一种路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的制备方法。涉及植物组织培养技术领域。提供了培养基和无菌苗的制备方法：采集植株，洗净，茎基部去叶片、根部，使横走茎光滑，吹干；表面消毒，无菌条件下，冲洗，灭菌；表面消毒，密封，超声波震动清洗，冲洗风干，得芽体；切除多余的叶柄及茎部组织，插入灭菌诱导培养基中培养；待芽长出后，取出外植体，切除黑化老化部位，转入灭菌增殖培养基中培养得转接后苗；培养至完整水培植株，切除老叶及黑腐组织后，转入液体培养基中培养；培养水培植株并诱导出根系。本发明专利技术可在较短时间内获得较大群体数量的无菌苗，且根系为水培根系，可用于实验材料的制备，可复制性强，易操作。易操作。

【技术实现步骤摘要】
一种路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的制备方法


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，更具体的说是涉及一种路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的制备方法。

技术介绍

[0002]路易斯安娜鸢尾(Iris hybrids
‘
Louisiana
’
)相对于旱生鸢尾，抗性更强，适应能力更广，种植于水体中的湿生鸢尾能够降解或吸附污染水体中的重金属，对富营养化的污水具有一定的修复作用。研究水培无菌路易斯安娜鸢尾，一方面可用作科研材料，研究路易斯安娜鸢尾在水体净化方面的作用机理，因湿生栽培时存在微生物等环境因子干扰，且诱导水生根存在一定的难度，水培无菌苗可以很好解决这两个问题；另一方面，路易斯安娜鸢尾具有良好的观赏性及实用性。
[0003]但实生苗繁殖速度慢，产量低，而通过组培快繁，可在短时间内获得大量的植株，且水培苗对环境的适应性强，可应用在水体修复工程中。然而，现有培养基均为固体培养基，在生根培养阶段诱导出的根系并不适宜水培，瓶苗后续需要做水培实验的话，仍需诱导水生根系，不仅增加污染的风险，还大大降低组培苗的存活率。
[0004]因此，如何提供一种路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的制备方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的制备方法。所获得的无菌苗是用作科学研究的重要材料，可有效去除植株表面微生物对实验的干扰作用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的培养基，包括液体培养基，液体培养的原料：NH4NO
3 825 mg/L、KNO
3 950 mg/L、MgSO
4 7H2O 185mg/L、KH2PO
4 85mg/L、CaCl
2 2H2O 220mg/L、KI 0.83mg/L、H3BO
3 6.2 mg/L、MnSO
4 4H2O 22.3mg/L、ZnSO
4 7H2O 8.6mg/L、Na2MoO
4 2H2O 0.25mg/L、CuSO
4 5H2O 0.025mg/L、CoCl
2 6H2O 0.025mg/L、FeSO
4 7H2O 13.9mg/L、Na2‑
EDTA 2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L，以诱导培养基总质量计，6
‑
苄氨基嘌呤0.05mg/L、NAA 0.5mg/L、1％蔗糖、0.65％琼脂；调pH至5.8。
[0008]优选的：还包括组合使用的诱导培养基和增殖培养基；诱导培养基的原料：NH4NO
3 825mg/L、KNO
3 950mg/L、MgSO
4 7H2O 185mg/L、KH2PO
4 85mg/L、CaCl
2 2H2O 220mg/L、KI 0.83mg/L、H3BO36.2 mg/L、MnSO44H2O 22.3mg/L、ZnSO
4 7H2O 8.6mg/L、Na2MoO
4 2H2O 0.25mg/L、CuSO
4 5H2O 0.025mg/L、CoCl
2 6H2O 0.025mg/L、FeSO47 H2O 13.9mg/L、Na2‑
EDTA 2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、6
‑
苄氨基嘌呤3mg/L、NAA 0.1mg/L、KT 2mg/L、以诱导培养基总质量计，3％蔗糖、0.65％琼脂；调pH至5.8；
[0009]增殖培养基的原料：NH4NO
3 1700 mg/L、KNO
3 1900 mg/L、MgSO
4 7H2O 370mg/L、KH2PO
4 170 mg/L、CaCl
2 2H2O 440mg/L、KI 0.83mg/L、H3BO
3 6.2mg/L、MnSO
4 4H2O 22.3mg/L、ZnSO
4 7H2O 8.6mg/L、Na2MoO
4 2H2O 0.25mg/L、CuSO
