一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法技术

本发明专利技术公开了一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，包括如下步骤：S1、制备猪人工胃液；S2、制备猪人工肠液；S3、选择母猪配合饲料500g，粉碎至30目，充分混合均匀；S4、检测配合饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三个毒素含量；S5、用高效液相色谱仪检测上清液中AFB1含量；S6、用高效液相色谱仪检测上清液中ZEN含量；S7、用高效液相色谱仪检测上清液中DON含量。本发明专利技术提出的霉菌毒素脱毒剂评价方法，考虑了饲料复杂成分、消化酶、胆汁等的干扰，更接近脱毒剂产品在动物体内实际应用场景。本发明专利技术提出的霉菌毒素脱毒剂评价方法，可以帮助技术人员在实验室初步筛选更有价值的产品，不用完全依赖动物实验。验。

【技术实现步骤摘要】
一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法


[0001]本专利技术属于评价饲用霉菌毒素脱毒剂有效性
，更具体地说，尤其涉及一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法。

技术介绍

[0002]霉菌毒素(Mycotoxin)是由各类相应的真菌所分泌的有毒代谢产物，目前发现的霉菌毒素已经超过了800种，其中关注度最高的是黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉毒素等。据世界粮农组织(FAO) 估计，全世界每年超过25％的农作物会受到霉菌毒素的侵害，给人类造成了巨大的经济损失和粮食浪费。由于大多数污染粮食流通到饲料行业，给畜禽养殖带来严重的影响，使养殖效益低下。
[0003]饲料脱毒技术的研究和脱毒剂产品的使用，国外开始相对较早。直至2003 年和2004年，中国饲料厂使用的玉米和其它原料中霉菌毒素含量严重超标，造成畜牧行业频繁的疾病暴发，其后，霉菌毒素的危害和脱毒剂的必要性才开始引起了人们的重视。在过去的十年里，中国的脱毒剂市场需求飙升，国内外脱毒剂产品大量出现。目前，市场上脱毒剂产品鱼龙混杂，超过200种脱毒剂产品，其中包括国内外的著名品牌和中小型兽药企业生产的产品。由于霉菌毒素本身化学结构的复杂性，以及吸附剂产品的多样性，世界各国对饲料脱毒剂类产品的有效性评价方法还没有达成共识，针对此类产品管理的法律、法规和标准还不完善，而脱毒剂产品在饲料养殖市场上呈现快速增长势头，因此造成产品质量良莠不齐，市场竞争无序，行业急需规范。
[0004]目前，饲用脱毒剂产品普遍使用的体外评价方法是在一定pH的缓冲液中加入适量毒素标准品和脱毒剂产品，在适宜的温度孵育一定时间后，离心，然后检测上清液中毒素残留量，根据毒素添加量与残留量相差值，评价脱毒剂对该毒素的去除能力。但实际上，脱毒剂产品发挥作用的场所是动物胃肠道，胃肠道是一个非常复杂的环境，有消化酶、饲料成分等很多其他干扰物质。然而，这个方法是相对简单的反应环境，存在很多不合理的地方，不能真实的反应脱毒剂在动物体内的应用效果。因此，开发一种更加科学、更接近动物体内环境的体外评价方法，有利于在体外更真实的评价霉菌毒素脱毒剂产品的有效性。
[0005]本专利技术的目的在于针对现有脱毒剂体外评价方法的不足，提供一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，更加真实的评价脱毒剂产品的效果。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，其特征在于：包括如下步骤：
[0009]S1、制备猪人工胃液：2g氯化钠，3.2g胃蛋白酶，溶于适量的超纯水中，加入7ml 36.5％HCL，超纯水定容至1000ml，用0.1mol/L NaOH调pH至3.0；
[0010]S2、制备猪人工肠液：将6.8克KH2PO4溶解在500ml水中，0.1mol/LNaOH调pH至6.8，加入10克胰蛋白酶，3克胆汁盐，加水定容至1000ml，用0.1mol/LNaOH和36.5％HCL调节pH为6.8；
[0011]S3、选择母猪配合饲料500g，粉碎至30目，充分混合均匀；
[0012]S4、检测配合饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三个毒素含量，其中黄曲霉毒素B1为AFB1，玉米赤霉烯酮为ZEN，脱氧雪腐镰刀菌烯醇为DON；
[0013]S5、称取2份步骤S3得到的样品，10g/份，各自加入AFB1标准品，将2份样品中AFB1浓度均调整为20ppb，对照组和实验组各1份；
[0014]实验组加入0.01g脱毒剂产品，对照组加入0.01g纯水；
[0015]两组分别加30ml猪人工胃液，置于恒温摇床，38℃，200rpm，孵育2h，再加入45ml猪人工肠液，并调pH至6.5，38℃，200rpm，孵育2h；12000转离心5min，上清液过0.22μm滤膜，用高效液相色谱仪检测上清液中AFB1含量；
