一种羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法。本发明专利技术提供的方法通过高效液相色谱法，利用色谱柱梯度洗脱有效分离、检测羟氯扎胺原料药中的基因毒性杂质硝化物和还原物含量。基毒杂质还原物的检测范围为1.3100

【技术实现步骤摘要】
一种羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法


[0001]本专利技术涉及的是一种基因毒性杂质检测
，具体是一种羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法。

技术介绍

[0002]基因毒性物质特点是在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生。因其毒性较强，对用药的安全性产生了强烈的威胁，近年来也越来越多的出现因为在已上市药品中发现痕量的基因毒性杂质残留而发生大范围的医疗事故，被FDA强行召回的案例，给药厂造成了巨大的经济损失。近年来各国的法规机构如ICH、FDA、EMA等都对基因毒性杂质有了更明确的要求，越来越多的药企在新药研发过程中就着重关注基因毒性杂质的控制和检测。
[0003]羟氯扎胺(Oxyclozanide)，又名五氯柳胺、羟氯柳胺和羟氯柳苯胺，该药物是一种新型的水杨酰苯胺类药物，主要用于治疗和控制牛羊等动物的吸虫病，此外对蛔虫和绦虫感染也有较好的防治效果。其合成路线如下：
[0004][0005]由于羟氯扎胺原料药的中间体2，4
‑
二氯
‑6‑
硝基苯酚(简称：硝化物)和2
‑
氨基
‑
4，6
‑
二氯苯酚(简称：还原物)均含有基因毒性信号结构硝基化合物、芳胺，具体如下：
[0006][0007]根据药理毒理数据及日服用最大剂量计算得出，基毒杂质控制标准＜1.67ppm，基杂限度值低，检测困难，目前，还没有一种能够同时准确检测羟氯扎胺中硝化物和还原物含量的方法。
[0008]为保证患者用药的安全性，需要对羟氯扎胺中还原物和硝化物进行严控控制和精准的检测，因此，有待开发一种操作简便、分离度好、灵敏度高、检测限低，重复性好、数据准确可靠的羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一种操作简便、分离度好、灵敏度高、检测限低，重复性好、数据准确可靠的羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法，具体技术方案如下：
[0010]一种羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法，通过高效液相色谱法，利用色谱柱梯度洗脱有效分离、检测羟氯扎胺原料药中的基因毒性杂质硝化物和还原物含量。
[0011][0012]其检测条件及参数如下：
[0013]检测波长：200
‑
350nm；
[0014]流速：0.8
‑
1.5ml/min；
[0015]进样量：15
‑
20μL；
[0016]柱温：20
‑
40℃；
[0017]流动相：流动相A为磷酸水溶液，流动相B为甲醇、乙腈中的任一种。
[0018]进一步的，所述检测方法的检测条件及参数如下：
[0019]检测波长：250
‑
300nm；
[0020]流速：1.2
‑
1.5ml/min；
[0021]进样量：15
‑
20μL
[0022]柱温：30
‑
40℃；
[0023]流动相：流动相A为0.1
‑
0.5％磷酸水溶液，流动相B为甲醇。
[0024]检测梯度洗脱梯度程序为：流动相A+流动相B＝100％，0
‑
18min流动相A 保持体积百分比为30
‑
50％；18
‑
19min流动相A的体积百分比由30
‑
50％递减至5
‑
20％；19
‑
43min流动相A保持体积百分比为5
‑
20％；43
‑
44min流动相A的体积百分比由5
‑
20％提升至30
‑
50％；44
‑
60min流动相A的体积百分比保持在 30
‑
50％。
[0025]检测用色谱柱型号为Xterra RPB(5μm
×
4.6
×
250mm)、Eclipse XDB C18 (5μm
×
4.6
×
150mm)、Symmetry C18(5μm
×
4.6
×
250mm)、BDS HYPERSILC18(3μm
×
4.6
×
100mm)、Hypersil ODS(5μm
×
4.6
×
200mm)、InertsilODS
‑
3(5μm
×
4.6
×
250mm)、Luna C18(5μm
×
4.6
×
250mm)、Luna C18 (5μm
×
4.6
×
150mm)、Gemini C18 110A(5μm
×
4.6mm
×
250mm)、ZORBAXSB
‑
C8(5μm
×
4.6
×
150mm)、Xterra RPB(3.5μm
×
4.6
×
100mm)、AthenaC18
‑
WP(3μm
×
2.1