4 5H2O 0.025mg/L、CoCl
2 6H2O 0.025mg/L、FeSO
4 7H2O 27.8mg/L、Na2‑
EDTA 2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、6
‑
苄氨基嘌呤2mg/L、NAA 0.1mg/L、KT 2mg/L、以诱导培养基总质量计，3％蔗糖、0.65％琼脂，调pH至5.8。
[0010]本专利技术还提供了一种基于上述培养基的路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的制备方法，包括以下步骤：
[0011](1)采集路易斯安娜鸢尾植株，洗净，茎基部去叶片、根部，使横走茎光滑，吹干得物A；
[0012](2)将物A表面消毒，无菌条件下，冲洗，灭菌，得物B；
[0013](3)物B表面消毒，密封，超声波震动清洗，冲洗风干，得芽体；
[0014](4)将芽体切除多余的叶柄及茎部组织，留中上部芽体，插入灭菌诱导培养基中培养；
[0015](5)待芽长出后，取出外植体，切除黑化老化部位，转入灭菌增殖培养基中培养得转接后苗；
[0016](6)将转接后苗培养至完整水培植株，切除老叶及黑腐组织后，转入液体培养基中培养；
[0017](7)培养水培植株并诱导出根系。
[0018]进一步的，步骤(1)采集的路易斯安娜鸢尾植株标准：健康粗壮；无病虫害；
[0019]步骤(3)～(7)均需保持无菌环境；
[0020]步骤(4)仅保留中间最大的芽；长度为1cm；
[0021]切除黑化老化部位的工具：解剖刀；
[0022]重复步骤(5)，可实现植株的增殖，获得一定数量的增殖苗后，可进入下一步。
[0023]使用的设备：超净工作台。
[0024]优选的：步骤(1)茎基部：距离茎基部2～3cm处；使横走茎光滑：去除横走茎表面的节。
[0025]优选的：步骤(2)具体为：将步物A用洗涤剂清洗1～2遍，风干后，用75％浓度的酒精表面消毒1～1.5min，无菌条件下：用无菌水冲洗，灭菌吸水纸吸干。
[0026]优选的：步骤(3)消毒：0.1％升汞，使用前加入吐温
‑
20；消毒时间：5min；超声波震动清洗，清洗时间:3min；冲洗风干：用无菌水冲洗3遍，灭菌吸水纸吸干，风干。
[0027]进一步的，升汞和吐温
‑
20的用量比：100ml：4滴，可适当微调；
[0028]超声：40K本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的培养基，其特征在于，包括液体培养基，所述液体培养的原料：NH4NO
3 825mg/L、KNO
3 950mg/L、MgSO47H2O 185mg/L、KH2PO
4 85mg/L、CaCl22H2O 220mg/L、KI 0.83mg/L、H3BO
3 6.2mg/L、MnSO44H2O 22.3mg/L、ZnSO47H2O 8.6mg/L、Na2MoO42H2O 0.25mg/L、CuSO45H2O 0.025mg/L、CoCl26H2O 0.025mg/L、FeSO47H2O 13.9mg/L、Na2‑
EDTA 2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L，以诱导培养基总质量计，6
‑
苄氨基嘌呤0.05mg/L、NAA 0.5mg/L、1％蔗糖、0.65％琼脂；调pH至5.8。2.如权利要求1所述的一种路易斯安娜鸢尾水培无菌苗的培养基，其特征在于，还包括组合使用的诱导培养基和增殖培养基；所述诱导培养基的原料：NH4NO
3 825mg/L、KNO
3 950mg/L、MgSO47H2O 185mg/L、KH2PO
4 85mg/L、CaCl22H2O 220mg/L、KI 0.83mg/L、H3BO
3 6.2mg/L、MnSO44H2O 22.3mg/L、ZnSO47H2O 8.6mg/L、Na2MoO42H2O 0.25mg/L、CuSO45H2O 0.025mg/L、CoCl26H2O 0.025mg/L、FeSO47H2O 13.9mg/L、Na2‑
EDTA 2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、6
‑
苄氨基嘌呤3mg/L、NAA 0.1mg/L、KT 2mg/L、以诱导培养基总质量计，3％蔗糖、0.65％琼脂；调pH至5.8；所述增殖培养基的原料：NH4NO
3 1700mg/L、KNO
3 1900mg/L、MgSO47H2O 370mg/L、KH2PO
4 170mg/L、CaCl22H2O 440mg/L、KI 0.83mg/L、H3BO
3 6.2mg/L、MnSO44H2O 22....

【专利技术属性】
技术研发人员：尤毅，陈金峰，吴昊平，顾文杰，邹春萍，秦红杰，郝贝贝，钟荣辉，彭焕龙，杨思雨，陈香罗，陈德华，刘晔，
申请(专利权)人：广东省农业科学院农业资源与环境研究所广东智境生态科技有限公司，
类型：发明
国别省市：