一种诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法技术

本发明专利技术公开了一种诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法。本发明专利技术开创性的发现铜离子、镁离子、银离子及硝普纳对铁甲草茎段外植体不定芽再生的促进效果，开发优化铁甲草人工培育最佳培养基和培养条件，建立了一种快速有效的铁甲草茎段外植体体外繁殖再生体系，简化了组培方法，缩短了组培周期，提高了再生苗质量；为实现铁甲草工厂化栽培提供了方法和依据，对于广东地区对铁甲草日益增长的市场需求具有一定的现实意义。具有一定的现实意义。具有一定的现实意义。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法


[0001]本专利技术属于植物细胞工程
，具体涉及一种诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法。

技术介绍

[0002]铁甲草(Cassia mimosoides Linn.)，别名山扁豆，为豆科(Leguminosae)决明属植物，是一种多年生亚灌木状披散草本植物。铁甲草现分布于全球的热带和亚热带，我国的东南部、南部以及西南部是其广泛分布的地区。铁甲草本种常生长于荒地，耐旱耐瘠，可做绿肥，更是良好的覆盖植物和改土植物。铁甲草始载于在明朝《救荒本草》，可以全草入药，有健脾利湿，清热解毒，通便等功效，幼嫩茎叶可以代茶，根可治痢疾。因其特有的药用价值，数百年来，民间广为流传。由于铁甲草具有重要的药用价值，目前市场上对其需求量与日俱增。然而，在自然环境下，铁甲草存在种子萌发率低，种植步骤繁琐，自然繁殖周期较长，母株优良品质难以保存等种种问题。
[0003]目前关于铁甲草组培再生的研究报道还比较少，一般都是关注不同类型的激素或者不同浓度的激素对铁甲草外植体组培再生效果的影响，并且已经报道的铁甲草外植体不定芽再生培养的周期较长，一般至少需要80天，而且需要增殖培养和伸长培养等繁琐的过程，严重制约了铁甲草大规模扩繁的效率。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对现有技术中铁甲草不定芽诱导和植株再生的过程中存在的诱导率低、质量较差和周期较长等问题，提供一种应用于高效诱导铁甲草茎段外植体产生再生不定芽的方法。
[0005]本专利技术的为了提高诱导铁甲草茎段外植体不定芽形成的质量和效率，开创性的采用不同浓度和不同类型的金属离子来诱导茎段外植体产生不定芽，优化的条件可显著提高愈伤组织诱导的效率和质量。再将所获得再生芽条接种到添加了不同类型添加物的生根培养基上培养一段时间，就可以获得完整的再生植株。
[0006]因此，本专利技术的目的是提供一种诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法，包括以下步骤：
[0007]a.取铁甲草种子，进行催芽处理和消毒处理，然后接种于MS固体培养基上进行种子无菌萌发培养；
[0008]b.取生长了15
‑
25天的铁甲草无菌植株，将根部和叶部都去除，保留茎；将茎切成小段，作为茎段外植体；
[0009]c.将茎段外植体轴向水平接种至不定芽诱导培养基，诱导培养不定芽；
[0010]d.将长度大于1cm的不定芽接种至生根培养基，诱导生根，获得铁甲草再生植株。
[0011]优选，所述的步骤a的催芽处理为：用80℃的水对种子进行恒温浸泡处理10min。
[0012]优选，所述的步骤a的消毒处理为：用体积分数75％的乙醇水溶液消毒30
‑
45s，然
后用质量分数2.5％的NaClO水溶液消毒10
‑
15min，期间不断振荡，灭菌水冲洗3
‑
4次，每次1min。
[0013]优选，所述的MS固体培养基，含有：蔗糖30g/L和琼脂8g/L，余量为MS培养基，pH 5.8
‑
6.0。
[0014]优选，所述的步骤b的将茎切成小段是将茎切成约0.5cm长小段。
[0015]优选，所述的不定芽诱导培养基，含有：TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、硝普纳1.2mg/L、AgCl 0.3mg/L、蔗糖30g/L和琼脂8g/L，余量为MS培养基，pH 5.8
‑
6.0。
[0016]优选，所述的不定芽诱导培养基，含有：TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、CuCl
2 0.3mg/L、MgSO4·
7H2O 0.5mg/L、蔗糖30g/L和琼脂8g/L，余量为MS培养基，pH 5.8
‑
6.0。
[0017]优选，所述的不定芽诱导培养基，含有：TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、FeSO4·
