述清洗液I的成分和含量如下：
[0044][0045]所述清洗液II为75％乙醇；
[0046]所述洗脱液的成分和含量如下：
[0047]缓冲液
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0.04～0.05mol/L
[0048]EDTA
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0.004～0.04mol/L；
[0049]所述前处理溶液A成分和含量如下：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法真菌基因组DNA提取裂解液，其特征在于，所述裂解液的成分和含量如下：2.一种磁珠法真菌基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的裂解液，还包括磁珠、RNase A溶液、前处理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脱液，其中：所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；所述清洗液I的成分和含量如下：所述清洗液II为75％乙醇；所述洗脱液的成分和含量如下：缓冲液
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0.04～0.05mol/LEDTA
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0.004～0.04mol/L；所述前处理溶液A成分和含量如下：SDS
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10％
‑
20％非离子表面活性剂
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2％
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6％缓冲液
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0.04～0.05mol/L；所述RNase A溶液的浓度为10～20mg/ml。3.如权利要求2所述的一种磁珠法真菌基因组D...

【专利技术属性】
技术研发人员：寇增强，刘盼，隋修磊，刘海龙，
申请(专利权)人：山东博弘基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：