×
100mm)、Xtimate C18(5μm
×
4.6
×
250mm)、KromasilC18(5μm
×
4.6
×
250mm)中的任一种。
[0026]具体的检测方法包括以下步骤：
[0027](1)溶液配制
[0028]供试品溶液(40mg/ml)：精密称取400mg样品于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀；
[0029]对照品溶液1(0.0656μg/ml)：精密称取还原物、硝化物对照品各10.5mg 于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容；精密移取1ml至20ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密移取1ml于20ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密移取5ml至20ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；
[0030]对照品溶液2(0.0656μg/ml)：精密称取还原物、硝化物对照品各10.5mg 于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容；精密移取1ml至20ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密移取1ml于20ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密移取5ml至20ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；
[0031](2)进样操作步骤
[0032]a、按要求设定色谱条件，并用流动相平衡色谱柱至基线平衡；b、进空白溶液：1针；c、进对照品溶液1：1针；d、进对照品溶液2：1针；对照品溶液 2回收率应在80
‑
120％范围内；e、进供试品溶液：1针；f、进空白溶液：1针； g本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，通过高效液相色谱法，利用色谱柱梯度洗脱有效分离、检测羟氯扎胺原料药中的基因毒性杂质硝化物和还原物含量；其检测条件及参数如下：检测波长：200
‑
350nm；流速：0.8
‑
1.5ml/min；进样量：15
‑
20μL；柱温：20
‑
40℃；流动相：流动相A为磷酸水溶液，流动相B为甲醇、乙腈中的任一种。2.根据权利要求1所述的一种羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述检测方法的检测条件及参数优选为：检测波长：250
‑
300nm；流速：1.2
‑
1.5ml/min；进样量：15
‑
20μL柱温：30
‑
40℃；流动相：流动相A为0.1
‑
0.5％磷酸水溶液，流动相B为甲醇。3.根据权利要求1所述的一种羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所用色谱柱型号为Xterra RPB(5μm
×
4.6
×
250mm)、Eclipse XDB C18(5μm
×
4.6
×
150mm)、Symmetry C18(5μm
×
4.6
×
250mm)、BDS HYPERSIL C18(3μm
×
4.6
×
100mm)、Hypersil ODS(5μm
×
4.6
×
200mm)、Inertsil ODS
‑
3(5μm
×
4.6
×
250mm)、Luna C18(5μm
×
4.6
×
250mm)、Luna C18(5μm
×
4.6
×
150mm)、Gemini C18 110A(5μm
×
4.6mm
×
250mm)、ZORBAX SB
‑
C8(5μm
×
4.6
×
150mm)、Xterra RPB(3.5μm
×
4.6
×
100mm)、Athena C18
‑
WP(3μm
×
2.1
×
100mm)、Xtimate C18(5μm
×
4.6
×
250mm)、Kromasil C18(5μm
×
4.6
×
250mm)中的任一种。4.根据权利要求1所述的一种羟氯扎胺基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述的梯度洗脱梯度程序为：流动相A+流动相B＝100％，0
‑
18min流动相A保持体积百分比为30
‑
50％；18
‑
19min流动相A的体积百分比由30
‑
50％递减至5
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅虹，谢鑫，贺彧，许婧，李江峰，许金辉，苏文杰，朱建民，
申请(专利权)人：内蒙古齐晖药业有限公司，
类型：发明
国别省市：