抗CD2v蛋白单克隆抗体及其应用制造技术

抗CD2v蛋白单克隆抗体及其应用。本发明专利技术公开了抗CD2v蛋白单克隆抗体，所述抗体选自7B1或11H7抗体：所述7B1或11H7抗体分别包括重链可变区CDR1

【技术实现步骤摘要】
ID NO.1中第1
‑
30、36
‑
49、67
‑
98、104
‑
114位氨基酸序列所示；所述轻链可变区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3中第1
‑
23、40
‑
54、62
‑
93、103
‑
112位氨基酸序列所示；
[0010]所述11H7抗体还包括重链可变区FR1、FR2、FR3和FR4框架区和轻链可变区FR1、FR2、FR3和FR4框架区；所述重链可变区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5中第1
‑
30、37
‑
50、67
‑
98、105
‑
115位氨基酸序列所示；所述轻链可变区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7中第1
‑
23、34
‑
48、56
‑
87、97
‑
106位氨基酸序列所示。
[0011]进一步地，所述7B1抗体的重链可变区具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述7B1抗体的轻链可变区具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；
[0012]所述11H7抗体的重链可变区具有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，所述11H7抗体的轻链可变区具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。
[0013]进一步地，所述单克隆抗体还包含抗体重链恒定区和/或抗体轻链恒定区。
[0014]本专利技术第二方面提供了一种核酸分子，包含编码上述任一项所述的单克隆抗体。
[0015]进一步地，编码7B1抗体重链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；编码7B1抗体轻链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；
[0016]进一步地，编码11H7抗体重链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；编码11H7抗体轻链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列。
[0017]本专利技术第三方面提供了一种表达载体，包含上述的核酸分子。
[0018]进一步地，所述表达载体还包含与单克隆抗体轻链或重链相连的信号肽。
[0019]进一步地，与7B1抗体重链相连的信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，优选地，编码其重链相连的信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；与7B1抗体轻链相连的信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，优选地，编码其轻链相连的信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
[0020]与11H7抗体重链相连的信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示，优选地，编码其重链相连的信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；与11H7抗体轻链相连的信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，优选地，编码其轻链相连的信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示。
[0021]本专利技术第四方面提供了一种细胞，包含上述的表达载体。
[0022]本专利技术第五方面提供了一种药物组合物，包含上述任一项所述的单克隆抗体。
[0023]本专利技术第六方面提供了一种产品，包含上述任一项所述的单克隆抗体；或包含上述任一项所述的核酸分子。
[0024]进一步地，所述产品包括(但不限于)利用酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析法、免疫印迹、免疫荧光检测法、发光免疫测定法检测抗原抗体结合的产品。
[0025]进一步地，所述产品包括试剂、试纸、试剂盒或药物。
[0026]进一步地，所述试剂盒包括：胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、酶联免疫试剂盒(ELISA)和免疫荧光试剂盒。
[0027]本专利技术第七方面提供了如下任一项中的用途：
[0028](1)所述的单克隆抗体在制备检测CD2v蛋白的试剂中的用途；
[0029](2)所述的单克隆抗体在制备检测或诊断非洲猪瘟病毒的试剂盒中的用途；优选
的，所述试剂盒包括非洲猪瘟病毒抗体酶联免疫试剂盒；
[0030](3)所述的单克隆抗体在非诊断治疗目的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的分离纯化或检测的用途；
[0031](4)所述的单克隆抗体在非诊断治疗目的非洲猪瘟病毒抗体的分离纯化或检测的用途；
[0032](5)所述的单克隆抗体或所述的核酸分子或所述的表达载体或所述的细胞或所述的产品或所述的药物组合物在制备预防和/或治疗非洲猪瘟病毒的药物中的用途。
[0033]基于上述技术方案，本专利技术具有以下有益效果：
[0034]本专利技术首次发现2株新的单克隆抗体均能与CD2v特异结合，亲和力达到10nM级别。进一步实验发现，本专利技术的单克隆抗体识别单一位点、特异性更强，可用于非洲猪瘟病毒的检测和治疗。
附图说明
[0035]图1为SDS
‑
PAGE检测真核表达CD2V
‑
N蛋白纯度实验结果，图1A糖基化修CD2v蛋白，图1B非糖基化CD2v蛋白。
[0036]图2为ELISA检测单克隆抗体与CD2v
‑
N的结合特性的实验结果。
[0037]图3为分子互作系统检测单克隆抗体与CD2v
‑
N抗原亲和力的实验结果。
[0038]图4为Western Blot检测单克隆抗体与293T细胞表达的全长CD2v
‑
HA蛋白结合情况的实验结果。
[0039]图5为间接免疫荧光实验检测单克隆抗体与293T细胞表达的CD2v
‑
GFP蛋白结合情况的实验结果。
具体实施方式
[0040]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0041]下述实施例所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0042]下述实施例中所有的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0043]实施例1CD2v
‑
N融合蛋白真核表达与纯化
[0044]1、CD2v
‑
N蛋白表达载体的构建
[0045]根据GenBank:QGM12912.2 CD2v蛋白序列，将信号肽、CD2v蛋白胞外区序列(氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示)以及6
×
His标签克隆pCDNA3.1真核表达载体中，构建真核重组表达pCDNA3.1
‑
CD2v
‑
N
‑
His，简称pCD2v
‑
N
‑
His载体。将293T细胞置于Opti
‑
MEM完全培养基中，37℃培养2h，将pCD2v...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗CD2v蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述抗体选自7B1或11H7抗体：所述7B1抗体包含重链可变区CDR1、CDR2、CDR3和轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3；所述重链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1中第31
‑
35、50
‑
66、99
‑
103位氨基酸序列所示；所述轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3中第24
‑
39、55
‑
61、94
‑
102位氨基酸序列所示；所述11H7抗体包含重链可变区CDR1、CDR2、CDR3和轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3；所述重链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5中第31
‑
36、51
‑
66、99
‑
104位氨基酸序列所示；所述轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7中第24
‑
33、49
‑
55、88
‑
96位氨基酸序列所示。2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述7B1抗体还包括重链可变区FR1、FR2、FR3和FR4框架区和轻链可变区FR1、FR2、FR3和FR4框架区；所述重链可变区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1中第1
‑
30、36
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49、67
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98、104
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114位氨基酸序列所示；所述轻链可变区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3中第1
‑
23、40
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54、62
‑
93、103
‑
112位氨基酸序列所示；所述11H7抗体还包括重链可变区FR1、FR2、FR3和FR4框架区和轻链可变区FR1、FR2、FR3和FR4框架区；所述重链可变区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5中第1
‑
30、37
‑
50、67
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晶，于鸣，李新颖，乔春霞，罗龙龙，肖鹤，陈国江，王志宏，胡乃静，冯健男，沈倍奋，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：