一种酸性寡肽修饰的骨靶向脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种酸性寡肽修饰的骨靶向脂质体及其制备方法，所述骨靶向脂质体的表面修饰有酸性寡肽，其修饰密度n为1～5，单位为摩尔比mol％。本发明专利技术的骨靶向脂质体通过在脂质体表面修饰具有骨靶向作用的D型谷氨酸六肽，并优化其在脂质体表面修饰的密度，以筛选出具有最强骨靶向活性的脂质体制剂，使其在骨组织分布增加。随着酸性寡肽修饰密度的增高，脂质体与羟基磷灰石结合能力增强；然而，修饰产生的高负电荷刺激单核吞噬系统吞噬，降低脂质体血滞留。但高密度酸性寡肽修饰(5mol％)赋予脂质体突出的HA结合活性，可完全弥补其血滞留弱的不足，从而实现最高的骨靶向递送。从而实现最高的骨靶向递送。从而实现最高的骨靶向递送。

【技术实现步骤摘要】
一种酸性寡肽修饰的骨靶向脂质体及其制备方法


[0001]本专利技术属于药物制剂
，具体涉及一种酸性寡肽修饰的骨靶向脂质体及其制备方法。

技术介绍

[0002]由于渐进的社会老龄化，骨疾病(如骨质疏松症和骨肿瘤)构成了主要的公共健康问题。对于骨疾病的治疗，需要口服和注射大剂量药物才能使其以有效浓度到达骨组织部位。然而，如此高浓度的药物在血液循环中可能会对其他正常组织造成严重的不良影响。纳米载体可将药物靶向递送到骨组织部位并最大限度地减少全身毒性来提高骨疾病的治疗效果，从而受到广泛关注。
[0003]因此，开发一种具有主动靶向骨组织功能的纳米递药系统具有重要意义。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种酸性寡肽修饰的骨靶向脂质体及其制备方法。
[0005]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
[0006]第一方面，本专利技术提出了一种酸性寡肽修饰的骨靶向脂质体，所述骨靶向脂质体的表面修饰有酸性寡肽，其修饰密度n为1～5，单位为摩尔比mol％。
[0007]优选地，所述酸性寡肽为D型Glu6。
[0008]在本专利技术所述的技术方案中，通过在脂质体表面修饰具有骨靶向作用的酸性寡肽，例如以D型谷氨酸六肽(Glutamic hexapeptide，简称Glu6)为代表的酸性寡肽，优化其在脂质体表面修饰的密度，以筛选出具有最强骨靶向活性的脂质体制剂，使其在骨组织分布增加。
[0009]需要指出的是，用酸性寡肽配体修饰的脂质体显示出理想的骨靶向能力。然而，随着酸性寡肽修饰密度的增加，脂质体可能表现出更强的羟基磷灰石((Hydroxyapatite，简称HA)结合活性，但血液药代动力学较差，这对脂质体在骨组织中的分布产生相反的影响。因此，只是简单增加酸性寡肽的修饰密度，并不能很好地获得理想的具有骨靶向活性的脂质体，且如今也很少有研究系统地考察酸性寡肽修饰密度如何影响脂质体骨靶向活性。
[0010]基于此，本案专利技术人构建了一个脂质体库，该脂质体具有相同的脂质成分和相当的粒径，但具有不同的Glu6修饰密度，由此获得最佳的范围的Glu6的修饰密度。然而，如上所述，虽然高密度Glu6修饰可赋予脂质体更强的HA结合活性，但会使脂质体荷高负电荷，从而刺激巨噬细胞吞噬，增强脂质体在肝脏和脾脏的摄取，削弱脂质体血滞留。最终，生物分布实验表明了双重因素的作用结果，即具有修饰密度在1～5mol％的Glu6修饰的脂质体，由于其优异的HA结合活性完全克服了血液药代动力学的不足，在骨组织中产生了Glu6密度依赖的骨组织分布。其中，5mol％Glu6修饰引起最强的骨组织分布。此外，溶血试验进一步表明，优化的骨靶向脂质体(5mol％Glu6修饰的脂质体，即简称5％e
‑
Lip)通过系统注射给药
时，具有良好生物相容性。
[0011]第二方面，本专利技术提出了一种制备上述的骨靶向脂质体的方法，包括将HSPC、胆固醇和不同投料比的DSPE
‑
PEG2000与DSPE
‑
PEG2000
‑
DGlu6溶解于有机溶剂，振摇均匀，真空旋转蒸发形成磷脂薄膜，抽真空过夜，加入PBS，水浴旋转至薄膜水化脱落，得到不同Glu6修饰密度的脂质体混悬液，再用带有聚碳酸酯膜的挤出器挤压获得粒径为100nm的骨靶向脂质体。
[0012]优选地，所述DSPE
‑
PEG2000
‑
DGlu6通过以下方式获得：
[0013]以Fmoc合成策略合成得到DCys
