一种元宝枫胚性愈伤组织的诱导方法技术

元宝枫作为一种极具观赏价值和经济价值的乔木，科研人员对其叶色及种子中的不饱和脂肪酸等开展了大量研究。为了阐明候选基因在元宝枫体内的作用机制，科研人员需要首先建立元宝枫遗传转化体系。本发明专利技术涉及一种元宝枫胚性愈伤组织的诱导方法：使用本发明专利技术提供的胚性愈伤组织诱导培养基培养元宝枫，能够提高元宝枫胚性愈伤组织诱导的概率。所述胚性愈伤组织诱导培养基选自以下组：1/2MS+0.5mg/L吲哚丁酸+1.0mg/L噻苯隆+3.0mg/L 6

【技术实现步骤摘要】
一种元宝枫胚性愈伤组织的诱导方法


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，尤其涉及一种元宝枫胚性愈伤组织的诱导方法。

技术介绍

[0002]元宝枫又名元宝槭，为无患子目、槭树科、槭属落叶乔木。元宝枫是一种观赏性很强且生存能力很强的植物。元宝枫因其耐贫瘠、耐干旱、耐低温、适应性强等特性在园林绿化中有着特殊地位。
[0003]元宝枫树冠阔圆形，树皮灰黄色至灰色，有纵裂条纹，小枝对生光无毛，1年生枝。元宝枫耐半荫、耐寒、抗风、不耐干热和强烈日晒。
[0004]元宝枫叶片呈淡赤褐色或绿色并带有绯红色，后呈灰色。元宝枫单叶对生，掌状5裂，长5～10厘米，宽6～15厘米，全缘，先端渐尖，翅果。元宝枫树冠浓荫，树姿优美，叶形秀美，叶色艳丽。秋季叶色多变为亮丽的血红色或金黄色，是北方著名的秋色叶树种。
[0005]现有技术大多通过扦插或嫁接的方式获得新的元宝枫单株。然而元宝枫新优品种扦插较难，主要原因是生根难，到目前为止，扦插苗生根率仍然很低，达不到大规模繁殖的要求。
[0006]随着组织培养技术的成熟，元宝枫的组织培养成为元宝枫繁育的一种手段。公开号为CN111657151A的中国专利申请公开了一种元宝枫快速成苗方法，包括以下步骤：采集元宝枫当年生枝条，切割带芽茎段作为外植体，消毒后接种于外植体萌发培养基上，使芽体展叶，获得无菌苗；再将无菌苗的新生茎段置于生根培养基上，直接生根成苗，随后移栽。公开号为CN102726295A的中国专利公开了一种元宝枫组织培养繁殖方法，该方法包括：在3月上旬采集树龄为4～6年的元宝枫母树的当年生枝芽作为外植体，消毒后切段并接种到包含苄氨基腺嘌呤、萘乙酸的MS培养基中进行组织诱导培养，培养环境为pH 5.6～5.8，20～24℃，光照强度1500lux，每天18小时光照6小时黑暗。上述方法通过诱导外植体定向分化而使每个外植体能够分化成一个单株。
[0007]截至目前为止，尽管已有很多研究者开展了元宝枫再生体系和遗传转化体系的研究，但仍然没有建立真正有效的元宝枫遗传转化体系。基于培育胚性愈伤组织以实现元宝枫的再分化，本专利技术涉及一种元宝枫胚性愈伤组织的诱导方法。
[0008]此外，一方面由于对本领域技术人员的理解存在差异；另一方面由于申请人做出本专利技术时研究了大量文献和专利，但篇幅所限并未详细罗列所有的细节与内容，然而这绝非本专利技术不具备这些现有技术的特征，相反本专利技术已经具备现有技术的所有特征，而且申请人保留在
技术介绍
中增加相关现有技术之权利。

