一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法，属于中药分析技术领域，包括以下步骤：将清肝止淋汤样品采用特定的前处理方法制备成供试品溶液，利用缺黑豆阴性样品制备缺黑豆阴性样品溶液；利用黑豆对照药材制备黑豆对照药材溶液，缺黑豆阴性样品溶液和黑豆对照药材溶液均为对照样品溶液，将供试品溶液和对照样品溶液点样于同一聚酰胺薄膜上，以二乙胺

【技术实现步骤摘要】
一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法


[0001]本专利技术属于中药分析
，具体涉及一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法。

技术介绍

[0002]清肝止淋汤，中医方剂名。组成为白芍(醋炒)、当归(酒洗)和黑豆各37.30g，地黄(酒炒)18.65g，阿胶(白面炒)、粉丹皮各11.19g，黄柏、牛膝各7.46g，香附(酒炒)3.73g，大枣46g。清肝止淋汤主治妇人血虚火旺，带下色红，似血非血，淋沥不断。
[0003]黑豆为豆科大豆属植物大豆Glycine max(L.)merr.的黑色种子，是著名的药食同源植物。黑豆性味甘，平，归脾、肾经。黑豆有补肾养血、清热解毒、活血化瘀、乌专利技术目、延年益寿功效。服食黑豆，可治疗肾虚腰痛，水肿尿少，痹痛拘挛等。
[0004]薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，常用以进行药品的鉴别、杂质检查，能够实现中药组分的快速分离和定性分析，现有技术中用于黑豆鉴别的方法主要有如下两种：
[0005]公开号为CN109917067A的中国专利文献公开了基于薄层色谱法的黑豆鉴别方法，包括如下步骤：(1)将待检测黑豆粉碎成粉末，加萃取剂萃取后过滤并蒸干得残渣，用溶剂溶解该残渣，得供试品溶液；(2)将作为对照药材的黑豆粉碎成粉末，加萃取剂萃取后过滤并蒸干得残渣，用溶剂溶解该残渣，得药材对照溶液；(3)利用硅胶G薄层板对所述供试品溶液、药材对照溶液进行检测；该专利技术对点样后的硅胶G薄层板先进行预饱和前加热、再置于展开剂的蒸汽中进行预饱和、再置于展开剂中展开，展开后取出晾干，再采用不低于100℃的温度对所述晾干的硅胶G薄层板加热后检视，即可，所述展开剂为甲苯、甲醇、甲酸的混合物。
[0006]中国药典2015年版一部中的黑豆薄层鉴别方法，包括如下步骤：(1)供试品溶液：取本品粉末，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解后得到供试品溶液；(2)对照溶液：取黑豆对照药材，同法制成对照药材溶液；再取大豆苷对照品、大豆苷元对照品，加甲醇分别制成每1mL各含1mg的溶液，作为对照品溶液；(3)鉴别：吸取上述四种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯
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甲醇
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甲酸(11:6:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。
[0007]上述黑豆的薄层色谱鉴别方法均利用硅胶G薄层板，且不能用于组分复杂的中药方剂中黑豆的鉴别。清肝止淋汤的组成复杂，多种多样结构相似的成分分离较为困难，因此，亟待开发一种易于显色、准确度高的适用于清肝止淋汤中黑豆鉴别的薄层色谱分析方法。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法，该方法采用特定的前处理方法辅以聚酰胺薄膜以及展开剂二乙胺
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丙酮
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丁酮
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甲酸协同作用，实现了清肝止淋汤中黑豆的准确鉴别，且该方法易于实施、显色斑点清晰度高、专属性强、阴性无干扰。
[0009]具体采用的技术方案如下：
[0010]一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法，包括以下步骤：
[0011](1)制备供试品溶液
[0012]取清肝止淋汤样品，加乙醇，超声处理后滤过，滤液浓缩；浓缩后的滤液加入聚酰胺拌匀得到混合物；将混合物蒸干后加在聚酰胺柱内，用水洗脱，弃去洗脱液，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水溶解后利用C18固相萃取小柱富集净化，得到净化液，将净化液蒸干，残渣加甲醇溶解后得到供试品溶液；
[0013](2)制备对照样品溶液
[0014]所述的对照样品溶液为阴性样品溶液和阳性样品溶液，阴性样品溶液为缺黑豆阴性样品溶液，阳性样品溶液为黑豆对照药材溶液；
[0015](3)黑豆的鉴别
[0016]将供试品溶液和对照样品溶液点样于同一聚酰胺薄膜上，以二乙胺
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丙酮
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丁酮
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甲酸为展开剂展开，展开后取出晾干，喷以三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置于254nm紫外光灯下检视。
[0017]聚酰胺分子中含有大量酰胺基团，聚酰胺分子中的
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C＝O及
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NH
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能与待测溶液中的组分形成氢键，如酚类(包括黄酮类、鞣质等)和酸类(如核苷酸、氨基酸等)是以其羟基与酰胺键的羰基形成氢键，硝基化合物和醌类等物质与酰胺键的氨基形成氢键，即聚酰胺分子对很多极性物质都有吸附作用，进而与不能形成氢键的化合物分离；聚酰胺和浓缩滤液的混合物作为层析柱填料，分离效果好。
