用于诊断病毒感染的方法、试剂盒和系统中的诊断肽技术方案

本发明专利技术涉及用于体外诊断对象感染的诊断肽以及方法、试剂盒和系统。使用本发明专利技术肽的方法包括以下步骤：i)提供体液样品，ii)使体液样品与肽接触，所述肽包含具有650

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于诊断病毒感染的方法、试剂盒和系统中的诊断肽
专利

[0001]本专利技术涉及用于体外诊断病毒感染的方法、体外诊断对象病毒感染的方法、用于检测对象存在感染的试剂盒，以及用于检测对象存在感染的系统中的诊断肽，其中所述方法包括提供体液样品。

技术介绍

[0002]对患者中病毒感染的改进诊断方法的临床需求日益增加。快速检测和鉴定病毒病原体对于限制病毒性疾病的转移和传播以及监测治疗方法至关重要。围绕2019/2020年全球大流行SARS相关冠状病毒的事件可以说明对此类方法的需求。
[0003]SARS是由SARS相关冠状病毒(SARS
‑
CoV)引起的病毒性呼吸系统疾病。SARS于2003年2月在亚洲被首次报道。2019/20年，SARS
‑
CoV
‑
19大流行在全球造成>600,000人死亡。
[0004]SARS冠状病毒属于与引起普通感冒的病毒相似的一组病毒。SARS病毒通过人与人之间的密切接触传播，且被认为最容易通过感染者咳嗽或打喷嚏时产生的呼吸道飞沫传播。当来自感染者的飞沫在空气中被推动一小段距离(通常多达3英尺)并沉积在附近人的黏膜上时，就会发生飞沫传播。当一个人触摸被传染性飞沫污染的表面，然后触摸他或她的嘴、鼻子或眼睛时，病毒也会传播。
[0005]实时逆转录酶
‑
PCR(RT
‑
PCR)检测由于其作为特异性和简单的定量测定的优势，目前被青睐用于检测冠状病毒。此外，实时RT
‑<br/>PCR比常规的RT
‑
PCR测定更敏感，这对早期感染的诊断有很大帮助。因此，实时RT
‑
PCR测定仍然是用于检测包括SARS
‑
CoV
‑
2在内的各种冠状病毒的主要方法[14]。
[0006]即便如此，仍需要改进实时RT
‑
PCR测定。由于RT
‑
PCR方法容易受到污染并且需要耗时的样品处理和PCR后分析，因此改进的测定是基于TaqMan的实时RT
‑
PCR，它可以很容易地在常规诊断环境中实施以进行HCoV的检测。此外，为了进一步提高灵敏度，可以使用2种TaqMan探针而不是1种探针进行SARS
‑
CoV的实时定量RT
‑
PCR测定。这种使用双TaqMan探针进行定量的简单修改在非常需要超灵敏性的领域具有广泛的应用，其中SARS
‑
CoV检测限为每个反应1个拷贝RNA。
[0007]LAMP是一种新型的高效等温核酸扩增方法。然而，结果分析通常是通过耗时的凝胶电泳进行的。如果这些方法依赖于非特异性信号转导方案，如荧光染料嵌入到任何双链DNA扩增子中，或由于聚合过程中焦磷酸盐的释放导致溶液混浊，则不能排除来源于引物二聚体或非引物反应的非预期信号的可能性，
[0008]在临床检测中，缺乏安全且稳定的外部阳性对照(EPC)可能成为PCR/LAMP方法诊断冠状病毒的严重问题。
[0009]同时，冠状病毒的快速突变特性凸显了准确检测遗传多样化冠状病毒的必要性。
[0010]需要一种能够识别体液样品中是否存在病毒感染并且可以在护理点进行的快速诊断方法。
[0011]专利技术概述
[0012]本专利技术提供了用于体外诊断病毒感染的方法中的用途的诊断肽，所述肽由式(I)表示：
[0013][a]‑
[b]‑
[c]ꢀꢀ
(I)
[0014]其中：
[0015][a]是具有650
‑
900nm发射波长的荧光剂，
[0016][b]是包含氨基酸序列X
aa1
,X
aa2
,X
aa3
的肽
[0017]其中X
aa1
是疏水性或碱性氨基酸，
[0018]其中X
aa2
是极性、中性或碱性氨基酸，
[0019]其中X
aa3
是极性、中性或碱性氨基酸，
[0020][c]是具有650
‑
900nm吸收波长的非荧光剂，以用于淬灭所述荧光剂的所述发射，
[0021]其中X
aa1
,X
aa2
,X
aa3
代表病毒编码的蛋白酶的切割位点，其中所述切割位点的切割导致从所述肽释放所述非荧光剂，其中所述非荧光剂的释放指示病毒的存在，优选地其中[b]代表基于[a]‑
[b]‑
[c]的总质量，按重量计诊断肽总质量的最多30％。
[0022]在一些司法管辖权内，本专利技术可以被限定为使用式(I)所示的诊断肽进行体外诊断病毒感染的方法：
[0023][a]‑
[b]‑
[c]ꢀꢀ
(I)
[0024]其中：
