帕拉米韦注射液杂质C检测方法技术

本发明专利技术提供帕拉米韦注射液杂质C检测方法。帕拉米韦注射液杂质C检测方法所述包括以下步骤：采用高效液相色谱法进行检测，测定条件包括：色谱柱用蛋白质键合硅胶为填充剂，检测波长：203～207nm，柱温：18～22℃，流速：0.2～0.4ml/min。本发明专利技术采用反相手性色谱系统，建立帕拉米韦注射液杂质C的检测方法，并对该方法进行了系统的方法学验证，通过了专属性、线性及范围、准确度试验、重复性试验、中间精密度试验、溶液稳定性试验及耐用性试验等考察，能够较好适用于帕拉米韦注射液杂质C检测，有助于提高帕拉米韦注射液质量控制水平。于提高帕拉米韦注射液质量控制水平。于提高帕拉米韦注射液质量控制水平。

【技术实现步骤摘要】
帕拉米韦注射液杂质C检测方法


[0001]本专利技术涉及帕拉米韦注射液杂质检测领域，特别涉及帕拉米韦注射液杂质C检测方法。

技术介绍

[0002]帕拉米韦(Peramivir)，是一种新型的抗流感病毒药物，现有临床试验数据证明其对甲型和乙型流感有效。
[0003]帕拉米韦原料药合成路线：
[0004][0005]具体合成方法是，起始原料在还原剂硼氢化钠作用下发生开环和还原反应生成中间体Ⅰ；中间体Ⅰ和乙酸酐发生酯化反应生成中间体Ⅱ；中间体Ⅱ在氢氧化钠作用下发生水解反应生成中间体Ⅲ；中间体Ⅲ在盐酸作用下脱保护基生成中间体Ⅳ，不分离的中间体Ⅳ直接和起始原料Ⅱ作用生成帕拉米韦粗品，最终经转晶生成帕拉米韦。其重要剂型为静脉注射液。帕拉米韦注射液杂质C主要来源于原料工艺杂质。各国药典均未收载帕拉米韦注射液质量标准，更无帕拉米韦注射液杂质C检测方法；帕拉米韦原料供应商质量标准中的杂质C检测方法采用正相色谱系统，本品为注射液，在正相色谱系统中溶解性差。而仅有国家食品药品监督管理总局收载帕拉米韦氯化钠注射液(100ml：帕拉米韦C
15
H
28
N4O40.3g与氯化钠0.9g)标准(YBH01412013)也没有记载帕拉米韦注射液杂质C的检测方法。
[0006]杂质C(对应异构体)的化学名称为(1R,2R,3S,4S)
‑3‑
[(1R)
‑1‑
(乙酰氨基)
‑2‑
乙基丁基]‑4‑
胍
‑2‑
羟基环戊烷羧酸三水合物，分子式为C
15
H
28
N4O4·
3H2O，分子量382.45，结构如下：
[0007]
技术实现思路