7H2O 0.4mg/L、蔗糖30g/L和琼脂8g/L，余量为MS培养基，pH 5.8
‑
6.0。
[0018]优选，所述的生根培养基，含有：IBA 0.1mg/L、DA
‑
6 0.6mg/L、蔗糖30g/L和琼脂8g/L，余量为MS培养基，pH 5.8
‑
6.0。
[0019]优选，所述的诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法，培养条件为：光照强度2000lx，光照时间12小时/天，温度25
±
1℃。
[0020]应用本专利技术优化的方法，可以显著提高诱导铁甲草茎段外植体形成再生不定芽的效率和质量，为铁甲草茎段外植体无性快繁和优良品种选育奠定了良好的工作基础。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]本专利技术以广东地区常用护肝中草药铁甲草为对象，运用植物组织培养技术，开创性的发现铜离子、镁离子、银离子及硝普纳对铁甲草茎段外植体不定芽再生的促进效果，开发优化铁甲草人工培育最佳培养基和培养条件，建立了一种快速有效的铁甲草茎段外植体体外繁殖再生体系，简化了组培体系，缩短了组培周期，提高了再生苗质量。本专利技术方法为铁甲草的种质资源繁育和保存提供了方法，为进一步了解铁甲草药理活性分析及保肝应用等基础研究提供原材料支持；为实现铁甲草工厂化栽培提供了方法和依据，对于广东地区对铁甲草日益增长的市场需求具有一定的现实意义。
[0023]采用本专利技术方法可以显著缩短获得铁甲草完整再生植株的时间，不需要增殖培养和伸长培养等步骤，简化了组培体系。同时，由于采用本方法所获得再生不定芽质量较好，通过茎段外植体不定芽诱导后，就可以直接进行芽条生根培养，在60天内就可以获得完整的再生植株，显著提高了再生效率，缩短了组培周期。
附图说明
[0024]图1是铁甲草茎段外植体不定芽再生效果，其中，(A)对照，直接将铁甲草茎段外植体接种至无激素MS固体培养基上培养40天后的效果；直接将茎段外植体轴向水平接种至只添加了2mg/L KT(B)和0.5mg/L TDZ(C)的MS固体培养基上进行不定芽诱导培养40天的效果；以含有0.5mg/L TDZ和2mg/L KT的MS固体培养基作为基础培养基，将所获得茎段外植体分别轴向水平接种至含有0.3mg/L CuCl2(D)、0.5mg/L MgSO4·
7H2O(E)、0.4mg/L FeSO4·
7H2O(F)、1.2mg/L硝普纳(G)、0.3mg/L AgCl(H)的基础培养基上进行不定芽诱导培养40天的效果；在基础培养基中添加了(I)1.2mg/L硝普纳和0.3mg/L CuCl2时的不定芽再生效果；(J)在基础培养基中添加了0.3mg/L AgCl和0.4mg/L FeSO4·
7H2O时的不定芽再生效果；以
含有0.5mg/L TDZ和2mg/L KT的MS固体培养基作为基础培养基，将所获得茎段外植体轴向水平接种至含有1.2mg/L硝普纳的基础培养基上进行不定芽诱导培养40天，将本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法，其特征在于，包括以下步骤：a.取铁甲草种子，进行催芽处理和消毒处理，然后接种于MS固体培养基上进行种子无菌萌发培养；b.取生长了15
‑
25天的铁甲草无菌植株，将根部和叶部都去除，保留茎；将茎切成小段，作为茎段外植体；c.将茎段外植体轴向水平接种至不定芽诱导培养基，诱导培养不定芽；d.将长度大于1cm的不定芽接种至生根培养基，诱导生根，获得铁甲草再生植株。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a的催芽处理为：用80℃的水对种子恒温浸泡处理10min。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a的消毒处理为：用体积分数75％的乙醇水溶液消毒30
‑
45s，然后用质量分数2.5％的NaClO水溶液消毒10
‑
15min，期间不断振荡，灭菌水冲洗3
‑
4次，每次1min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的MS固体培养基，含有：蔗糖30g/L和琼脂8g/L，余量为MS培养基，pH 5.8
‑
6.0。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b的将茎切成小段是将茎切成约0.5cm长小段。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的不定芽诱导培养基，含有：TDZ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘颖，周远航，廖梓欣，刘虹洁，薛迎斌，陈建平，杨少瑕，赵敏，殷悦，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：