用于跨血脑屏障递送免疫治疗剂以治疗脑癌的方法和组合物技术

本申请涉及增强跨血脑屏障(BBB)的免疫治疗剂的穿透的序列、包含所述序列的组合物、及其用于治疗例如胶质母细胞瘤(GBM)等脑癌的方法。进一步公开了许多鉴定为当插入至腺相关病毒(AAV)的衣壳时增强跨BBB的潜在靶向肽序列。毒(AAV)的衣壳时增强跨BBB的潜在靶向肽序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于跨血脑屏障递送免疫治疗剂以治疗脑癌的方法和组合物
[0001]优先权声明
[0002]本申请要求2020年1月10日提交的美国临时申请序列号62/959,625的权益，前述的全部内容通过引用并入本文。


[0003]本文描述了增强免疫治疗剂跨血脑屏障的穿透的序列、包含所述序列的组合物、及其用于治疗例如胶质母细胞瘤(GBM)等脑癌的方法。

技术介绍

[0004]多形性胶质母细胞瘤(GBM)是成年人中最常见和致命的脑肿瘤，中位总生存期仅为15个月1。在美国，每年约有12,000例新发GBM病例确诊，发病率为每100,000人中3.2例2。尽管在了解GBM的组织学、分子景观(molecular landscape)和肿瘤微环境方面取得了重大进展3‑6，但自2005年以来几乎没有治疗进展。将我们对GBM的丰富知识转化为有效疗法的一个关键障碍是对GBM肿瘤部位的药物递送效率低。静脉内施用是一种方便且广泛适用的给药途径，因为GBM肿瘤具有良好的结构上的血管化(vascularized structurally)7，理论上可以实现良好的肿瘤覆盖。然而，设计跨血脑屏障(BBB)和/或血液
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肿瘤屏障的药物仍然具有挑战性。