[0016]S6、称取2份步骤S3得到的样品，10g/份，各自加入ZEN标准品，将2份样品中ZEN浓度均调整为1000ppb，对照组和实验组各1份；
[0017]实验组加入0.01g脱毒剂产品，对照组加入0.01g纯水；
[0018]两组分别加30ml猪人工胃液，置于恒温摇床，38℃，200rpm，孵育2h，再加入45ml猪人工肠液，并调pH至6.5，38℃，200rpm，孵育2h；12000转离心5min，上清液过0.22μm滤膜，用高效液相色谱仪检测上清液中ZEN含量；
[0019]S7、称取2份步骤S3得到的样品，10g/份，各自加入DON标准品，将2份样品中DON浓度均调整为3000ppb，对照组和实验组各1份；
[0020]实验组加入0.01g脱毒剂产品，对照组加入0.01g纯水；
[0021]两组分别加30ml猪人工胃液，置于恒温摇床，38℃，200rpm，孵育2h，再加入45ml猪人工肠液，并调pH至6.5，38℃，200rpm，孵育2h；12000转离心5min，上清液过0.22μm滤膜，用高效液相色谱仪检测上清液中DON含量。
[0022]所述步骤S4中，检测配合饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三个毒素含量具体方法参照《GB/T36858
‑
2018饲料中黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱法》、《GB/T28716
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2012饲料中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱净化
‑
高效液相色谱法》、《GB/T30956
‑
2014饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化－高效液相色谱法》。
[0023]所述步骤S5中，AFB1去除率＝(对照组上清液AFB1含量
‑
实验组上清液AFB1含量)/对照组上清液AFB1含量。
[0024]所述步骤S6中，ZEN去除率＝(对照组上清液ZEN含量
‑
实验组上清液ZEN含量)/对照组上清液ZEN含量。
[0025]所述步骤S7中，DON去除率＝(对照组上清液DON含量
‑
实验组上清液DON含量)/对照组上清液DON含量。
[0026]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，与传统技术相比，本专利技术提出的霉菌毒素脱毒剂评价方法，考虑了饲料复杂成分、消化酶、胆汁等的干扰，更接近脱毒剂产品在动物体内实际应用场景。
[0027]本本专利技术提出的霉菌毒素脱毒剂评价方法，可以帮助技术人员在实验室初步筛选
更有价值的产品，不用完全依赖动物实验。
具体实施方式
[0028]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、制备猪人工胃液：2g氯化钠，3.2g胃蛋白酶，溶于适量的超纯水中，加入7ml 36.5％HCL，超纯水定容至1000ml，用0.1mol/L NaOH调pH至3.0；S2、制备猪人工肠液：将6.8克KH2PO4溶解在500ml水中，0.1mol/L Na OH调pH至6.8，加入10克胰蛋白酶，3克胆汁盐，加水定容至1000ml，用0.1mol/L NaOH和36.5％HCL调节pH为6.8；S3、选择母猪配合饲料500g，粉碎至30目，充分混合均匀；S4、检测配合饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三个毒素含量，其中黄曲霉毒素B1为AFB1，玉米赤霉烯酮为ZEN，脱氧雪腐镰刀菌烯醇为DON；S5、称取2份步骤S3得到的样品，10g/份，各自加入AFB1标准品，将2份样品中AFB1浓度均调整为20ppb，对照组和实验组各1份；实验组加入0.01g脱毒剂产品，对照组加入0.01g纯水；两组分别加30ml猪人工胃液，置于恒温摇床，38℃，200rpm，孵育2h，再加入45ml猪人工肠液，并调pH至6.5，38℃，200rpm，孵育2h；12000转离心5min，上清液过0.22μm滤膜，用高效液相色谱仪检测上清液中AFB1含量；S6、称取2份步骤S3得到的样品，10g/份，各自加入ZEN标准品，将2份样品中ZEN浓度均调整为1000ppb，对照组和实验组各1份；实验组加入0.01g脱毒剂产品，对照组加入0.01g纯水；两组分别加30ml猪人工胃液，置于恒温摇床，38℃，200rpm，孵育2h，再加入45ml猪人工肠液，并调pH至6.5，38℃，200rpm，孵育2h；12000转离心5min，上清液过0.22μm滤膜，用高效液相色谱仪检测上清液中ZEN含量；S7、称取2份步骤S3得到的样品，10g/...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙育荣，汪成飞，王燕，
申请(专利权)人：江苏奥迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：