一种扩繁新疆紫草离体根的方法技术

本发明专利技术涉及药用植物栽培领域，具体公开了一种扩繁新疆紫草离体根的方法，包括如下步骤：以液体培养基在黑暗条件下扩繁培养新疆紫草离体根，使所述新疆紫草离体根进行扩增。本发明专利技术中的离体根培养的方式是一种新的探索方向，具有操作简单、时间周期短、成功率高、生长速度快、物质积累明显、可批量生产的特点，离体根在形态上也更接近原药材，在未来的实际生产和科学研究中具有极大地利用空间。和科学研究中具有极大地利用空间。

【技术实现步骤摘要】
一种扩繁新疆紫草离体根的方法


[0001]本专利技术涉及药用植物栽培领域，尤其涉及一种扩繁新疆紫草离体根的方法。

技术介绍

[0002]以繁殖性状均一的无性系为目的的微繁殖技术己经广泛应用于中药材的研究与开发。这一技术的应用对于因病毒病害严重影响产量和质量的药用植物、依靠有性繁殖提供种子而种子发育不完善或种子成本高的药用植物、依靠无性繁殖提供“种子”而无性繁殖系数低且需求量大的药用植物、渐危或濒危药用植物的引种驯化以及药用植物资源保护等都具有重要的理论与现实意义。
[0003]新疆紫草(软紫草)Arnebia euchroma(Royle)Johns t是传统中药材紫草的重要来源。紫草素类化合物为新疆紫草中主要药效成分。现代药理学研究发现，紫草素具有抗肿瘤、抗HIV活性、抗生育、抗炎、抗菌等作用，具有极高的药用价值。此外紫草素作为天然的红色素，可作为食品、药品、化妆品的添加剂，具有很高的经济价值。正是由于新疆紫草显著的应用价值，使得对其需求逐年扩大。
[0004]但因新疆紫草本身异型花柱且自交不亲和、果实种子败育率高、种子发芽率低、幼苗移栽定植率低等繁育生物学特点，实现其人工大面积栽培进展缓慢；目前细胞组织培养的方法已经成为紫草素生产的重要手段。日本、中国都先后建立了关于紫草的细胞培养体系，利用细胞悬浮体系进行工业化生产紫草素。这在一定程度上缓解了非药用紫草素的应用压力。但是，细胞干粉和紫草素仍不能替代中药紫草饮片应用于临床，尤其是新疆紫草在临床上具有独特的疗效，因此新疆紫草仍面临巨大的压力。
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技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供了一种扩繁新疆紫草离体根的方法，以现代植物组织培养技术为基础，建立一个具有体系稳定、生长快速、简便实用等优点的新疆紫草离体根培养方法技术体系，为新疆紫草组织培养提供一种新的途径。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种扩繁新疆紫草离体根的方法，包括如下步骤：以液体培养基在黑暗条件下扩繁培养新疆紫草离体根，使所述新疆紫草离体根进行扩增；所述液体培养基为以溶质和溶剂混合而成的液体培养基，所述溶剂为水，所述溶质的种类和浓度为硝酸钾1900g/L、磷酸二氢钾170g/L、硫酸镁180.7g/L、氯化钙332.2g/L、碘化钾0.83g/L、硼酸6.2g/L、硫酸锰16.9g/L、硫酸锌8.6g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜0.025g/L、氯化钴0.025g/L、乙二胺四乙酸二钠37.7g/L、硫酸亚铁27.8g/L、肌醇100g/L、盐酸硫胺素0.1g/L、盐酸吡哆醇0.5g/L、烟酸0.5g/L和蔗糖30g/L。
[0007]所述扩繁培养，培养条件为：转速90rpm/min，黑暗，温度25℃。
[0008]所述扩繁培养，新疆紫草离体根的接种量为0.1
‑
0.5g。
[0009]所述扩繁培养，每代培养的时间为15
‑
20天。
[0010]所述扩繁培养的培养温度为25℃。
[0011]所述新疆紫草离体根，为从无菌新疆紫草上取下的根。
[0012]所述无菌新疆紫草来自A1或A2：
[0013]A1、将灭菌后新疆紫草种子接种在固体培养基上培养至生根获得无菌新疆紫草；
[0014]A2、按照本专利技术所述扩繁方法扩繁获得的无菌新疆紫草；
[0015]所述固体培养基为以SH培养基(CBNumber：CB75588418)为基础培养基，向基础培养基中添加蔗糖和凝固剂并调节pH值为5.8得到的固体培养基，该固体培养基中蔗糖的浓度为20g/L。
[0016]所述凝固剂可选为琼脂，琼脂在所述固体培养基中的浓度可为8g/L。
