细胞制造技术

提供了效应免疫细胞，其表达特异性结合靶免疫细胞的抗原识别受体的细胞表面受体或受体复合物，该效应免疫细胞是工程化的，使得当效应免疫细胞和靶免疫细胞之间形成突触时，效应免疫细胞杀伤靶免疫细胞的能力大于靶免疫细胞杀伤效应免疫细胞的能力。还提供了此类细胞在治疗癌症、预防同种异体移植物排斥和GVHD的方法中的用途。的方法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞
专利

[0001]本专利技术涉及特异性结合靶免疫细胞的抗原识别受体的效应免疫细胞，尤其涉及控制靶细胞杀伤此类效应免疫细胞的方法。
[0002]专利技术背景
[0003]预防排斥
[0004]在实体器官移植或造血干细胞移植(HSCT)中，受体和供体之间的HLA错配可分别导致器官排斥或移植物抗宿主病(GVHD)。免疫抑制药物可以减轻这些后果，但由于它们对免疫细胞具有广泛的抑制作用，它们会增加机会性感染的风险。
[0005]经由其T细胞受体(TCR)识别错配HLA的同种异体反应性T细胞是排斥和GVHD的主要介导物。CD8+T细胞特异性由克隆型TCR决定，该克隆型TCR可识别MHC I类分子上呈递的短抗原肽。MHC I类分子是非共价异二聚体，其由膜整合的高度多态性α链和非膜附接的非多态性β2微球蛋白(β2m)组成。
[0006]Margalit等人((2002)International Immunology 15:1379
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1387)描述了将TCR配体转化为T细胞激活受体的方法。他们描述了表达β2微球蛋白多肽的T细胞，该多肽包含跨膜结构域和附接到C末端的CD3ζ衍生的胞内域和经由接头附接到N末端的抗原肽。发现此类细胞表达高水平的表面肽I类复合物，并以肽特异性方式对抗体和靶T细胞作出响应。通过在T细胞中表达此类肽
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接头
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β2m
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TM
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CD3ζ多肽，可能特异性靶向识别特定抗原肽的致病性CD8＝T细胞。
[0007]CAR
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T细胞
[0008]传统上，抗原特异性T细胞是通过选择性扩增对靶抗原具有天然特异性的外周血T细胞而产生的。然而，选择和扩增对大多数癌症抗原特异的大量T细胞是困难的，而且通常是不可能的。使用整合载体的基因疗法为这一问题提供了解决方案，因为嵌合抗原受体(CAR)的转基因表达允许通过体外病毒载体转导大量外周血T细胞而产生大量对任何表面抗原特异的T细胞。
[0009]嵌合抗原受体是将单克隆抗体(mAb)的特异性移植到T细胞的效应功能上的蛋白质。它们通常的形式是I型跨膜结构域蛋白，具有抗原识别性氨基末端、间隔物、跨膜结构域，所有这些都与传递T细胞存活和激活信号的复合胞内域连接。
[0010]这些分子的最常见形式是经由间隔物和跨膜结构域与信号传导胞内域融合的衍生自识别靶抗原的单克隆抗体的单链可变片段(scFv)的融合体。此类分子导致T细胞响应于scFv对其靶标的识别而激活。当T细胞表达此类CAR时，它们会识别并杀死表达靶抗原的靶细胞。已经开发了几种针对肿瘤相关抗原的CAR，并且使用此类表达CAR的T细胞的过继转移方法目前正在临床试验中用于治疗各种癌症。
[0011]输注后，CAR T细胞在受体体内植入并在遇到靶标承载细胞后增殖。然后CAR T细胞会持续存在，并且它们的群体会随着时间的推移而缓慢缩小。在临床研究中，CAR T细胞的持久性可以通过血液样本中转基因的实时PCR或血液样本中CAR的流式细胞术来确定，临床研究人员发现持久性和持续响应之间存在相关性。这种相关性在B型急性淋巴母细胞白
血病(ALL)的CD19 CAR治疗中尤为明显。通常在这种情况下，CAR T细胞移植的丧失预示着白血病的复发。
[0012]CAR T细胞可导致细胞介导的免疫应答的激活，其可以引发对CAR T细胞的排斥。这是由于工程化到细胞中的组分的免疫原性，通过非自身蛋白或通过由用于制造受体的自身蛋白和其他工程化组分之间的连接形成的非自身序列。
[0013]CAR是人工蛋白质，通常由靶向结构域、间隔物结构域、跨膜结构域和信号传导结构域构成。靶向结构域通常来源于可以是鼠类的scFv。虽然此类scFv可以是人的或人源化的并且其他组分单独来源于自身蛋白，但它们之间的连接仍然可以是免疫原性的。例如，在scFv中，重链与接头之间以及接头与轻链之间存在连接。然后在scFv和间隔物结构域之间存在连接。如果跨膜结构域与间隔物不连续，则那里有另一个连接。类似地，如果跨膜结构域与胞内域的氨基末端部分不连续，则那里还有一个连接点。最后，大多数胞内域至少有两个组分并且有时更多，并且每个组分之间都有连接。