[0025][a]是具有650
‑
900nm发射波长的荧光剂，
[0026][b]是包含氨基酸序列X
aa1
,X
aa2
,X
aa3
的肽，
[0027]其中X
aa1
是疏水性或碱性氨基酸，
[0028]其中X
aa2
是极性、中性或碱性氨基酸，
[0029]其中X
aa3
是极性、中性或碱性氨基酸，
[0030][c]是具有650
‑
900nm吸收波长的非荧光剂，以用于淬灭所述荧光剂的所述发射，
[0031]其中X
aa1
,X
aa2
,X
aa3
代表病毒编码的蛋白酶的切割位点，其中所述切割位点的切割导致从所述肽释放所述非荧光剂，其中所述非荧光剂的释放指示病毒的存在，优选地其中[b]代表基于[a]‑
[b]‑
[c]的总质量，按重量计诊断肽的总质量的最多50％。
[0032]同样，在一些司法管辖权内，本专利技术可以被限定为诊断肽在体外诊断病毒感染中的用途，其中所述肽由式(I)表示：
[0033][a]‑
[b]‑
[c]ꢀꢀ
(I)
[0034]其中：
[0035][a]是具有650
‑
900nm发射波长的荧光剂，
[0036][b]是包含氨基酸序列X
aa1
,X
aa2
,X
aa3
的肽，
[0037]其中X
aa1
是疏水性或碱性氨基酸，
[0038]其中X
aa2
是极性、中性或碱性氨基酸，
[0039]其中X
aa3
是极性、中性或碱性氨基酸，
[0040][c]是具有650
‑
900nm吸收波长的非荧光剂，以用于淬灭所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于体外诊断对象病毒感染的方法中的用途的诊断肽，所述肽由式(I)表示：[a]
‑
[b]
‑
[c](I)其中：[a]是具有650
‑
900nm发射波长的荧光剂，[b]是包含氨基酸序列X
aa1,
X
aa2,
X
aa3
的肽，其中X
aa1
是疏水性或碱性氨基酸，其中X
aa2
是极性、中性或碱性氨基酸，其中X
aa3
是极性、中性或碱性氨基酸，[c]是具有650
‑
900nm吸收波长的非荧光剂，以用于淬灭所述荧光剂的所述发射，其中X
aa1,
X
aa2,
X
aa3
代表病毒编码的蛋白酶的切割位点，其中所述切割位点的切割导致从所述肽释放所述非荧光剂，其中所述非荧光剂的释放指示存在病毒，优选地其中[b]代表基于[a]
‑
[b]
‑
[c]的总质量，按重量计所述诊断肽的总质量的最多50％。2.如权利要求1所述用途的诊断肽，其由式(Ia)表示：[a]
‑
[连接子1]
‑
[b]
‑
[
‑
连接子2]
‑
[c](Ia)其中所述连接子独立地选自任选取代的烃基和非蛋白水解烃基。3.如权利要求1或2所述用途的诊断肽，其中所述烃基连接子选自：β
‑
丙氨酸基、4
‑
氨基丁酰基、2
‑
(氨基乙氧基)乙酰基、3
‑
(2
‑
氨基乙氧基)丙基、5
‑
氨基戊酰基、6
‑
氨基己基、8
‑
氨基
‑
3,6
‑
二氧杂辛基和12
‑
氨基
‑
4,7,10
‑
三氧杂十二烷基，优选地为6
‑
氨基己基。4.如前述权利要求中任一项所述用途的诊断肽，其中X
aa1
选自：丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、异亮氨酸、异缬氨酸、别异亮氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、精氨酸和赖氨酸，优选地选自：组氨酸、精氨酸和赖氨酸，优选地为组氨酸。5.如前述权利要求中任一项所述用途的诊断肽，其中X
aa2
选自：组氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺，优选地为谷氨酰胺。6.如前述权利要求中任一项所述用途的诊断肽，其中X
aa3
选自：丝氨酸、苏氨酸和甘氨酸，优选地，其中X
aa3
为丝氨酸。7.如前述权利要求中任一项所述用途的诊断肽，其包含选自HQS、RQS或KQS的序列。8.如前述权利要求中任一项所述用途的诊断肽，其中所述感染选自小儿毛细支气管炎、病毒性肺炎、急性呼吸系统综合征(SARS)、COVID
‑
19、猪流行性腹泻病毒、猫传染性腹膜炎、犬冠状病毒感染、犊牛肠炎。9.如前述权利要求中任一项所述用途的诊断肽，其中所述方法包括以下步骤：i)使体液样品与所述诊断肽接触，以及ii)监测650
‑
900nm范围内的荧光。10.用于体外诊断对象病毒感染的方法，所述方...

【专利技术属性】
技术研发人员：马修，
申请(专利权)人：奥里基诺G有限公司，
类型：发明
国别省市：