mgr-mir-9在调控拟禾本科根结线虫侵染水稻能力中的应用制造技术

本发明专利技术公开了mgr

【技术实现步骤摘要】
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9在调控拟禾本科根结线虫侵染水稻能力中的应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及mgr
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9在调控拟禾本科根结线虫侵染水稻能力中的应用。

技术介绍

[0002]miRNA是一类内源性的单链小RNA，常通过碱基互补配对的方式作用于靶基因从而调控基因的表达。其最早是在秀丽隐杆线虫体内被发现的，随后在包括果蝇、人类、斑马鱼、拟南芥、南方根结线虫线虫等动植物中被发现。
[0003]蛋白质二硫键异构酶(简称PDI)隶属于硫氧还蛋白超家族，能够催化氧化、还原和异构化三种反应，广泛存在于真核生物中，而且许多生物体内的PDI从原核生物到真核生物保守进化。PDI包括两个具有催化活性的硫氧还蛋白结构域，即结构域a和a'，每个结构域上包含一个CGHC(Cys
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Gly
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His
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Cys)的活性位点，并被两个同源但不活跃的内部结构域b和b'分开。前期的相关研究发现，拟禾本科根结线虫(Meloidogyne graminicola)的二硫键异构酶基因(MgPDI)在拟禾本科根结线虫寄生前二龄幼虫的亚腹食道腺细胞中表达，并在线虫寄生5dpi(par
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J2)表达量达到最高，外源H2O2的处理可以诱导MgPDI基因的表达，通过dsMgPDI处理将MgPDI基因干扰后能降低拟禾本科根结线虫对外源H2O2的耐受力；此外MgPDI基因被干扰后，拟禾本科根结线虫的繁殖因子降低(Tian Z L.,Wang Z H.,Maria M.,Qu,N.Zheng J W.Meloidogyne graminicola protein disulfide isomerase may be a nematode effector and is involved in protection against oxidative damage.Scientific Reports.2019)。而目前，还没有调控MgPDI基因的miRNA的相关报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了mgr
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9在调控拟禾本科根结线虫侵染水稻能力中的新用途，填补了拟禾本科根结线虫miRNA研究方面的空白，同时丰富了根结线虫的miRNA数据，对拓展植物寄生线虫miRNA研究具有重要影响。
[0005]具体技术方案如下：
[0006]本专利技术提供了mgr
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9在调控拟禾本科根结线虫侵染水稻能力中的应用，所述mgr
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9的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]本专利技术中起到调控作用的是拟禾本科根结线虫中存在的成熟的miRNA。本专利技术利用二代测序技术，对拟禾本科根结线虫的miRNA进行了鉴定，并对参与调控MgPDI基因的miRNA进行了筛选和功能研究。
[0008]进一步地，所述mgr
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9通过调控MgPDI基因的表达量来调控禾本科根结线虫侵染水稻的能力。
[0009]进一步地，所述MgPDI基因的GenBank号为MH392200。
[0010]进一步地，所述调控的方式为：通过mgr
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9mimics浸泡线虫的方式，提高线虫体内mgr
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9的积累量，mgr
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9降低MgPDI基因的表达量，从而降低拟禾本科根结线虫
侵染水稻的能力。
[0011]所述mgr
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9mimics为化学合成的生物大分子，模拟线虫体内的内源miRNA，序列与mgr
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9相同。
[0012]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0013]本专利技术利用已经注释和克隆得到的拟禾本科根结线虫MgPDI序列进行了预测，首次筛选到可能调控MgPDI表达的mgr
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9，并对两者的互作关系进行了验证。发现mgr
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9的表达模式和MgPDI表达模式恰好相反，推测拟禾本科根结线虫可能通过抑制mgr
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9的表达来上调MgPDI，进而调控其侵染水稻。
附图说明
[0014]图1为拟禾本科根结线虫小RNA测序raw data的长度分布图；
[0015]其中，A:J2组raw reads长度分布；B:J3/J4组raw reads长度分布；横坐标表示reads长度，纵坐标表示不同长度下reads的总条数。
[0016]图2为拟禾本科根结线虫miRNA的长度分布图；
[0017]其中，横坐标表示reads长度，纵坐标表示不同长度下miRNA数量。
[0018]图3为拟禾本科根结线虫差异表达miRNA的定量检测结果；
[0019]其中，横坐标表示不同龄期，纵坐标表示miRNA的相对表达量(***表示p<0.001,**表示p<0.01)。
[0020]图4为拟禾本科根结线虫体内新miRNA的定量检测结果；
[0021]其中，横坐标表示不同龄期的拟禾本科根结线虫，纵坐标表示miRNA的相对表达量。
[0022]图5为拟禾本科根结线虫mgr
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9与MgPDI互作的结果；
[0023]其中，A：mgr
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9发夹结构；B：mgr
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9在MgPDI1的靶标位点及靶位点的突变体；C：mgr
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9与MgPDI互作的体外验证。
[0024]图6为mgr
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9参与调控线虫侵染的结果；
[0025]其中，A:不同处理mgr
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9的相对表达量；B：不同处理MgPDI的相对表达量；C:不同处理组线虫的繁殖因子；“*”代表p<0.05；“**”代表p<0.01。
具体实施方式
[0026]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步描述，以下列举的仅是本专利技术的具体实施例，但本专利技术的保护范围不仅限于此。
[0027]下列实施例所涉及的材料：
[0028]供试线虫及培养：拟禾本科根结线虫浙江金华群体(ZJJH)，接种在水稻感病品种日本晴(Oryza.sativa cv.
‘
Nipponbare...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.mgr
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9在调控拟禾本科根结线虫侵染水稻能力中的应用，其特征在于，所述mgr
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9的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述mgr
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9通过调控MgPDI基因的表达量来调控拟禾本科根结线虫侵染水稻的能力。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：田忠玲，都韶婷，周佳艳，刘立娟，
申请(专利权)人：浙江树人学院，
类型：发明
国别省市：