[0014]此外，CAR T细胞通常经工程化而具有其他组分。这些组分包括自杀基因(例如HSV
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TK酶)。发现这种酶具有高度免疫原性，并在单倍体相合造血干细胞移植的深度免疫抑制背景之外导致CAR T细胞的细胞免疫耗竭。其他免疫原性较低的自杀基因仍可能提供一些免疫原性，因为几乎每一种涉及两个蛋白质之间的融合或异种蛋白质的使用的工程化组分都能够具有免疫原性。
[0015]在许多情况下，CAR T细胞是由自体T细胞产生的。在这种情况下，不会发生同种异体反应(allo
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responses)。在一些情况下，使用来自同种异体供体的T细胞。例如，如果患者已经进行了同种异体造血干细胞移植就会发生这种情况。在这种情况下，收获的T细胞将是同种异体的。否则，由于化疗引起的淋巴细胞减少，患者可能没有足够的T细胞来产生CAR T细胞产品。
[0016]同种异体细胞的排斥可以由于次要错配或主要错配。在同种异体T细胞是人类白细胞抗原(HLA)与受体匹配的情况下会发生次要错配。在这种情况下，由于次要组织相容性抗原发生排斥，这些抗原是个体之间的非HLA差异，导致在HLA上呈递非自身(供体)表位/免疫原性肽。在供体和受体错配或仅部分匹配的情况下，受体内源性T细胞上的T细胞受体(TCR)可以以非特异性方式与错配的HLA相互作用，因此导致排斥。次要和主要形式的同种异体排斥都是由HLA与TCR相互作用引起的。
[0017]WO2019/073248和GB申请号904971.7描述了一种方法，其涉及将表达CAR的细胞上的I类或II类MHC与T细胞上的TCR的结合偶联，以直接或间接诱导表达CAR的细胞中的信号传导。当向受试者施用表达CAR的细胞时，该细胞上的MHC I类或II类通过识别肽/MHC复合物与受试者中存在的任何内源性反应性T细胞相互作用。受试者中的任何此类反应性T细胞都会因表达CAR的细胞激活细胞毒性介导的细胞杀伤而耗竭。
[0018]CAR介导的治疗T细胞恶性肿瘤的方法
[0019]淋巴样恶性肿瘤主要可分为来源于T细胞或B细胞的恶性肿瘤。T细胞恶性肿瘤是一组临床上和生物学上异质性病症，共包括10
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20％的非霍奇金淋巴瘤和20％的急性白血病。最常鉴定的组织学亚型是非特指型外周T细胞淋巴瘤(PTCL
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NOS)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)和间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)。在所有急性淋巴母细胞白血病(ALL)中，约20％是T细胞表型。
[0020]与例如B细胞恶性肿瘤相比，这些疾病通常表现得具有攻击性，预计5年生存率仅为30％。在T细胞淋巴瘤的情况下，它们与高比例的患者出现播散性疾病、不利的国际预后指标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.效应免疫细胞，其表达特异性结合靶免疫细胞的抗原识别受体的细胞表面受体或受体复合物，所述效应免疫细胞是工程化的，使得当所述效应免疫细胞和所述靶免疫细胞之间形成突触时，所述效应免疫细胞杀伤所述靶免疫细胞的能力大于所述靶免疫细胞杀伤所述效应免疫细胞的能力。2.根据权利要求1的效应免疫细胞，其是工程化的以对免疫抑制剂有抗性。3.根据权利要求2的效应免疫细胞，其是工程化的以对一种或多种钙调磷酸酶抑制剂有抗性。4.根据权利要求3的效应免疫细胞，其表达：钙调磷酸酶A，其包含参照如SEQ ID No.65所示的突变T351E和L354A；钙调磷酸酶A，其包含参照如SEQ ID No.65所示的突变V314R和Y341F；或钙调磷酸酶B，其包含参照如SEQ ID No.66所示的突变L124T和K
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125
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LA
