一种载药脑靶向外泌体的制备方法及其应用技术

本发明专利技术属于医药材料技术领域，具体涉及一种载药脑靶向外泌体的制备方法及其应用。所述载药脑靶向外泌体包括脑靶向肽分子，外泌体，以及包载于外泌体内的药物。所述药物为一种血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦。脑靶向肽是以共培养的方式通过外泌体标志蛋白CD63结合于外泌体表面。所述外泌体来源于小鼠单核巨噬细胞白血病细胞的细胞上清。本发明专利技术的脑靶向外泌体载药体系能够将药物负载至外泌体内，且无明显生物毒性作用。此外，尾静脉少量给药即可透过血脑屏障进入中枢实现抑制血管紧张素(RAS)的表达。在阿霉素诱导慢性肾病小鼠模型中，脑靶向外泌体负载氯沙坦药物复合物能够通过下调中枢RAS的表达从而明显改善肾功能，肾组织损伤以及肾间质胶原纤维沉积。伤以及肾间质胶原纤维沉积。伤以及肾间质胶原纤维沉积。

【技术实现步骤摘要】
一种载药脑靶向外泌体的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于医药材料
，具体涉及一种载药脑靶向外泌体的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]慢性肾脏病(CKD)是一种由高血压、糖尿病、肾小球肾炎、多囊肾等引起的以肾功能逐渐减退为特征的一类疾病。CKD发病率高，早期检出率低，致死致残率高，治疗费用高，严重影响人们的生活质量。若肾脏病早期得不到有效治疗，将进展到终末期肾脏病接受，不得不接受肾脏替代治疗，这不仅严重影响患者的生活质量，而且给患者和家属带来了沉重的经济负担。目前临床的药物治疗十分有限，主要包括血管紧张素酶抑制剂、糖皮质激素、免疫抑制剂和中医药等，但在延缓疾病进展方面的效果仍较有限。
[0003]研究发现，侧脑室注射反义寡核苷酸抑制脑部的肾素血管紧张素系统(RAS轴)可下调慢性两肾一夹肾病大鼠引起的高血压。高盐促进CKD的肾纤维化模型中，脑
‑
肾RAS交互轴参与其中，而且中枢给予小剂量(约为外周给药有效剂量的1/500)RAS抑制剂(如氯沙坦)可明显减轻慢性肾损伤。但是，如此小剂量的药物通过外周给药的途径则对慢性肾损伤的治疗效果甚微。因此，如果能将药物靶向到中枢系统，即可实现使用较少的药物剂量得到较好的治疗效果。但是，鉴于中枢给药的危险性和高难度，很难将其推广到临床应用。因此，亟需一种免疫原性低、脑靶向和高效载药的药物载体来通过中枢靶向运输RAS抑制剂，最终实现肾保护作用。
[0004]近年来，纳米材料在医学方面展示了较大优势，可通过表面修饰或者其本身的特质为疾病治疗和药物运输提供帮助。比如，提高药物对受损器官的靶向性，降低药物毒性，增加血药浓度等。但人工合成的纳米药物载体，大多存在制备难度大，相容性欠佳，毒性不明确等不足。
[0005]外泌体是一类直径在30
‑
200nm的纳米级盘状囊泡，天然存在于多种细胞及体液中，作为药物载体具有诸多优势如较好的低生物毒性，稳定性和低免疫原性。但在肾脏病治疗领域，由于肾脏病及其治疗化药的特殊性，使得脑靶向给药技术在该领域受到了极大的限制。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种载药脑靶向外泌体及其制备方法和应用。鉴于现有技术中的不足，本研究专利技术人经过反复实践，得出本专利技术的主要技术方案，其主要是提供一种负载药物如氯沙坦的脑靶向外泌体载药体系，用于慢性肾脏病的修复治疗。本专利技术的另一目的还在于提供所述载药脑靶向外泌体在慢性肾脏病修复中的应用。所述的载药脑靶向外泌体包括脑靶向肽分子，巨噬细胞来源的外泌体，以及负载于外泌体内的药物血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦，所述载药脑靶向外泌体可以透过血脑屏障，靶向性的将药物运输到脑组织并下调海马部位的RAS表达。能够达到使用极少量的药物剂量(约为外周给药有效剂量的1/
500)即可对慢性肾脏病发挥保护作用。
[0007]为实现本专利技术所述技术效果，本专利技术采用的技术方案包括：
[0008]首先，本专利技术所述的载药脑靶向外泌体，其包括脑靶向肽，外泌体，以及负载于外泌体内的药物，其中：
[0009]所述外泌体来源于小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7。
[0010]此来源外泌体对炎性反应提高的脑组织具有一定趋向性，这是有别于其他来源外泌体的特征，而慢性肾脏病动物模型中可发现大脑炎症明显上调，这有助于该来源外泌体在CKD动物模型的脑组织富集，使其能够实现携带本申请特定药物到达给药位点，调节相应表达的作用，其他来源外泌体不能到到此效果。
[0011]所述脑靶向肽为Angiopep
‑2‑
CP05，制备方法为固相合成法。
[0012]该脑靶向肽相比于现有的脑靶向技术，其合成方法简单，能特异性的与本专利技术所采用的外泌体表面标志物结合，进而携带外泌体及其包载的药物透过血脑屏障进入中枢发挥作用。
