工程化免疫细胞制造技术

本发明专利技术涉及能够进行抗体依赖性细胞毒性的免疫细胞，其包括编码分泌的抗原结合蛋白的核酸序列。本发明专利技术还涉及产生免疫细胞的方法和免疫细胞的医学用途。免疫细胞的医学用途。免疫细胞的医学用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化免疫细胞


[0001]本专利技术涉及能够进行抗体依赖性细胞毒性的免疫细胞，其包括编码抗原结合分子的核酸序列。本专利技术还涉及产生免疫细胞的方法和免疫细胞的医学用途。

技术介绍

[0002]表达嵌合抗原受体(CAR)的αβ(ab)T细胞形成免疫治疗工具包的重要部分。通过在abT细胞中表达CAR，可以改变abT细胞的抗原特异性。以这种方式，受试者的适应性免疫系统可以被重编程以靶向受试者中特别感兴趣的抗原，如肿瘤抗原。
[0003]最近，已经开发了改善CAR abT细胞的治疗潜力的策略。特别地，已经产生了“装甲的”CAR abT细胞。装甲的CAR abT细胞被赋予分泌功能增强分子的能力。CARabT细胞可以，例如，分泌增强其治疗效果的细胞因子。CARabT细胞可以分泌抑制蛋白激酶A的肽(Newick etal.,Cancer Immunol Res,June 2016,4(6):541
–
551).CAR abT细胞还可以分泌克服免疫检查点的分子。例如，Rafiq et al.(Nature Biotechnology,13Aug 2018,36(9):847
–
856)为CAR abT细胞配备了分泌抗PDL1抗体的能力，以及Li et al.(Clinical Cancer Research,November 2017,23(22):6982
–
6992)改造CARabT细胞以在效应细胞表面分泌针对PD
‑
1特异性的scFv。
[0004]与abT细胞相反，γδ(gd)T细胞是相对被忽视的先天样免疫细胞亚群。与abT细胞不同，gdT细胞(特别是Vδ2+gdT细胞)能够对抗体标记的肿瘤细胞产生有效的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。因此，gdT细胞浸润到肿瘤中与有利的临床结果相关，并且gdT细胞在癌症免疫疗法中具有潜力。骨髓细胞也能够ADCC，并可用于癌症免疫治疗。为了优化它们的治疗潜力，需要改造gdT细胞和骨髓细胞以分泌增强它们抗癌作用的分子。

