一种分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法，通过采用分析纯级甲醇溶液浸提，强力涡旋振荡，低温浸提，离心等操作步骤，将分蘖洋葱根际土壤中的大蒜素进行提取后，采用高效液相色谱仪进行检测，所述检测方法解决了对分蘖洋葱根际土壤中大蒜素的检测方法空缺，传统前处理方法对分蘖洋葱根际土壤大蒜素的提取不彻底，检测不准确的技术问题，具有分蘖洋葱根际土壤大蒜素提取效果佳，提取效率高、操作简便、检测快速、灵敏准确的有益效果，为分蘖洋葱轮作、间作和套作栽培模式推广与应用提供强有力的技术支持。用提供强有力的技术支持。用提供强有力的技术支持。

【技术实现步骤摘要】
一种分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法


[0001]本专利技术属于检测
，尤其涉及一种分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法。

技术介绍

[0002]分蘖洋葱俗称毛葱或珠葱，为百合科葱属草本植物，可以有效杀灭某些有害病菌，减少相关病害的发生，因此常被用于与其他作物轮作、间作和套作。分蘖洋葱适合与黄瓜、番茄等蔬菜间作、套作，提高复种指数，减少农药使用，有利于发展绿色农业。例如，套作分蘖洋葱可显著增加黄瓜根际土壤速效养分含量，提高多酚氧化酶、脲酶活性，显著提高土壤微生物多样性，有效改善土壤微生态环境，使黄瓜亩产增加51％。分蘖洋葱与黄瓜套作可降低黄瓜枯萎病发病率，并提高黄瓜单株产量，这与分蘖洋葱释放到土壤中的大蒜素密不可分。
[0003]大蒜素主要包括二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚及少量的二烯丙基一硫醚、二烯丙基四硫醚和阿霍烯等烯丙基有机硫化物。分蘖洋葱能提高其他作物的产量，与其根际散发的大蒜素紧密相关，不同浓度的大蒜素对其他作物的协同作用不同，因此有必要对分蘖洋葱根际土壤中的大蒜素含量进行检测。目前大蒜素常规检测方法有NY/T 1497
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2007、NY/T 1800
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2009和NY/T 2643
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2014，这些检测方法在检测前都需要先对样品进行前处理，从中提取出大蒜素，常用的前处理方法包括使用丙酮溶解、乙醇提取、正己烷萃取、水溶解等手段，如公开号为CN106596783A中提到的将大蒜素片与N,N
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二甲基甲酰胺混合溶解，但这些处理方法对分蘖洋葱根际土壤中的大蒜素的提取效果均不好，影响后续含量检测的准确性。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法，用于解决目前现有的样品前处理方法对分蘖洋葱根际土壤中大蒜素的提取不彻底，从而影响对分蘖洋葱根际土壤中的大蒜素含量检测不准确的技术问题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法，包括以下步骤，步骤一，取分蘖洋葱根际土壤，加入分析纯级甲醇溶液进行浸提，得到第一固液混合物；步骤二，将所述第一固液混合物进行强力涡旋振荡，得到第二固液混合物；步骤三，将所述第二固液混合物放置于恒温箱内继续浸提，得到第三固液混合物；步骤四，将所述第三固液混合物进行离心后取上清液，将所述上清液进行有机滤膜过滤，得到待测液；步骤五，配制大蒜素标准溶液，将所述待测液进行高效液相色谱检测。
[0006]作为优选，所述分蘖洋葱根际土壤与所述纯甲醇溶液的料液比为1g:1mL。
[0007]作为优选，所述恒温箱设置温度为4℃。
[0008]作为优选，放置于所述恒温箱内的时间为12～48小时。
[0009]作为优选，所述高效液相色谱检测采用的流动相为乙腈水溶液。
[0010]作为优选，所述乙腈水溶液的体积比为V(乙腈)：V(水)＝75:25。
[0011]作为优选，所述高效液相色谱检测波长为215nm，色谱柱温度为30℃～35℃。
[0012]在某一具体实施例中，所述高效液相色谱检测波长为215nm，色谱柱温度为35℃。
[0013]作为优选，所述流动相流速为1mL/min。
[0014]作为优选，所述高效液相色谱检测的进样量为10～30μl，保留时间为10～15min。
[0015]在某一具体实施例中，所述高效液相色谱检测的进样量为30μl，保留时间为15min。
[0016]作为优选，所述有机滤膜的孔径为0.22微米。