[0008]鉴于此，本专利技术提出帕拉米韦注射液杂质C检测方法，解决上述技术问题。
[0009]本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0010]帕拉米韦注射液杂质C检测方法，包括以下步骤：采用高效液相色谱法进行检测，测定条件包括：色谱柱：AGP，检测波长：203～207nm，柱温：18～22℃，流速：0.2～0.4ml/min。
[0011]进一步，磷酸盐缓冲液，每1L磷酸盐缓冲液中含4.75～5.25mmol/L磷酸氢二铵和4.75～5.25mmol/L磷酸二氢铵。
[0012]进一步，溶液配制包括：
[0013]杂质C定位溶液：取杂质C，精密称定，加溶剂使溶解并稀释至每1ml中含0.015～0.025mg的溶液；
[0014]供试品溶液：精密量取帕拉米韦注射液，用溶剂稀释至每1ml中含帕拉米韦0.4～0.6mg的溶液，混匀；
[0015]对照溶液：精密量供试品溶液，用溶剂稀释至每1ml中含帕拉米韦0.8～1.2μg的溶液，混匀。
[0016]进一步，所述溶剂为水。
[0017]进一步，测定法：精密量取供试品溶液、对照溶液及空白溶剂，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0018]进一步，所述进样体积为：3～5μl。
[0019]进一步流动相：5mmol/L磷酸氢二铵和5mmol/L磷酸二氢铵缓冲液。
[0020]进一步，所述色谱柱的规格为150mm
×
4.0mm，5μm。
[0021]进一步，检测波长：205nm，柱温：20℃，流速：0.3ml/min，进样体积：4μl。
[0022]进一步，杂质C定位溶液：取杂质C，精密称定，加溶剂使溶解并稀释至每1ml中含0.02mg的溶液；
[0023]供试品溶液：精密量取帕拉米韦注射液，用溶剂稀释至每1ml中含帕拉米韦0.5mg的溶液，混匀；
[0024]对照溶液：精密量供试品溶液，用溶剂稀释至每1ml中含帕拉米韦1μg的溶液，混匀。
[0025]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0026]本专利技术采用反相手性色谱系统，建立帕拉米韦注射液杂质C的检测方法，并对该方法进行了系统的方法学验证，通过了专属性、线性及范围、准确度试验、重复性试验、中间精密度试验、溶液稳定性试验及耐用性试验等考察，能够较好适用于帕拉米韦注射液杂质C检
测，有助于提高帕拉米韦注射液质量控制水平。
附图说明
[0027]图1本专利技术方法验证专属性试验中溶剂HPLC图谱；
[0028]图2本专利技术验证专属性试验中空白辅料HPLC图谱；
[0029]图3本专利技术验证专属性试验中杂质O定位溶液HPLC图谱；
[0030]图4本专利技术验证专属性试验中杂质Q定位溶液HPLC图谱；
[0031]图5本专利技术验证专属性试验中杂质S定位溶液HPLC图谱；
[0032]图6本专利技术验证专属性试验中杂质T定位溶液HPLC图谱；
[0033]图7本专利技术验证专属性试验中加标供试品溶液HPLC图谱；
[0034]图8本专利技术验证专属性试验供试品溶液HPLC图谱；
[0035]图9本专利技术验证专属性试验中对照溶液HPLC图谱；
[0036]图10本专利技术验证专属性试验中加标混合溶液HPLC图谱；
[0037]图11为本专利技术线性试验的帕拉米韦线性图；
[0038]图12为本专利技术线性试验的杂质C线性图。
具体实施方式
[0039]为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。
[0040]本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0041]本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0042]实施例
[0043](一)帕拉米韦注射液杂质C检测方法
[0044]采用高效液相色谱法
[0045]色谱柱：AGP，150mm
×
4.0mm，5μm
[0046]检测波长：205nm
[0047]柱温：20℃
[0048]流速：0.3ml/min
[0049]进样体积：4μl
[0050]流动相：5mmol/L磷酸氢二铵和5mmol/L磷酸二氢铵缓冲液
[0051]溶剂：水
[0052]溶液配制：
[0053]杂质C定位溶液：取杂质C适量，精密称定，加溶剂使溶解并稀释至每1ml中约含0.02mg的溶液。
[0054]供试品溶液：精密量取帕拉米韦注射液1ml，置20ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
[0055]对照溶液：精密量供试品溶液1ml，置20ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置25ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀。
[0056]测定法：精密量取供试品溶液、对照溶液及空白溶剂各4μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0057]限度：按不加校正因子的自身对照法计算，杂质C不得过0.2％。
[0058](二)参照中国药典2020年版四部指导原则，对分析方法进行了完整的方法学验本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.帕拉米韦注射液杂质C检测方法，其特征在于，包括以下步骤：采用高效液相色谱法进行检测，测定条件包括：色谱柱用蛋白质键合硅胶为填充剂，检测波长：203～207nm，柱温：18～22℃，流速：0.2～0.4ml/min。2.根据权利要求1所述的帕拉米韦注射液杂质C检测方法，其特征在于，所述色谱柱的型号为AGP。3.根据权利要求1所述的帕拉米韦注射液杂质C检测方法，其特征在于，流动相：磷酸盐缓冲液，每1L磷酸盐缓冲液中含4.75～5.25mmol/L磷酸氢二铵和4.75～5.25mmol/L磷酸二氢铵。4.根据权利要求1所述的帕拉米韦注射液杂质C检测方法，其特征在于，溶液配制包括：杂质C定位溶液：取杂质C，精密称定，加溶剂使溶解并稀释至每1ml中含0.015～0.025mg的溶液；供试品溶液：精密量取帕拉米韦注射液，用溶剂稀释至每1ml中含帕拉米韦0.4～0.6mg的溶液，混匀；对照溶液：精密量供试品溶液，用溶剂稀释至每1ml中含帕拉米韦0.8～1.2μg的溶液，混匀。5.根据权利要求4所述的帕拉米韦注射液杂质C检测方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘景萍，刘全国，陈克领，符丹玉，
申请(专利权)人：海南葫芦娃药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：