技术实现思路

[0005]本专利技术人已经证明，能够ADCC的免疫细胞可被工程化以分泌靶向在肿瘤微环境中表达的抗原的抗原结合分子(例如抗体或抗体样蛋白，诸如scFv
‑
Fc)。抗原结合分子的分泌可以增强免疫细胞的抗癌效果。例如，分泌的抗原结合分子可以增加靶细胞杀伤，例如通过ADCC。该示例性机制示于图1中，其中由工程化免疫细胞(例如gdT细胞)分泌的scFv
‑
Fc标记表达ADCC的同源抗原的靶细胞。这允许工程化免疫细胞通过ADCC杀伤靶细胞。旁观者的非工程化免疫细胞也可对靶细胞施加ADCC。以这种方式，工程化的和旁观者免疫细胞的抗原特异性细胞毒性得到改善。因此，向受试者施用工程化的免疫细胞提供了改善的抗癌疗法。
[0006]因此，本专利技术提供：
[0007]–
能够ADCC的免疫细胞，所述免疫细胞包括编码抗原结合分子的核酸序列，所述抗原结合分子包括抗原结合区；
[0008]–
产生本专利技术的免疫细胞的方法，其包括将编码抗原结合分子的核酸序列引入免疫细胞；
[0009]治疗个体中的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效数量的本专利技术
的免疫细胞；以及
[0010]–
本专利技术的免疫细胞，其用于治疗个体中的疾病的方法中，所述方法包括向所述个体施用治疗有效数量的所述免疫细胞。
附图说明
[0011]图1——提出的机制的实施例，其中在肿瘤微环境中由γδT细胞分泌的scFv
‑
Fcs接合ADCC感受态细胞上的Fc受体。
[0012]图2——使用流式细胞术检测scFv
‑
Fc与表达靶抗原的细胞的结合。CEA
+
CAPAN
‑
1或CEA
‑
HELA细胞与来自分泌抗CEAscFv
‑
Fc融合蛋白的Vδ2细胞或Jurkat细胞的上清液一起孵育。使用抗人Fc检测scFv
‑
Fc融合蛋白的结合。纯化的scFv融合蛋白用作阳性对照。使用GD2
+/
‑
SupT1细胞和来自分泌抗GD2 scFv
‑
Fc融合蛋白的Vδ2细胞的上清液进行类似的实验。在这种情况下，使用临床级达妥昔单抗(抗GD2)作为阳性对照。
[0013]图3——显示细胞毒性测定中所用条件的实验设置，以测试scFv
‑
Fc融合蛋白表达的直接和间接细胞毒性益处。
[0014]图4——细胞接触依赖性和非依赖性设置中的细胞毒性。
[0015]所有细胞毒性实验在效应子∶靶标比例为1∶1进行，使用18小时共培养。用CellTrace Violet
TM
标记靶细胞，并通过用GhostRed可固定活力染料染色检测靶细胞的死亡。靶细胞的死亡以从所有值中减去背景死亡(无效应子存在)来显示。
[0016]A)分泌抗CEAscFv
‑
Fc的Vδ2细胞或未转导的Vδ2细胞杀伤CEA
+
CAPAN
‑
1或CEA
‑
HELA细胞。
[0017]B)在存在或不存在来自分泌抗CEA
‑
scFv
‑
Fc的Vδ2细胞的上清液的情况下，未转导的Vδ2细胞杀伤CEA
+
CAPAN
‑
1或CEA
‑
HELA细胞。
[0018]C)未转导的Vδ2细胞杀伤CEA
+
CAPAN
‑
1或CEA
‑
HELA细胞，其中将分泌抗CEA scFv
‑
Fc的Vδ2细胞或未转导的对照隔离在半透膜之后。
[0019]D)分泌抗GD2 scFv
‑
Fc的或未转导的Vδ2细胞杀伤GD2
+
SupT1或GD2
‑
野生型SupT1细胞。
[0020]E)在存在或不存在来自分泌抗GD2
‑
scFv
‑
Fc的Vδ2细胞的上清液的情况下，未转导的Vδ2细胞杀伤GD2
+
SupT1或GD2
‑
野生型SupT1细胞。
[0021]F)未转导的Vδ2细胞杀伤GD2
+
SupT1或GD2
‑
野生型SupT1细胞，其中将分泌抗GD2 scFv
‑
Fc的Vδ2细胞或未转导的对照隔离在半透膜之后。
[0022]图5——CEA
+
CAPAN
‑
1或CEA
‑
HELA细胞与未转导的Vδ2细胞共培养18小时后上清液中IFNγ的浓度，其中将分泌抗CEAscFv
‑
Fc的Vδ2细胞或未转导的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫细胞，其能够进行抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，并且包括编码抗原结合分子的核酸序列，所述抗原结合分子包括抗原结合区。2.如权利要求1所述的免疫细胞，其中所述抗原结合区包括scFv、Fab、修饰的Fab、Fab
′
、修饰的Fab
′
、F(ab
′
)2、Fv、dAb、Fd、dsFv、ds
‑
scFv、scFv2、双特异性T细胞衔接物、纳米抗体、DARPin、抗体模拟物、10双抗体、三抗体、四抗体、或针对在所述免疫细胞靶向的细胞表面上表达的受体的多肽配体。3.如权利要求1或2所述的免疫细胞，其中所述抗原结合分子能够结合Fc受体。4.如前述权利要求任一所述的免疫细胞，其中所述抗原结合分子包括Fc区或修饰的Fc区。5.如前述权利要求任一所述的免疫细胞，其中所述抗原结合分子是抗体、scFv
‑
Fc、dAb
‑
Fc、重链抗体、IgNAR或骆驼科动物抗体。6.如前述权利要求任一所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞不是αβT细胞。7.如前述权利要求任一所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞是γδT细胞或NK细胞。8.如权利要求7所述的免疫细胞，其中所述γδT细胞是Vδ1+γδT细胞、Vδ2+γδT细胞或Vδ1
‑
/Vδ2
‑
γδT细胞。9.如权利要求8所述的免疫细胞，其中所述γδT细胞是Vδ2+γδT细胞。10.如权利要求1至6任一所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞是骨髓细胞。11.如权利要求10所述的免疫细胞，其中所述骨髓细胞是巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、或嗜中性粒细胞。12.如前述权利要求任一所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞不表达嵌合抗原受体(CAR)。13.如前述权利要求任一所述的免疫细胞，其中所述抗原结合区能够结合至在所述肿瘤微环境中表达的抗原。14.如前述权利要求任一所述的免疫细胞，其中所述抗原结合区能够结合肿瘤抗原、内皮抗原或免疫细胞抗原。15.如前述权利要求任一所述的免疫细胞，其中，所述抗原结合区能够结合抗原，所述抗原选自由CEA、B7
‑
H3、TSHR、CD3、CD16、CD32、CD64、CD19、CD123、CD22、CD20、CD30、CD171、CS
‑
1、CLL
‑
1、CD33、EGFRvIII、GD2、GD3、BCMA、Tn Ag、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD38、CD44v6、EPCAM、KIT、IL
‑
13Ra2、间皮素、IL
‑
llRa、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、CD24、PDGFR
‑
β、SSEA
‑
4、CD20、叶酸受体α、ERBB2(Her2/neu)、MUC1、EGFR、NCAM、前列腺酶、PAP、ELF2M、Ephrin B2、IGF
‑
I受体、CAIX、LMP2、gp100、bcr
‑
abl、酪氨酸酶、EphA2、岩藻糖基GMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、O
‑
乙酰基
‑
GD2、叶酸受体β、TEM1/CD248、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD179a、ALK、聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY
‑
BR
‑
1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、L...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔纳森，
申请(专利权)人：UCL商业有限公司，
类型：发明
国别省市：