【技术实现步骤摘要】
一种测定野生稻鞘腐病致病性的无菌土泥法
[0001]本专利技术涉及植物病原菌测定
，具体涉及一种测定野生稻鞘腐病致病性的无菌土泥法。
技术介绍
[0002]稻，通称水稻，是一年生水生草本。秆直立，高0.5
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1.5米，随品种而异。叶鞘松弛，无毛；叶舌披针形，长10
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25厘米，两侧基部下延长成叶鞘边缘，具2枚镰形抱茎的叶耳；叶片线状披针形，长40厘米左右，宽约1厘米，无毛，粗糙。水稻是当今世界最重要的粮食作物之一，全球一半以上的人口以稻米为主要食物来源。稻米不仅是主粮，历史悠久的演化下，稻米还有很多对人类有贡献的经济作用。
[0003]水稻鞘腐败病，为在秧苗期至抽穗期均可发病，幼苗染病叶鞘上生褐色病斑，边缘不明显。分蘖期染病叶鞘上或叶片中脉上初生针头大小的深褐色小点，向上、下扩展后形成菱形深褐色斑，边缘浅褐色。叶片与叶脉交界处多现褐色大片病斑。孕穗至抽穗期染病剑叶叶鞘先发病且受害严重，叶鞘上生褐色至暗褐色不规则病斑，中间色浅，边缘黑褐色较清晰，严重的现虎斑纹状病斑，向整个叶鞘...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种测定野生稻鞘腐病致病性的无菌土泥法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：水稻鞘腐病病原菌的培养；步骤1.1：PDA培养基的制备；步骤1.1.1:称取200g土豆、20g葡糖糖、20g琼脂粉以及适量抗生素，将土豆切成黄豆大小的块状结构；步骤1.1.2：在水浴锅中加入土豆和1000ml的水，用玻璃棒搅拌加热，直至土豆可用玻璃棒轻易碾碎；步骤1.1.3：用纱布过滤掉土豆，补充水至1000ml后继续搅拌加热；步骤1.1.4：一边搅拌一边加入琼脂粉和葡糖糖，直至琼脂粉和葡糖糖完全融化；步骤1.1.5：用纱布过滤掉滤渣，补充水至1000ml，得到预处理滤液；步骤1.1.6：将预处理滤液分装至多个200ml的锥形瓶内，塞上瓶塞并用报纸和棉绳绑紧锥形瓶的瓶口；步骤1.1.7:将装有预处理滤液的锥形瓶进行高压蒸汽灭菌，得到加热融化的PDA培养基，其中，所述的高压蒸汽灭菌的温度为121℃，时间为30min；步骤1.2：水稻鞘腐病病原菌的接种培养；步骤1.2.1：在超净工作台上放置PDA培养基、培养皿、酒精灯、打火机、标签纸、封口膜、签字笔，并置于紫外灯下照射30min；步骤1.2.2：将加热融化的PDA培养基趁热倒入培养皿中；步骤1.2.3：等待PDA培养基冷却凝固，获得PDA平板，在PDA平板的中央位置接入一小块水稻鞘腐病病原菌菌种；步骤1.2.4：用封口膜密封培养皿，在温度为25℃下培养5天；步骤2：水稻鞘腐病病原菌的接种；步骤2.1：将培养皿、漏勺、棉签、装有水的锥形瓶用报纸包裹严实后，在121℃的高温蒸汽下灭菌30min；步骤2.2：准备不同品种的野生稻种子，每个品种的种子至少设置对照组150粒、试验组150粒，对照组和试验组分别设置5组,对照组的种子和试验组的种子用培养皿分别装好，并贴上标签；步骤2.3：在超净工作台上准备培养皿、漏勺、瓶装无菌水、无菌棉签、酒精灯、打火机、标签纸、封口膜、签字笔，并置于紫外灯下照射30min；步骤2.4:关闭紫外灯，打开酒精灯，为对照组和试验组分别准备3个培养皿，将3个培养皿中的2个打开，培养皿底和培养皿盖水平放置，往2个培养皿底和1个培养皿盖倒入无菌水；步骤2.5:对照组的处理；步骤2.5.1：将对照组的种子进行表面消毒，在装有对照组种子的培养皿中倒入75%乙醇，直至淹没种子，浸泡1min后利用漏勺来过滤掉乙醇，再次使用漏勺将种子按顺序分别在2个装有无菌水的培养皿底和1个装有无菌水的培养皿盖中浸泡洗涤；步骤2.5.2：将过滤掉无菌水的种子倒入新的培养皿中，贴上标签；步骤2.5.3：往培养皿中倒入无菌水，直至淹没种子，用封口膜密封培养皿，获得预处理的对照组种子；
步骤2.6：菌株悬浮液的制备；步骤2.6.1：准备100ml无菌水，4个培养5天的水稻鞘腐病病原菌平板；步骤2.6.2：往水稻鞘腐病病原菌平板中倒入15ml的无菌水；步骤2.6.3：用无菌棉签括取水稻鞘腐病病原菌平板表面的病菌孢子，将病菌孢子和无菌水充分混合，获得菌液，将菌液倒入装有100ml无菌水的锥形瓶中；步骤2.6.4：将锥形瓶内的菌液倒入水稻鞘腐病病原菌平板中，用无菌棉签轻轻洗刷，再倒回锥形瓶中，重复两次，然后测定病菌孢子的浓度，将病菌孢子的浓度调整为105个/ml，得到菌株悬浮液；步骤2.7:试验组的病原菌接种；步骤2.7.1：将试验组的种子进行表面消毒，在装有试验组种子的培养皿中倒入75...
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