[0017]所述培养至生根的培养条件为25℃下培养，种子在黑暗条件下培养至萌发后转移到光照条件下培养(每日的光照时长14h、光照强度范围5000
‑
10000lx)至长出明显的根。
[0018]目前国内新疆紫草的组织培养方向主要集中于：通过组织培养技术诱导筛选出优良品系，进一步快繁成完整植株；诱导筛选新疆紫草愈伤组织的优良细胞系，进而生产紫草素及其衍生物；发根农杆菌诱导新疆紫草毛状根，进行离体根系的培养。对于无菌苗的离体根培养鲜有记载，本专利技术中的离体根培养的方式是一种新的探索方向，相对于其他三种常见组织培养来说，具有操作简单、时间周期短、成功率高、生长速度快、物质积累明显、可批量生产的特点，离体根在形态上也更接近原药材，在未来的实际生产和科学研究中具有极大地利用空间。且本专利技术新疆紫草离体根的培养过程中不需要添加激素或者农杆菌来进行诱导，不会出现诱导成功率低的问题，也不需要进行长时间的诱导分化，并且离体根的遗传变异相对稳定。
附图说明
[0019]图1为本专利技术实施例1中消毒后接种至培养基上的种子。
[0020]图2为本专利技术实施例1中的新疆紫草无菌苗。
[0021]图3为本专利技术实施例1中液体培养基中新疆紫草离体根的状态。
[0022]图4为本专利技术实施例1中新疆紫草离体根在不同类型培养基中生长的状况，从左至右依次为SH培养基、1/2MS无铵培养基、1/2MS培养基。
[0023]图5为本专利技术实施例1中以SH、1/2MS无铵培养基分别继代新疆紫草离体根的生长的状况，从左至右依次为1/2MS无铵培养基、SH培养基。
具体实施方式
[0024]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
[0025]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0026]下述实施例中的新疆紫草种子可市购获得。
[0027]实施例1
[0028]1.新疆紫草无菌苗的获得。
[0029](1)消毒
[0030]新疆紫草的果实剥去果皮取出种子，置于
‑
20℃冰箱春化2天以上，超净台中将种子放入75％酒精消毒1min，用无菌水清洗3遍，再放入15％双氧水中消毒15min，无菌水冲洗3
‑
5遍后，再放入浓度为500mg
·
L
－1
的氨苄中灭菌1h，滤纸吸干种子表面水分，用于接种。
[0031](2)接种
[0032]将灭好菌的种子放置到装有生长培养基的培养皿上，每两粒间隔5mm为宜，具体见图1。
[0033]置于25℃恒温培养箱中，黑暗条件下培养至萌发。萌发后转移到光照条件下(每日的光照时长14h、光照强度范围5000
‑
10000lx)。当有污染及时弃掉，并且淘汰掉萌发不佳的种子，种子长出明显的根后转进装有生长培养基的组培瓶，一瓶中可转接多株，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种扩繁新疆紫草离体根的方法，其特征在于，包括如下步骤：以液体培养基在黑暗条件下扩繁培养新疆紫草离体根，使所述新疆紫草离体根进行扩增；所述液体培养基为以溶质和溶剂混合而成的液体培养基，所述溶剂为水，所述溶质的种类和浓度为硝酸钾1900g/L、磷酸二氢钾170g/L、硫酸镁180.7g/L、氯化钙332.2g/L、碘化钾0.83g/L、硼酸6.2g/L、硫酸锰16.9g/L、硫酸锌8.6g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜0.025g/L、氯化钴0.025g/L、乙二胺四乙酸二钠37.7g/L、硫酸亚铁27.8g/L、肌醇100g/L、盐酸硫胺素0.1g/L、盐酸吡哆醇0.5g/L、烟酸0.5g/L和蔗糖30g/L。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩繁培养，培养条件为：转速90rpm/min，温度25℃。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述扩繁培养，新疆紫草离体根的接种量为0.1
‑
0.5g。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述扩繁培养，培养时长为15
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄璐琦，王升，石琳源，张成才，郭兰萍，王瑞杉，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：