[0017]作为优选，所述强力涡旋振荡的转速为2000～3200rpm。
[0018]与现有技术相比，本专利技术获得的有益效果是：
[0019]通过采用分析纯级甲醇溶液浸提，强力涡旋振荡，低温浸提，离心等操作步骤，将分蘖洋葱根际土壤中的大蒜素进行提取后，采用高效液相色谱仪进行检测，所述检测方法解决了对分蘖洋葱根际土壤中大蒜素的检测方法空缺，传统前处理方法对分蘖洋葱根际土壤大蒜素的提取不彻底，检测不准确的技术问题，具有分蘖洋葱根际土壤大蒜素提取效果佳，提取效率高、操作简便、检测快速、灵敏准确的有益效果，为分蘖洋葱轮作、间作和套作栽培模式推广与应用提供强有力的技术支持。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0021]图1示本专利技术实施例中大蒜素标准溶液高效液相色谱法的色谱图。
[0022]图2示本专利技术实施例中大蒜素二烯丙基二硫化物的标准曲线
[0023]图3示本专利技术实施例中大蒜素二烯丙基三硫化物的标准曲线
[0024]图4示本专利技术实施例中分蘖洋葱根际土壤中的大蒜素高效液相色谱检测
[0025]图5示本专利技术实施例中不同品种分蘖洋葱在单作套作栽培模式下根际土壤二烯丙基二硫化物的含量
具体实施方式
[0026]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备，均可以通过商业渠道购买获得。其中，检测仪器包括Waters1525 Binary HPLC(Waters1525 Binary HPLC Pump，Waters 2707 Auto sampler，Waters 2489 UV/Visible Detector)、强力涡旋振荡器、恒温箱、色谱柱为Venusil XBP C
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(A)(4.6*250mm；5um；120A)，所需试剂包括大蒜素(纯度≥98％)，来源于上海叶源生物，甲醇(色谱级)及乙腈(色谱级)均来源于国药集团化学试剂有限公司。
[0028]选用采收于吉林省通化市的分蘖洋葱一号及黑龙江省哈尔滨市的分蘖洋葱二号及津优1号的黄瓜品种进行套作和单作的栽培模式，得到分蘖洋葱根系土壤，具体操作如下：选取大小均匀、个头适中的所述分蘖洋葱一号和所述分蘖洋葱二号的鳞茎做种；所述黄
瓜种子经1％次氯酸钠消毒后按常规方式进行浸种、催芽及播种，当所述黄瓜种子子叶完全展开时于苗盘中分苗并缓苗；将所述分蘖洋葱一号和所述分蘖洋葱二号与所述黄瓜套作，一株所述黄瓜苗套种一个分蘖洋葱，每苗盘装2Kg土，所述苗盘尺寸为54cm
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27cm
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6cm，所述苗盘中共栽8株苗(4株
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2株)，株行距7cm
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8cm。栽培模式包括所述分蘖洋葱一号单作、所述分蘖洋葱一号与所述黄瓜套作、所述分蘖洋葱二号单作、所述分蘖洋葱二号与所述黄瓜套作。每种栽培模式设3组重复，各组内所有苗盘完全随机排列，苗盘置于温室中培养，所述温室温度保持在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤，步骤一，取分蘖洋葱根际土壤，加入分析纯级甲醇溶液进行浸提，得到第一固液混合物；步骤二，将所述第一固液混合物进行强力涡旋振荡，得到第二固液混合物；步骤三，将所述第二固液混合物放置于恒温箱内继续浸提，得到第三固液混合物；步骤四，将所述第三固液混合物进行离心后取上清液，将所述上清液进行有机滤膜过滤，得到待测液；步骤五，配制大蒜素标准溶液，将所述待测液进行高效液相色谱检测。2.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法，其特征在于，所述分蘖洋葱根际土壤与所述纯甲醇溶液的料液比为1g:1mL。3.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法，其特征在于，所述恒温箱设置温度为4℃。4.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法，其特征在于，放置于所述恒温箱内的时间为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨阳，何师国，付业淞，范文星，甘秩丽，丁琳，朱博，
申请(专利权)人：赣南师范大学，
类型：发明
国别省市：