技术实现思路

[0009]针对现有技术之不足，本专利技术提供了一种元宝枫胚性愈伤组织的诱导方法和胚性愈伤组织诱导培养基。使用该培养基和该诱导方法能够显著提高元宝枫的茎段体细胞胚发
生率，为低发芽率的元宝枫的培育和建立元宝枫遗传转化体系奠定技术基础。
[0010]本专利技术中涉及的一种元宝枫胚性愈伤组织的诱导方法，包含以下步骤：
[0011]采集元宝枫茎段，将所述元宝枫茎段消毒处理后获得用于愈伤组织培育的外植体，并将所述外植体置于初级愈伤组织诱导培养基表面，获得元宝枫的初级愈伤组织；选择健康的初级愈伤组织，将健康的初级愈伤组织转移至胚性愈伤组织诱导培养基中，健康的初级愈伤组织是白色、绿色或淡红色，其中，所述胚性愈伤组织诱导培养基选自以下组：
[0012]1/2MS+0.5mg/L吲哚丁酸(IBA)+1.0mg/L噻苯隆(TDZ)+3.0mg/L 6
‑
苄氨基嘌呤(6
‑
BA)+0.1mg/L赤霉素(GA)；
[0013]1/2MS+3.0mg/L 6
‑
苄氨基嘌呤+2.0mg/L噻苯隆+0.5mg/L吲哚丁酸+0.1mg/L赤霉素。
[0014]根据一种优选实施方式，初级愈伤组织诱导培养基包含：1/2MS、2mg/L 2,4
‑
二氯苯氧乙酸(2,4
‑
D)、0.3mg/L 6
‑
BA、0.5mg/L萘乙酸(NAA)、30g/L蔗糖(Sucrose)、7g/L琼脂(Agar)和0.5g/L酸水解酪蛋白(AHC)。
[0015]根据一种优选实施方式，元宝枫茎段的消毒方法包含以下步骤：
[0016]洗涤灵浸泡后水冲洗；酒精表面消毒后无菌水清洗；转入次氯酸钠中浸泡，无菌水清洗。
[0017]根据一种优选实施方式，胚性愈伤组织的继代培养方法包含以下步骤：
[0018]选择新生的胚性愈伤组织于胚性愈伤组织诱导培养基中培养，其中，所述胚性愈伤组织诱导培养基选自以下组：
[0019]1/2MS+0.5mg/L IBA+1.0mg/L TDZ+3.0mg/L 6
‑
BA；
[0020]1/2MS+3.0mg/L 6
‑
BA+2.0mg/L TDZ+0.5mg/L IBA。
[0021]根据一种优选实施方式，用于继代培养的所述胚性愈伤组织诱导培养基包含1/2MS、0.5mg/L IBA、2.0mg/L TDZ、3.0mg/L 6
‑
BA、0.1mg/L GA。
[0022]根据一种优选实施方式，用于继代培养的所述胚性愈伤组织诱导培养基包含1/2MS、0.5mg/L IBA、1.0mg/L TDZ、3.0mg/L 6
‑
BA、0.1mg/L GA。
[0023]根据一种优选实施方式，胚性愈伤组织能够为绿色颗粒状或白色颗粒状。
[0024]根据一种优选实施方式，消毒后的所述茎段能够被分割为长度在1～2cm之间的无生长点小段，所述无生长点小段能够作为外植体于所述初级愈伤组织诱导培养基中培养。
[0025]根据一种优选实施方式，胚性愈伤组织能够每2～4周进行一次继代培养，以维持稳定生长和增殖。
[0026]一种用于元宝枫的胚性愈伤组织诱导培养基，其特征在于，所述胚性愈伤组织诱导培养基包含：由1/2MS、30g/L蔗糖、0.5g/L酸水解酪蛋白、8g/L琼脂构成的1/2MS基础培养基和激素组合物，其中，激素组合物由以下质量浓度的组分组成：
[0027]0.1～1.0mg/L的IBA、0.1～4.0mg/L的TDZ、1.0～5.0mg/L的6
‑
BA、0.1mg/L的GA。优选地，赤霉素能够为GA3。
[0028]本专利技术提供了如上述培育元宝枫的方法或用于元宝枫的胚性愈伤组织诱导的培养基于元宝枫胚苗培养中的用途。
[0029]本专利技术提供了如上述培育元宝枫的方法或用于元宝枫的胚性愈伤组织诱导的培养基于提高元宝枫体细胞胚性转化率中的用途。
[0030]根据一种优选实施方式，本专利技术中的MS培养基包含大量元素、微量元素、铁盐和有机物质。大量元素包含1650mg/L NH4NO3、1900mg/L KNO3、440mg/L CaCl2·
2H2O、370mg/L MgSO4·
7H2O、170mg/L 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种元宝枫胚性愈伤组织的诱导方法，其特征在于，包含以下步骤：采集元宝枫茎段，将所述元宝枫茎段消毒处理后获得用于愈伤组织培育的外植体，将所述外植体于初级愈伤组织诱导培养基中培养，获得初级愈伤组织；从所述初级愈伤组织中选择健康的初级愈伤组织，将健康的初级愈伤组织转移至胚性愈伤组织诱导培养基中培养，获得胚性愈伤组织，所述健康的初级愈伤组织的颜色是白色、绿色或淡红色，其中，所述胚性愈伤组织诱导培养基选自以下组：1/2MS+0.5mg/L吲哚丁酸+1.0mg/L噻苯隆+3.0mg/L 6
‑
苄氨基嘌呤+0.1mg/L赤霉素；1/2MS+3.0mg/L 6
‑
苄氨基嘌呤+2.0mg/L噻苯隆+0.5mg/L吲哚丁酸+0.1mg/L赤霉素。2.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述初级愈伤组织诱导培养基包含：1/2MS、2mg/L 2,4
‑
二氯苯氧乙酸、0.3mg/L 6
‑
苄氨基嘌呤、0.5mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖、7g/L琼脂和0.5g/L酸水解酪蛋白。3.根据权利要求1或2所述的诱导方法，其特征在于，所述元宝枫茎段的消毒方法包含以下步骤：用洗涤灵浸泡，然后用水冲洗；用酒精进行表面消毒，然后用水清洗；转入次氯酸钠中浸泡，然后用水清洗。4.根据权利要求1～3任一项所述的诱导方法，其特征在于，所述方法还包括对经胚性愈伤组织诱导培养基培养获得的胚性愈伤组织进行继代培养的步骤，所述继代培养的方法包括以下步骤：从经胚性愈伤组织诱导培养基培养获得的胚性愈伤组织中选择新生的胚...

【专利技术属性】
技术研发人员：张华，辛海波，郭昊，镡媛，王茂良，
申请(专利权)人：北京市园林绿化科学研究院，
类型：发明
国别省市：