技术实现思路

[0005]胶质母细胞瘤是一种极其致命的脑癌，很难使用常规方法治疗。全身给药的癌症基因疗法是用于治疗胶质母细胞瘤的一种新的治疗范式。本文描述了脑穿透性AAV病毒载体，将其工程化用于建立用于胶质母细胞瘤基因疗法的血管内基因递送平台，例如，以全身递送PD
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L1抗体用于胶质母细胞瘤的治疗。
[0006]因此，本文提供用于将免疫治疗剂递送至受试者中的癌症的方法。所述方法包括向受试者施用腺相关病毒(AAV)，所述腺相关病毒(AAV)包含(i)包含氨基酸序列的衣壳蛋白，所述氨基酸序列包含来自序列TVSALFK(SEQ ID NO:8)；TVSALK(SEQ ID NO:4)；KLASVT(SEQ ID NO:83)；或KFLASVT(SEQ ID NO:84)的至少四个连续氨基酸，和(ii)编码免疫治疗剂的转基因，任选地，其中癌症细胞在人类受试者的脑中。
[0007]在一些实施方案中，氨基酸序列包含来自序列TVSALK(SEQ ID NO:4)；TVSALFK(SEQ ID NO:8)；KLASVT(SEQ ID NO:83)；或KFLASVT(SEQ ID NO:84)的至少五个连续氨基酸。
[0008]在一些实施方案中，氨基酸序列包含来自序列TVSALK(SEQ ID NO:4)；TVSALFK(SEQ ID NO:8)；KLASVT(SEQ ID NO:83)；或KFLASVT(SEQ ID NO:84)的至少六个连续氨基酸。
[0009]本文还提供用于将免疫治疗剂递送至受试者中的癌症的方法。所述方法包括向受试者施用腺相关病毒(AAV)，所述腺相关病毒(AAV)包含(i)包含氨基酸序列的衣壳蛋白，所
述氨基酸序列包含来自序列V[S/p][A/m/t/]L(SEQ ID NO:79)、TV[S/p][A/m/t/]L(SEQ ID NO:80)、TV[S/p][A/m/t/]LK(SEQ ID NO:81)或TV[S/p][A/m/t/]LFK(SEQ ID NO:82)的至少四个连续氨基酸，和(ii)编码免疫治疗剂的转基因，任选地，其中癌症细胞在人类受试者的脑中。
[0010]在一些实施方案中，靶向序列包含VPALR(SEQ ID NO:1)；VSALK(SEQ ID NO:2)；TVPALR(SEQ ID NO:3)；TVSALK(SEQ ID NO:4)；TVPMLK(SEQ ID NO:12)；TVPTLK(SEQ ID NO:13)；FTVSALK(SEQ ID NO:5)；LTVSALK(SEQ ID NO:6)；TVSALFK(SEQ ID NO:8)；TVPALFR(SEQ ID NO:9)；TVPMLFK(SEQ ID NO:10)或TVPTLFK(SEQ ID NO:11)。
[0011]在一些实施方案中，所述编码免疫治疗剂的转基因编码靶向PD
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1或PD
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L1的抗体。
[0012]在一些实施方案中，所述受试者是哺乳动物受试者。
[0013]在一些实施方案中，所述AAV是AAV9。
[0014]在一些实施方案中，所述AAV9包括AAV9 VP1。
[0015]在一些实施方案中，所述靶向序列插入在对应于包含SEQ ID NO：85的AAV9 VP1的氨基酸588和589的位置。
[0016]在一些实施方案中，所述细胞在受试者的脑中，并且所述AAV通过肠胃外；脑内；或鞘内递送来施用。
[0017]在一些实施方案中，所述肠胃外递送是经由静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、或肌内递送。
[0018]在一些实施方案中，所述鞘内递送是经由腰椎注射、小脑延髓池注射、或脑实质内注射。
[0019]在一些实施方案中，所述方法进一步包括向受试者施用化学疗法、放射、和/或手术切除。
[0020]在一些实施方案中，所述化学疗法包含替莫唑胺(temozolamide)、洛莫司汀(lomustine)、或其组合。
[0021]除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本文描述了用于本专利技术的方法和材料；也可以使用本领域已知的其它的合适的方法和材料。材料、方法和实例仅是说明性的，而不旨在进行限制。本文中提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目、和其它参考文献均通过引用以其整体并入本文。在有冲突的情况下，本说明书包括定义将占主导。
[0022]本专利技术的其它特征和优点将从以下详细描述和附图以及权利要求中显而易见。
附图说明
[0023]图1A
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1C描述通过将细胞穿透肽(CPP)插入AAV9的衣壳来工程化AAV9的示例性策略。图1A是AAV9病毒的3D模型。插入在衣壳中氨基酸588和589(VP1编号)之间的个体CPP显示在3倍轴上，在该轴上可能发生受体结合。图1B说明个体AAV的生产方法。将包括pRC(工程化或非工程化的)、pHelper和pAAV的三种质粒共转染至HEK 293T细胞中，并使用碘克沙醇梯度收获和纯化AAV。图1C是包含编码抗PDL1抗体的序列的示例性载体的质粒图。
[0024]图2A
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2B描述在静脉内施用低剂量候选AAV后小鼠脑切片的代表性图像(图2A)及其定量分析(图2B)。使用具有混合遗传背景的小鼠。候选AAV的不同之处在于它们的插入的
CPP(参见表3)，但都表达核红色荧光蛋白(RFP)作为报告蛋白(reporter)。具有低产量的候选AAV被排除在进一步筛选之外。AAV的剂量为每个动物1
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vg(病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种将免疫治疗剂递送至受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用腺相关病毒(AAV)，所述腺相关病毒(AAV)包含(i)包含氨基酸序列的衣壳蛋白，所述氨基酸序列包含来自序列TVSALFK(SEQ ID NO:8)；TVSALK(SEQ ID NO:4)；KLASVT(SEQ ID NO:83)；或KFLASVT(SEQ ID NO:84)的至少四个连续氨基酸，和(ii)编码免疫治疗剂的转基因，任选地，其中癌症细胞在人类受试者的脑中。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述氨基酸序列包含来自序列TVSALK(SEQ ID NO:4)；TVSALFK(SEQ ID NO:8)；KLASVT(SEQ ID NO:83)；或KFLASVT(SEQ ID NO:84)的至少五个连续氨基酸。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述氨基酸序列包含来自序列TVSALK(SEQ ID NO:4)；TVSALFK(SEQ ID NO:8)；KLASVT(SEQ ID NO:83)；或KFLASVT(SEQ ID NO:84)的至少六个连续氨基酸。4.一种将免疫治疗剂递送至受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用腺相关病毒(AAV)，所述腺相关病毒(AAV)包含(i)包含氨基酸序列的衣壳蛋白，所述氨基酸序列包含来自序列V[S/p][A/m/t/]L(SEQ ID NO:79)、TV[S/p][A/m/t/]L(SEQ ID NO:80)、TV[S/p][A/m/t/]LK(SEQ ID NO:81)或TV[S/p][A/m/t/]LFK(SEQ ID NO:82)的至少四个连续氨基酸，和(ii)编码免疫治疗剂的转基因，任选地，其中癌症细胞在人类受试者的脑中。5.根据权利要求4所述的方法，其中靶向序列包括VPAL...

【专利技术属性】
技术研发人员：贝锋锋，E，
申请(专利权)人：布里格姆妇女医院，
类型：发明
国别省市：