[0018]本专利技术选用聚酰胺薄膜，在薄层色谱分析过程中，待测溶液中的组分与聚酰胺分子之间可以形成氢键，根据不同组分与聚酰胺分子之间形成氢键能力的强弱能够确定吸附能力的差异，再结合特定的展开剂二乙胺
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丙酮
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丁酮
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甲酸，使被分离物质在展开剂与聚酰胺表面之间的分配系数有较大差异，经过吸附与解吸的展层过程，实现了目标组分的分离。
[0019]具体的，步骤(1)中，供试品溶液的制备方法为：取清肝止淋汤样品0.5
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1.5g，加乙醇30mL，超声处理20
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40分钟，滤过，滤液浓缩至1
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2mL，浓缩后的滤液再加入0.8
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1.2g聚酰胺拌匀得到混合物，将混合物蒸干后加在聚酰胺柱(内径1.5cm，4g，80
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100目)内，先用水50mL洗脱，弃去水洗脱液，再用乙醇50mL洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水3mL溶解，并通过C18固相萃取小柱富集净化，得到净化液，将净化液蒸干，残渣加甲醇1
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2mL溶解后得到供试品溶液。
[0020]优选的，步骤(1)中，取清肝止淋汤样品，加乙醇操作过程中，每1g清肝止淋汤样品对应的乙醇的用量为30
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35mL。
[0021]优选的，应用水或乙醇洗脱加入了浓缩滤液聚酰胺拌匀物的聚酰胺柱时，洗脱流速为1～5mL/min。
[0022]利用C18固相萃取小柱富集净化的步骤为：C18固相萃取小柱(1000mg/6mL)用甲醇10mL预洗、水20mL平衡后；再将加水溶解后的残渣通过C18固相萃取小柱，再依次用水、10％甲醇、30％甲醇各5mL洗脱，洗脱流速为3～5mL/min，收集30％甲醇洗脱液作为净化液。
[0023]步骤(2)中，利用缺黑豆阴性样品制备缺黑豆阴性样品溶液，缺黑豆阴性样品为清肝止淋汤方剂原料不添加黑豆制得的样品；利用黑豆对照药材制备黑豆对照药材溶液。
[0024]具体的，缺黑豆阴性样品溶液的制备方法为：取缺黑豆阴性样品0.5～1.5g，并按照上述供试品溶液的制备方法制成缺黑豆阴性样品溶液。
[0025]具体的，黑豆对照药材溶液的制备方法为：取黑豆对照药材0.5～1.5g，加水50mL，煎煮30分钟，离心3分钟，取上清液，浓缩至1～2mL；浓缩后的上清液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备供试品溶液取清肝止淋汤样品，加乙醇，超声处理后滤过，滤液浓缩；浓缩后的滤液加入聚酰胺拌匀得到混合物；将混合物蒸干后加在聚酰胺柱内，用水洗脱，弃去洗脱液，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水溶解后利用C18固相萃取小柱富集净化，得到净化液，将净化液蒸干，残渣加甲醇溶解后得到供试品溶液；(2)制备对照样品溶液所述的对照样品溶液为阴性样品溶液和阳性样品溶液，阴性样品溶液为缺黑豆阴性样品溶液，阳性样品溶液为黑豆对照药材溶液；(3)黑豆的鉴别将供试品溶液和对照样品溶液点样于同一聚酰胺薄膜上，以二乙胺
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丙酮
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丁酮
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甲酸为展开剂展开，展开后取出晾干，喷以三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置于紫外光灯下检视。2.根据权利要求1所述的清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法，其特征在于，步骤(1)中，取清肝止淋汤样品0.5
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1.5g，加乙醇，超声处理20
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40分钟，滤过，滤液浓缩至1
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2mL，浓缩后的滤液再加入0.8
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1.2g聚酰胺拌匀得到混合物；净化液蒸干后的残渣加甲醇1
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2mL溶解后得到供试品溶液。3.根据权利要求1所述的清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法，其特征在于，步骤(1)中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘景萍，刘全国，符丹玉，陈克领，
申请(专利权)人：海南葫芦娃药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：