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Ins。5.根据权利要求2的效应免疫细胞，其是工程化的以对雷帕霉素有抗性。6.根据权利要求2的效应免疫细胞，其表达显性负性的C末端Src激酶(dnCSK)。7.根据权利要求1的效应免疫细胞，其是工程化的以表达或过表达免疫抑制分子或包含免疫抑制分子的细胞外结构域的融合蛋白。8.根据权利要求7的效应免疫细胞，其中所述免疫抑制分子结合：PD
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1、LAG3、TIM
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3、TIGIT、BTLA、VISTA、CEACAM1
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R、KIR2DL4、B7
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H3或B7
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H4。9.根据权利要求7的效应免疫细胞，其中所述免疫抑制分子选自：PD
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L1、PD
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L2、HVEM、CD155、VSIG
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3、半乳糖凝集素
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9、HLA
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G、CEACAM
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1、LSECTin、FGL1、B7
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H3、B7
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H4。10.根据权利要求7至9中任一项的效应免疫细胞，其是工程化的以表达包含免疫抑制分子的细胞外结构域和膜定位结构域的融合蛋白。11.根据权利要求7至9中任一项的效应免疫细胞，其是工程化的以表达包含免疫抑制分子的细胞外结构域和共刺激胞内域的融合蛋白。12.根据权利要求11的效应免疫细胞，其中所述共刺激胞内域包含选自以下的一个或多个胞内域：CD28、ICOS、CTLA4、41BB、CD27、CD30、OX
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40、TACI、CD2、CD27和GITR。13.根据前述权利要求中任一项的效应免疫细胞，其中所述抗原识别受体是T细胞受体(TCR)或激活杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KAR)。14.根据前述权利要求中任一项的效应免疫细胞，其中所述细胞表面受体是嵌合抗原受体(CAR)并且所述抗原识别受体是T细胞受体(TCR)。15.根据权利要求14的效应免疫细胞，其中所述CAR结合TCRβ恒定区1(TRBC1)或TRBC2。16.根据权利要求1至12中任一项的效应免疫细胞，其中所述细胞表面受体复合物是工程化的MHC I类或MHC II类复合物。17.根据权利要求16的效应免疫细胞，其中所述细胞表面受体复合物包含：与细胞内信号传导结构域连接的MHC I类多肽、MHC II类多肽或β
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2微球蛋白。18.根据权利要求17的效应免疫细胞，其中所述细胞表面受体复合物是工程化的MHC I类复合物，其包含具有以下结构的分子：肽
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L
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B2M
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endo其中：“肽”是结合MHC I类α链的肽结合沟的肽；
“
L”是接头；“B2M”是β
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2微球蛋白；并且“endo”是细胞内信号传...

【专利技术属性】
技术研发人员：S科多巴，M普勒，V巴尔丹，A尼科尔森，
申请(专利权)人：奥托路斯有限公司，
类型：发明
国别省市：