[0013]所述的药物为血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，例如氯沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦等但不限于此。
[0014]进一步地，所述载药脑靶向外泌体中药物浓度为10
‑
70μg/100μg脑靶向外泌体，但最优为70μg/100μg脑靶向外泌体。
[0015]上述药物浓度为该载药脑靶向外泌体的有效浓度，尤其当药物浓度在1mg/kg时，可以实现药效与用药量的最佳组合，具有最低的生物毒性。
[0016]经过专利技术人的大量研究实验表明，只有脑靶向肽Angiopep
‑2‑
CP05以及小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7来源的外泌体与相关药物(尤其是氯沙坦)的结合，可以实现上述技术效果的同时，还具有低生物毒性。
[0017]进一步地，所述外泌体尺寸(直径)分布主要在140
±
50nm。
[0018]本专利技术的另一个方面还提供了上述载药脑靶向外泌体的制备方法，其包括：
[0019]将脑靶向肽同外泌体进行共培养，将脑靶向肽链接于外泌体表面，形成脑靶向肽修饰的外泌体复合物；再将药物与脑靶向肽修饰的外泌体复合物共培养，得到载药脑靶向外泌体体系。
[0020]进一步地，所述脑靶向肽修饰的外泌体复合物通过超滤离心的方式去除未被包裹的药物。
[0021]更进一步地，所述小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7来源外泌体是通过以下方法获得：
[0022]采用常规培养方法培养小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7细胞，在对数生长期换成无外泌体血清培养基，培养48h后收集细胞上清，得到小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7来源外泌体。
[0023]本专利技术还提供了上述载药脑靶向外泌体的应用，用于肾脏病治疗或用于肾脏病治疗药物的制备。
[0024]本专利技术的有益效果为：
[0025]首先，目前尚无相关研究通过脑靶向运输极少量药物治疗肾脏病的相关技术方案，本专利技术所述的载药脑靶向外泌体，首次提出了治疗肾脏病的脑靶向外泌体载药体系的
技术方案，巨噬细胞来源的外泌体对慢性肾脏病动物模型的炎性脑组织具有一定靶向性，从而促进负载的药物在CKD模型脑组织的富集，最终在减少药物用量的基础上保证对脑组织的有效作用。本专利技术利用特定外泌体及特定脑靶向肽的相应特征特异性的结合肾脏病治疗药物，为中枢靶向载药治疗CKD提供支持从而开辟新的治疗方向。
[0026]经研究实验得知，本专利技术所述的载药脑靶向外泌体具有用药量极小的特点，约为常规外周给药有效剂量的1/500；另外，在保证药效的基础上，还具有极低生物毒性的特定，极大的保证了用药安全性。在阿霉素慢性肾脏病小鼠应用时，能够改善肾功能、肾组织炎症细胞浸润以及间质胶原沉积，促进慢性肾脏病的修复。
[0027]综上所述，较之现有技术，本专利技术制备的载药脑靶向外泌体能够将小分子化合药物负载入外泌体内，并具有较低的细胞和系统毒性、脑靶向递送药物下调海马RAS组分表达的能力，促进慢性肾脏病的修复。
附图说明
[0028]图1为本专利技术所述载药脑靶向外泌体制备流程图；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种载药脑靶向外泌体，其包括脑靶向肽分子，外泌体，以及负载于外泌体内的药物，其特征在于，所述外泌体来源于小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7，所述脑靶向肽为Angiopep
‑2‑
CP05，所述的药物为血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂。2.根据权利要求1所述的载药脑靶向外泌体，其特征在于，所述外泌体尺寸分布在140
±
50nm。3.根据权利要求1所述的载药脑靶向外泌体，其特征在于，所述的血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂为氯沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦。4.根据权利要求1所述的载药脑靶向外泌体，其特征在于，所述载药脑靶向外泌体中药物浓度为10
‑
70μg/100μg脑靶向外泌体。5.根据权利要求4所述的载药脑靶向外泌体，其特征在于，所述载药脑靶向...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭丽珊，黄晓彦，侯霜，赖智玮，周会松，李三木，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院，
类型：发明
国别省市：