【技术实现步骤摘要】
本申请属于分子生物学，具体涉及核酸适配体，更具体涉及cas9蛋白的核酸适配体及其应用。
技术介绍
1、核酸适配体(aptamer)是一段寡核苷酸序列(dna或rna)，通常是利用体外筛选技术——指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands byexponential enrichment,selex)从随机合成的寡核苷酸核酸分子文库中筛选得到的寡核苷酸片段。核酸适配体通过二、三级结构的折叠形成特定的三维空间构型，可与靶分子进行高亲和性、高特异性的结合，靶分子包括蛋白质、核酸、代谢小分子、化合物和氨基酸等。核酸适配体在分析化学、蛋白质组学研究、药物研发及基因调控等领域已经成为了一种重要的研究工具。
2、crispr-cas9系统是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种免疫防御机制，可对抗入侵病毒及外源dna。crispr-cas9基因编辑技术则是一种对靶基因进行特定dna修饰从而进行基因编辑的前沿技术。cas9蛋白在引导rna(guide rna,grna)的引导下，可结合到基因的靶位点进行精准切割。cas9蛋白包含的hnh核酸酶结构域负责切割外源dna与间隔序列互补的链，而ruvc结构域负责切割外源dna的另一条链。dcas9蛋白是cas9蛋白的突变体，同时突变ruvc和hnh两个核酸酶区域，因此dcas9蛋白失去内切酶活性，只保留在grna引导下结合基因组的能力。crispr-dcas9系统为分子生物学家提供了一个研究定点转录调控的平台，可进行基因调控等研究。但是，本领
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供cas9蛋白的核酸适配体，可用于对crispr-dcas9系统的调控作用进行干扰。
2、本专利技术通过以下技术方案来实现本专利技术的目的。
3、在第一方面，本专利技术提供cas9蛋白的核酸适配体，该核酸适配体的核苷酸序列如seq id no:1、seq id no:4、seq id no:7、seq id no:10或者seq id no:13所示，该核酸适配体对cas9蛋白具有1.0e-9m或更低的kd值所表示的亲和力。
4、进一步地，该核酸适配体与grna(tre)spacer序列的3’端连接，连接所得的核苷酸序列分别如seq id no:2、seq id no:5、seq id no:8、seq id no:11或者seq id no:14所示。
5、进一步地，该核酸适配体与grna(tre)spacer序列的5’端连接，连接所得的核苷酸序列分别如seq id no:3、seq id no:6、seq id no:9、seq id no:12或者seq id no:15所示。
6、进一步地，本专利技术还提供由具有seq id no:1-15所示的核苷酸序列的核酸适配体衍生、并且保持该亲和力的核酸适配体。这些衍生的核酸适配体也落入本专利技术的核酸适配体的范围内。
7、在一些实施方案中，衍生的核酸适配体包含对上述核苷酸序列进行一个或多个碱基插入、缺失或者置换突变得到的核苷酸序列并且保持该亲和力。本领域技术人员熟知如何对核苷酸序列进行一个或多个碱基插入、缺失或者置换突变。
8、在一些实施方案中，衍生的核酸适配体包含与上述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持该亲和力。本领域技术人员熟知如何获得一条核苷酸序列的互补序列。
9、在一些实施方案中，衍生的核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持该亲和力。
10、具体地，该碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰或者巯基化修饰。优选地，该碱基修饰为硫代修饰。本领域技术人员熟知如何如何对一条核苷酸序列作出上述碱基修饰。
11、在一些实施方案中，衍生的核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持该亲和力。
12、具体地，该标记物为同位素标记物、生物素标记物、化学发光标记物、荧光标记物或者酶标记物。本领域技术人员熟知如何对一条核苷酸序列添加上述标记物。
13、如实施例5的试验所证实，本专利技术的cas9蛋白的核酸适配体能够抑制dcas9-vpr融合蛋白对egfp基因的转录激活作用，显示了本专利技术的cas9蛋白的核酸适配体对crispr-dcas9的调控作用(例如转录激活作用)具有干扰作用，可以作为干扰crispr-dcas9的工具。
14、相应地，在第二方面，本专利技术提供本专利技术第一方面的cas9蛋白的核酸适配体在制备干扰crispr-dcas9的试剂或者试剂盒中的用途。
15、本专利技术的试剂或者试剂盒可以用于相关的分子生物学研究与试验。
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1.一种Cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示。
2.根据权利要求1所述的Cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体与gRNA(TRE)Spacer序列的3’端连接，连接所得的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。
3.根据权利要求1所述的Cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体与gRNA(TRE)Spacer序列的5’端连接，连接所得的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
4.根据权利要求1或2所述的Cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰。
5.根据权利要求4所述的Cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰或者巯基化修饰。
6.根据权利要求1或2所述的Cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物。
7.根据权利要求6所述的Cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述标记物为同位素标记物、生物素标记物、化学发光标
8.根据权利要求1-7中任一项所述的Cas9蛋白的核酸适配体在制备用于干扰CRISPR-dCas9转录激活作用的试剂或试剂盒的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列如seq idno:4所示。
2.根据权利要求1所述的cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体与grna(tre)spacer序列的3’端连接，连接所得的核苷酸序列如seq id no:5所示。
3.根据权利要求1所述的cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体与grna(tre)spacer序列的5’端连接，连接所得的核苷酸序列如seq id no:6所示。
4.根据权利要求1或2所述的cas9蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄新波，桂耀庭，刘宇辰，汪铭霞，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院，
类型：发明
国别省市：
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