‑
DGlu6；
[0014]通过DSPE
‑
PEG2000
‑
Mal与DCys
‑
DGlu6的巯基
‑
马来酰亚胺加成反应，获得DSPE
‑
PEG2000
‑
DGlu6。
[0015]优选地，所述有机溶剂为氯仿与甲醇以3:1的体积比混合。
[0016]优选地，HSPC、胆固醇、DSPE
‑
PEG2000与DSPE
‑
PEG2000
‑
DGlu6以以下摩尔比溶解：56.5：38.5：5
‑
x：x，其中x表示DSPE
‑
PEG2000
‑
DGlu6的摩尔比，且x＝1、2、3、4、5。
[0017]优选地，所述水浴温度为37℃，水浴时间为30min。
[0018]优选地，将脂质体混悬液依次通过100nm和50nm聚碳酸酯膜在挤出器中进行挤出。
[0019]第三方面，本专利技术提出了一种骨靶向脂质体药物，所述骨靶向脂质体药物包括上述的骨靶向脂质体，以及包裹在所述骨靶向脂质体内的活性药物分子；
[0020]优选地，所述活性药物分子选自以下的至少其中之一：治疗骨质疏松、肿瘤骨转移、骨折愈合障碍、骨折、骨缺损修复、骨质增生以及异位骨化的药物。
[0021]第四方面，本专利技术提出了骨靶向脂质体药物在制备治疗骨病的药物中的应用；
[0022]优选地，所述骨病选自骨质疏松、肿瘤骨转移、骨折愈合障碍、骨折、骨缺损修复、骨质增生以及异位骨化。
[0023]第五方面，本专利技术提出了一种药物制剂，所述药物制剂含有上述的骨靶向脂质体药物，所述药物制剂为液体制剂，所述液体制剂为注射剂。
[0024]与现有技术相比，本专利技术具有如下所述的优势以及有益效果：
[0025]本专利技术的酸性寡肽修饰的骨靶向脂质体，首次研究和阐明了酸性寡肽修饰密度对脂质体骨靶向活性的影响规律。即随着酸性寡肽修饰密度的增高，脂质体与HA结合能力增强，修饰产生的高负电荷刺激单核吞噬系统(Mononuclear phagocyte system，简称MPS)中巨噬细胞对其吞噬，降低其血滞留。但高密度酸性寡肽修饰(5mol％)赋予脂质体突出的HA结合活性，可完全弥补其血滞留弱的不足，从而实现最高的骨靶向递送。
附图说明
[0026]通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显。
[0027]图1为本专利技术中DCys
‑
DGlu6的合成流程示意图；
[0028]图2为本专利技术中DCys
‑
DGlu6在220nm处梯度洗脱的HPLC色谱图和DCys
‑
DGlu6的质谱图，其中A为HPLC色谱图，B为质谱图，显示了相对分子质量：895.3；
[0029]图3为本专利技术中DSPE
‑
PEG2000
‑
DGlu6合成过程示意图；
[0030]图4为本专利技术中DSPE
‑
PEG2000
‑
Mal和DSPE
‑
PEG2000
‑
DGlu6的MALDI
‑
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酸性寡肽修饰的骨靶向脂质体，其特征在于，所述骨靶向脂质体的表面修饰有酸性寡肽，其修饰密度n为1～5，单位为摩尔比mol％。2.根据权利要求1所述的骨靶向脂质体，其特征在于，所述酸性寡肽为D型Glu6。3.一种制备如权利要求1～2任意一项所述的骨靶向脂质体的方法，其特征在于，包括将HSPC、胆固醇和不同投料比的DSPE
‑
PEG2000与DSPE
‑
PEG2000
‑
DGlu6溶解于有机溶剂，振摇均匀，真空旋转蒸发形成磷脂薄膜，抽真空过夜，加入PBS，水浴旋转至薄膜水化脱落，得到不同Glu6修饰密度的脂质体混悬液，再用带有聚碳酸酯膜的挤出器挤压获得粒径为100nm的骨靶向脂质体。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂为氯仿与甲醇以3:1的体积比混合。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，HSPC、胆固醇、DSPE
‑
PEG2000与DSPE
‑
PEG2000
‑
DGlu6分别以以下摩尔比溶解：...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏佳灿，陶亚莉，魏彦，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：